JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 2:56 min. • September 30th, 2026
Neem een suspensie die een diverse mengeling van virussen bevat, samen met contaminanten zoals defecte virusdeeltjes die geen nucleïnezuren bevatten.
Deze virussen zijn vooraf gekleurd met een fluorescerende kleurstof die bindt aan nucleïnezuren om virussen met genomen te onderscheiden van contaminanten.
Leid de suspensie door een fluorescence-activated cell sorter, waarbij elk deeltje wordt geanalyseerd op lichtverstrooiing en fluorescentie-intensiteit.
Het lichtstrooiingssignaal weerspiegelt de partikelgrootte, terwijl de fluorescentie-intensiteit de hoeveelheid nucleïnezuren aangeeft.
Sluit contaminanten uit die geen fluorescentie vertonen en aggregaten die een abnormaal hoge fluorescentie vertonen.
Selecteer enkele virusdeeltjes die een genoom bevatten en sorteer deze direct op een met agarose gecoate chambered slide voor immobilisatie.
Bedek elke well met extra agarose om de virussen in te sluiten.
Deze zijn nu klaar voor amplificatie en analyse van het genoom van individuele virussen.
Om virussen te sorteren met een flowcytometer die is uitgerust met aangepaste forward scatter fotomultiplicatoren of FSC-PMT. Begin met het verdunnen van de virusdeeltjes in 0,1 micron gefilterde Tris-E
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's