Evaluatie van de immunomodulerende activiteit van een viraal gecodeerde bispecifieke T-cel-engager

Begin met een testputje met genetisch gemodificeerde tumorcellen die een doelantigeen tot expressie brengen, en een controleputje met tumorcellen waarin het antigeen ontbreekt.

Gebruik een bispecifieke T-cel-engager (BTE) die is gecodeerd door een viraal transgen, met twee bindingsplaatsen: één voor het doelantigeen en één voor een T-cel-specifieke receptor.

Voeg de BTE en T-cellen toe aan de wells en incubeer.

In de testmonster crosslinkt de BTE de tumorcel en de T-cel, waardoor de T-cel wordt geactiveerd om cytolytische granula vrij te geven.

Dit lyseert de tumorcel, waarbij een intracellulair enzym vrijkomt.

In de controle bindt de BTE alleen aan de T-cel, waardoor lyse van de tumorcel wordt voorkomen.

Centrifugeer en verzamel het supernatant.

Voeg een substraat toe en incubeer.

Het enzym katalyseert het substraat tot een roodgekleurd product.

Voeg een stopoplossing toe en meet de kleurintensiteit.

Een hogere intensiteit in de testmonster bevestigt de doelspecifieke immunomodulerende activiteit van de BTE.

Om te beginnen met de evaluatie van de door BTE geïnduceerde celgemedieerde cytotoxiciteit via LDH-vrijgave, isoleer eerst de uitgescheiden transgeenproducten die tot expressie komen doo