Oogsten van adeno-geassocieerd virus uit getransfecteerde zoogdiercellen

Begin met een meerlaagse celkamer met getransfecteerde zoogdiercellen die adeno-geassocieerde virusvectoren produceren. De celkamer helpt bij het genereren van een virale oogst met een hoog rendement.

Schud de kamer krachtig om de adherente cellen los te maken, waardoor virusbevattende cellen en extracellulaire virusdeeltjes in het medium vrijkomen.

Breng de inhoud over naar een buis en centrifugeer deze om de virusbevattende cellen te pelletteren.

Verzamel het supernatant dat het extracellulaire virus bevat en breng dit over in een bewaarflacon.

Resuspendeer het pellet in lysisbuffer en incubeer dit.

Enzymen en detergentia in de buffer lyseren de cellen en laten de intacte intracellulaire virussen vrij in de oplossing.

Centrifugeer het lysaat om het cellulaire debris te pelletten. Verzamel het supernatant dat het virus bevat en voeg dit toe aan dezelfde bewaarfles met het extracellulaire virus.

Bewaar de ruwe virale suspensie bij een lage temperatuur tot aan de verdere zuivering.

Schud na incubatie de celkweekkamer krachtig om de cellen los te maken totdat het medium troebel wordt, en giet dit in vier centrifugebuizen van 500 milliliter.

Pellet de cellen door centrifugatie bij 18,000 x g g