JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 3:27 min. • September 30th, 2026
Begin met suspensies van gemuteerde virusachtige deeltjes (VLPs) die zijn gezuiverd uit geïnfecteerde tabaksbladeren.
De gemuteerde VLP's bevatten cysteïneresten die genetisch zijn ingebracht op specifieke posities in het virale kapproteïne.
Voeg een met maleïmide geconjugeerde fluorescente kleurstof toe en incubeer het mengsel in het donker.
Het maleïmide bindt uitsluitend aan de cysteïneresiduen die op het oppervlak van de VLP zijn blootgesteld, terwijl cysteïnes die in de proteïnestructuur zijn ingebed ontoegankelijk blijven en ongelabeld blijven.
Voeg een reducerend middel toe om niet-gereageerde kleurstof te blokkeren en aspecifieke labeling te voorkomen.
Laad de monsters in ontzoutingskolommen gevuld met een poreuze hars en centrifugeer vervolgens om de gelabelde VLPs te zuiveren.
De niet-gereageerde kleurstoffen en reducerende middelen diffunderen in de poreuze harsbolletjes en worden daar vastgehouden, terwijl de grotere VLPs uit de poriën worden uitgesloten en als eerste elueren.
De fluorescentielabelled VLPs kunnen nu worden geanalyseerd met behulp van gelelektroforese.
Fluorescerende banden op de gel tonen gelabelde mutanten met cysteine-residuen die aan het oppervlak zijn bloot
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's