JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 3:08 min. • September 30th, 2026
Begin met een minigenoomplasmid dat het genoom van het Ebolavirus nabootst en virale structurele eiwitten, glycoproteïnen en een luciferase-reporter codeert.
Voeg helperplasmiden toe die coderen voor de T7-polymerase, het virale nucleoproteïne en de virale polymerasecomponenten die essentieel zijn voor replicatie en transcriptie.
Voeg een lipidengebaseerd transfectiereagens toe aan de plasmiden, vortex en incubeer het mengsel om plasmide-lipidecomplexen te vormen.
Voeg dit mengsel toe aan menselijke niercellen, meng voorzichtig en incubeer.
Het lipidecomplex fuseert met de cel. Plasmiden treden de cel binnen.
De helperplasmiden coderen voor hun respectievelijke eiwitten.
Vervolgens transcribeert T7-polymerase het minigenoom tot viraal genomisch RNA, dat onmiddellijk wordt omhuld met nucleoproteïnen.
Het virale polymerasecomplex bindt aan het virale genomische RNA en transcribeert dit naar virale mRNA's. Deze mRNA's produceren virale structurele eiwitten en glycoproteïnen.
De virale eiwitten assembleren tot niet-pathogene, transcriptie- en replicatie-competente virus-achtige partikels of trVLPs die het luciferase-reportergen bevatten.
Vul aan met vers medium om de levensvatbaarheid van de ce
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's