JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 4:32 min. • September 30th, 2026
Maak seriële verdunningen van een suspensie van het respiratoir syncytiaal virus (RSV).
Inoculeer elke verdunning in afzonderlijke putjes van een multi-well plaat die is gezaaid met RSV-gevoelige zoogdiercellen.
Incubeer om het virus de kans te geven zich te binden aan celoppervlakterecetoren, membraanfusie te mediëren en het genoom in het cytoplasma vrij te geven.
Breng vervolgens een semi-solide overlay-medium aan om virale diffusie te beperken en incubeer.
De geïnfecteerde cellen brengen het virale fusie-eiwit tot expressie dat cel-naar-cel fusie medieert, waardoor meerkernige structuren ontstaan, genaamd syncytia.
Naarmate de virale replicatie vordert, degenereren deze syncytia en vormen ze heldere zones die bekendstaan als plaques.
Schud de plaat voorzichtig om de overlay te verwijderen en spoel de cellen om resten te elimineren.
Breng een kleurstof aan om levensvatbare cellen te kleuren, waarbij de plaques ongekleurd blijven.
Verwijder de kleurstof, decomprimeer de plaat in bleekmiddel en spoel af met water.
Laat de plaat aan de lucht drogen.
Selecteer wells met duidelijke plaques en tel deze om de virale titer te bepalen.
Om een plaque-titratie-assay uit te voeren, maakt u eerst 2X min
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's