JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 4:29 min. • September 30th, 2026
Begin met dekglasplaatjes met zoogdiercellen die vooraf zijn behandeld met een uridine-analogon, waarbij één groep met het virus is geïnfecteerd en de andere groep niet is geïnfecteerd.
In virus-geïnfecteerde cellen binden virale eiwitten aan het transcriptiemachinerie van de gastheer en remmen zij de RNA-productie van de gastheer, terwijl in niet-geïnfecteerde cellen de RNA-synthese ononderbroken blijft.
Was met een buffer. Voeg paraformaldehyde toe om de cellen te fixeren en was ze vervolgens. Voeg een detergent toe om de celmembranen te permeabiliseren en was ze vervolgens.
Breng de dekglasjes over naar een vochtkamer.
Voeg de click-kleuringsoplossing toe die fluorescent azid, een katalysator en een reduceermiddel bevat, en incubeer vervolgens in het donker.
Het reduceermiddel activeert de katalysator, waardoor het fluorescerende azide kan binden aan het uridine-gelabelde nascente RNA.
Spoel de dekglasjes in buffer, dip ze in water en verwijder het overtollige vocht.
Monteer de dekglasjes op een objectglas met behulp van een antifade monteermiddel en laat ze aan de lucht drogen.
Onder een omgekeerde fluorescentiemicroscoop duidt een verminderde signaalintensiteit in geïnfecteerde cellen
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's