JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 2:53 min. • September 30th, 2026
Begin met epitheelcellen die zijn geïnfecteerd met vacciniavirus en getransfecteerd met een recombinatieplasmidvector.
De vector bevat een groen fluorescent gelabeld doelgen en een rood fluorescent gelabeld metabolisch selectiegen onder een virale promoter.
Tijdens de replicatie van het viraal DNA wordt de plasmidcassette in het virale genoom ingevoegd.
Verzamel de cellen in serumvrij medium.
Gebruik vries-dooi-cycli om de cellen te lyseren en de virussen vrij te laten.
Bereid seriële verdunningen van het lysaat voor.
Infecteer verse epitheelcellen met het verdunde lysaat om afzonderlijke individuele plaques te verkrijgen.
Voeg medium toe dat serum bevat voor de overleving van de cellen, samen met een metabolisch selectiereagens, en incubeer vervolgens.
Het selectiereagens remt enzymen die betrokken zijn bij de nucleotidesynthese. Alleen geïnfecteerde cellen die het metabole selectiegen dragen, brengen een alternatief enzym tot expressie dat nucleotidesynthese mogelijk maakt, waardoor zij kunnen overleven.
Verwijder het medium en observeer onder een fluorescentiemicroscoop.
De aanwezigheid van zowel rode als groene fluorescentie in een plaque duidt op een succesvolle integratie van de casset
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's