JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 3:35 min. • September 30th, 2026
Neem mammaliecellculturen. Infecteer de testcultuur met een virus en laat de controle ongeïnfecteerd.
Laat het virus adsorberen en vervang vervolgens het medium.
Het virus dringt de cel binnen en laat zijn genoom vrij. Het virus tot expressie brengt een virulentie-eiwit dat gastheer-transcriptiefactorcomplexen destabiliseert en de transcriptie van de gastheer onderdrukt.
De controlecellen behouden echter een actieve transcriptie.
Voeg een nucleoside-analoog toe dat wordt ingebouwd in nascent RNA's.
Oogst de gewassen cellen.
Fixeer de cellen om hun structuur te behouden. Centrifugeer de cellen en was ze met een buffer.
Voeg een detergent toe om de cellen te permeabiliseren en was ze vervolgens.
Voeg een chemisch gemodificeerde fluorescerende kleurstof toe die reageert met het nucleoside-analoog om nascente RNA's te labelen; was vervolgens.
Voer een immunokleuring uit om virale antigenen fluorescent te labelen, waarmee de geïnfecteerde cellen worden gemarkeerd.
Gebruik flowcytometrie om de fluorescentie van gastheer-RNA en viraal antigeen te detecteren.
Vergelijk de RNA-fluorescentie-intensiteit tussen de controle- en de testpopulaties. Een verschuiving naar beneden in de testpopulatie, wat dui
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's