JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 4:09 min. • September 30th, 2026
Begin met een multiwellplaat met zoogdiercellen die zijn blootgesteld aan een recombinant vacciniavirus.
Het recombinante virus codeert voor groene, rode en blauwe fluorescerende eiwitten, elk aangestuurd door een stadiumspecifieke promotor om respectievelijk de vroege, intermediaire en late stadia van genexpressie te volgen.
Het virus dringt de cel binnen via receptor-gemedieerde endocytose en laat zijn virale kern vrij in het cytoplasma.
De transcriptionele machinerie in de virale kern stuurt de expressie van vroege genen aan, wat wordt gekenmerkt door groene fluorescentie.
Vroege eiwitten bemiddelen het uitpakken van het genoom, waardoor viraal DNA in het cytoplasma vrijkomt, waar DNA-polymerase het virale genoom repliceert.
Vervolgens produceert de expressie van intermediaire genen, aangegeven door rode fluorescentie, transcriptiefactoren die essentieel zijn voor de activering van late genen.
Vervolgens genereert de expressie van late genen, aangegeven door blauwe fluorescentie, structurele eiwitten die noodzakelijk zijn voor de vorming van mature virionen.
Voeg een fixatief toe en incubeer kort om de fluorescentie te behouden.
Verwijder het fixatief en voeg vervolgens een buffer toe.
G
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's