JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 3:44 min. • September 30th, 2026
Begin met een plasmidmengsel dat helperplasmiden bevat die coderen voor RSV-replicatie- en transcriptie-eiwitten en een apart plasmid dat een volledige, GFP-expresserende RSV-antigenoom-cDNA draagt.
Elk plasmide staat onder controle van een T7-promotor.
Voeg een liposoom-gebaseerd transfectiereagens toe en incubeer om complexvorming mogelijk te maken.
Introduceer deze complexen in genetisch gemodificeerde niercellen van hamsters die T7 RNA-polymerase tot expressie brengen en incubeer.
De plasmidcomplexen dringen de cellen binnen, waar T7 RNA-polymerase de RSV-plasmiden transcribeert.
Dit produceert virale mRNA's die coderen voor replicatie- en transcriptie-eiwitten en genereert positieve-sense RSV-antigenomisch RNA.
Met behulp van de machinerie van de gastheer produceren deze mRNA's virale replicatie- en transcriptie-eiwitten die een functioneel RSV-polymerasecomplex vormen.
Het RSV-polymerasecomplex zet vervolgens het RNA met positieve polariteit om in viraal genomisch RNA.
Dit genomische RNA stuurt de synthese van virale mRNA's aan, die structurele eiwitten en GFP coderen.
Onder een fluorescentiemicroscoop bevestigt groene fluorescentie de virale genexpressie en de start van de productie
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's