JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 2:37 min. • September 30th, 2026
Begin met een supernatant van een mammalische celkweek die het hepatitis C-virus bevat.
Verdun de virale suspensie serieel in groeimedium.
Inoculeer elke verdunning op een monolaag hepatomcellen en incubeer.
Het virus dringt de cellen binnen, laat zijn genoom vrij en tot expressie van virale eiwitten, waaronder het niet-structurele replicatie-eiwit.
Dit produceert nieuwe virusdeeltjes die uitstoten en naburige cellen infecteren, waardoor foci van geïnfecteerde cellen ontstaan.
Verwijder na incubatie het medium en voeg een fixatief toe. Incubeer bij een lage temperatuur om de cellen te fixeren en het membraan te permeabiliseren.
Was de cellen en voeg een blokkeringsbuffer toe om aspecifieke antilichaambinding te voorkomen.
Voeg primaire antilichamen toe die binden aan het niet-structurele replicatieprotein.
Was om ongebonden antilichamen te verwijderen.
Voeg vervolgens fluorofoor-geconjugeerde secundaire antilichamen toe die binden aan de primaire antilichamen.
Was opnieuw om ongebonden antilichamen te verwijderen. Voeg een DNA-bindende kleurstof toe om de kernen te kleuren.
Visualiseer onder een fluorescentiemicroscoop en kwantificeer de fluorescente foci om de virusconcentratie van het super
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's