Lentivirale vector-gebaseerde transductie van bevruchte rattenembryo's

Neem een microinjectieschaaltje met in het midden een druppel embryo-kweekmedium, bedekt met minerale olie om verdamping te voorkomen.

Plaats de schaal onder een omgekeerde microscoop.

Plaats een microinjectiecapillair en een houdpipet op een micromanipulatie-opstelling onder de microscoop.

De microinjectiecapillair wordt gevuld met een suspensie van lentivirale vectoren die het transgen dragen.

Breng vervolgens de bevruchte rattenembryo's over naar het medium.

Fixeer een embryo met de houdpipet door zuiging toe te passen.

Breng bij een hogere vergroting de microinjectiecapillair door de extracellulaire glycoproteïnehuls van het embryo, de zona pellucida, en injecteer de lentivirale suspensie in de perivitelline ruimte.

Breng de geïnjecteerde embryo's vervolgens over naar een kweekschaal en incubeer deze.

Het virus dringt het embryo binnen en laat zijn genoom, dat het transgen bevat, vrij in het cytoplasma.

Vervolgens wordt het omgezet in DNA via reverse transcriptie en integreert het in het genoom van het embryo, waarbij het transgen wordt ingebouwd.

De getransduceerde embryo's zijn nu klaar voor verdere verwerking.

Voor micro-injectie van lentivirale vectoren onder de zona pellucida van emb