JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 3:41 min. • September 30th, 2026
Neem een buis met een startcultuur van gemodificeerde E. coli-cellen, die het door de lac-operator gereguleerde T7-polymerasegen samen met een expressieplasmide bevatten.
Het plasmide bevat een gen dat codeert voor een kapproteïne afgeleid van bacteriofaag Qβ.
Dit gen wordt gereguleerd door een T7-promotor en lac-operator.
Overbreng de cultuur naar een kolf met een medium.
Incubeer onder schudding om de bacteriële groei te bevorderen.
Voeg een synthetisch analoog van allolactose toe dat de lac-repressor inactiveert, waardoor de expressie van T7-polymerase wordt geactiveerd.
De T7-polymerase bindt vervolgens aan de T7-promotor op het plasmide en transcribeert het gen voor het kappeiwit, dat wordt vertaald om het kappeiwit te produceren.
Deze kapproteïnen assembleren spontaan tot virusachtige deeltjes (VLPs) die niet-infectieuze steigers vormen.
Breng de cultuur over naar centrifugeflessen.
Centrifugeer om de cellen te pelletteren.
Gooi het supernatant weg en breng de pellet over naar een buis.
De celpellet, die intracellulaire VLP's bevat, is gereed voor zuivering.
Voordat u begint met de procedure voor de expressie van de Q-Beta-bacteriofaag, reinigt u het werkblad met een 1:1 bleekmiddel:etha
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's