JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 3:35 min. • August 31st, 2026
Begin met een gefiltreerd cellysaat dat adeno-geassocieerde virus (AAV)-vectoren en contaminanten afkomstig van de gastheer bevat.
Breng het lysaat door een affiniteitskolom op basis van heparine.
De virale capside-eiwitten binden elektrostatisch aan de negatief geladen heparinegroepen.
Spoel de kolom met een buffer om unbound contaminanten te verwijderen.
Breng een buffer met detergent aan om membraanresten op te lossen.
Spoel opnieuw af met de detergentvrije buffer.
Voeg een buffer toe aangevuld met kationen om een ionische omgeving te creëren, en was vervolgens met een buffer met een gemiddelde zoutconcentratie om zwak gebonden onzuiverheden te verwijderen.
Voeg een hoog-zoutbuffer toe om de interacties tussen het capside en heparine te verbreken en de virusdeeltjes te elueren.
Verzamel de elutiefracties die verrijkt zijn met intacte virale deeltjes en breng deze over in centrifugale concentratiebuizen voorzien van filtermembranen.
Centrifugeer de buisjes om overtollige buffer te verwijderen en verzamel vervolgens de geconcentreerde virale fracties in een buisje.
Spoel het membraan met de buffer om resterende virusdeeltjes terug te winnen en de opbrengst te maximaliseren.
Ontdooi het ruwe
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's