JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 3:36 min. • September 30th, 2026
Begin met een cultuur van menselijke nierepitheelcellen gekweekt in een nutriëntenrijk medium.
Vervang het medium door een medium met een verlaagd serumgehalte om seruminterferentie te minimaliseren en de transfectie-efficiëntie te verbeteren.
Voeg het transfectiemengsel druppelsgewijs toe aan de cellen.
Het mengsel bevat een retroviraal DNA-construct met het gen van belang, een verpakkingsplasmide dat essentiële virale eiwitten levert, en polyethylenimine, dat complexen vormt met het plasmide-DNA om de transfectie te vergemakkelijken.
Incubeer de cellen om de opname van het DNA-complex mogelijk te maken.
Vervang het medium om residuele transfectiereagentia te verwijderen.
Binnen in de cel komt het plasmide-DNA in de nucleus terecht, waar het de productie van virale eiwitten en viraal RNA dat het gen van belang draagt, aanstuurt.
Deze componenten assembleren en knoppen af in het medium als recombinante retrovirale deeltjes.
Verzamel het virushoudende medium en bewaar dit kortstondig bij een lage temperatuur om de virale stabiliteit te behouden.
Centrifugeer om het celdebris te pelletteren.
Verdeel het virale supernatant in aliquoten, vries deze snel in met vloeibare stikstof en bewaar ze bi
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's