JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 2:31 min. • September 30th, 2026
Begin met een multiwellplaat met epitheelcellen die zijn geïnfecteerd met een genetisch gemodificeerd virus.
Het virus draagt een transgen dat codeert voor een luciferase-enzym.
Neem verse culturen van epitheelcellen in een witte multi-wellplaat.
Breng het supernatant met onbekende virusconcentraties over naar de witwandige wells.
Voeg gelijktijdig bekende concentraties van het virus toe als standaarden.
Centrifugeer de plaat om een nauw contact tussen de viruspartikels en de receptoren op het oppervlak van de gastheercel te bevorderen, en incubeer vervolgens.
Het virus dringt de gastheercel binnen en brengt zijn negatief-strengs RNA-genoom over.
De virale RNA-polymerase transcribeert vervolgens het genoom naar mRNA.
Met behulp van de cellulaire machinerie van de gastheer wordt het mRNA vertaald in virale eiwitten, waaronder luciferase.
De hoeveelheid luciferase die zich in de gastheercel ophoopt, neemt toe bij een toenemende virale concentratie.
De monsters zijn nu gereed voor verdere schatting van de virale concentraties met behulp van de luciferase-assay.
Bereid een standaardcurve van VSV-Delta-51 voor in serumvrij DMEM, zodanig dat de uiteindelijke concentratie plaque-vormende eenheden pe
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's