JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 2:21 min. • September 30th, 2026
Begin met een gezuiverde fractie van het virale integrase-enzym die residuele bacteriële nuclease als contaminant bevat.
Laad het monster op een heparin-Sepharose kolom die vooraf is geëquilibreerd met een zoutarme bindingsbuffer.
Terwijl het mengsel door de kolom stroomt, bindt de integrase sterker aan het heparine-ligand dan de verontreinigende nuclease.
Verhoog vervolgens geleidelijk de zoutconcentratie in de buffer die door de kolom stroomt.
Bij lage zoutconcentraties elueren zwak gebonden nucleasen als eerste, terwijl sterk gebonden integrase later elueert bij hogere zoutconcentraties.
Verzamel de geëlueerde fracties afzonderlijk om de contaminerende nuclease van de integrase te scheiden.
Voeg SDS-PAGE-monsterbuffer toe aan elke fractie en verhit deze om de eiwitten te denatureren. Breng de monsters aan op een SDS-PAGE-gel en voer de elektroforetische scheiding uit.
Observeer de gekleurde gel.
Identificeer de fracties die een prominente integraseband bevatten zonder zichtbare contaminerende eiwitten, wat duidt op schijnbare zuiverheid.
Om heparin-affiniteitschromatografie-fractionering van de prototype foamy virus integrase uit te voeren, dient de natriumchlorideconcentratie van het mo
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's