JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 3:51 min. • September 30th, 2026
Begin met virus-achtige partikels, of VLP's, die disulfidebruggen bevatten die aan het oppervlak van het capside zijn blootgesteld.
Voeg een reduceermiddel toe om de disulfidebindingen te splitsen, waardoor vrije thiolgroepen ontstaan terwijl de capsidestructuur behouden blijft.
Combineer de gereduceerde VLP's met een thiol-reactief polyethyleenglycol, of PEG-linker, om reoxidatie van thiol te voorkomen.
De PEG-linker overbrugt elk thiolpaar opnieuw door twee covalente bindingen te vormen.
Deze covalente conjugatie vormt ook een fluorescerende structuur die heldergeel verschijnt onder UV-verlichting.
Roteer het mengsel gedurende een langere periode om volledige conjugatie mogelijk te maken.
Purificeer de ge-PEGyleerde VLP's middels centrifugale filtratie door niet-gereageerde kleine moleculen te verwijderen, terwijl de intacte conjugaten behouden blijven.
Voer een niet-reducerende SDS-PAGE uit om de PEG-koppeling te detecteren, wat wordt aangegeven door een fluorescerende band van het mantelproteïne.
Beoordeel de structurele integriteit met behulp van native agarosegelelektroforese, waarbij vergelijkbare banden voor PEGyloïde en niet-PEGyloïde VLP's de aanwezigheid van intacte VLP's bevest
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's