Generatie van recombinant lentivirus in zoogdiercellen

Begin met een cultuur van zoogdiercellen in een medium met een laag serumgehalte.

Voeg het DNA-lipidencomplex toe aan de cellen.

Het complex bevat lentivirale verpakkingsplasmiden en een expressieplasmid dat het gen van belang codeert.

Incubeer om de cellulaire opname van het complex mogelijk te maken.

Vervang het medium om resterend transfectiereagens te verwijderen en incubeer.

Binnen in de cel treden de plasmide-DNA's de nucleus binnen en sturen zij de synthese aan van viraal RNA dat het gen van belang draagt, evenals virale componenten, waaronder capsid- en envelop-eiwitten, reverse transcriptase en integrase.

Deze componenten assembleren tot recombinante lentivirale deeltjes die uitknopten uit het membraan van de gastheer.

Verzamel het medium dat de vrijgekomen virusdeeltjes bevat.

Centrifugeer om celresten te pelletteren en filter het virale supernatant om resterende contaminanten te verwijderen.

Centrifugeer op hoge snelheid om intacte viruspartikels te pelletteren.

Verwijder het supernatant en resuspendeer de virale pellet in een klein volume vers medium.

Bewaar het geconcentreerde recombinante lentivirus bij een lage temperatuur voor downstream-applicaties.

Om te beginnen met de produ