JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 3:06 min. • September 30th, 2026
Begin met een adherente, virus-permissieve cellaag.
Was de cellen en voeg vervolgens een dissocierend middel toe om ze los te maken.
Centrifugeer en verwierf het supernatant. Was de cellen om het residuele medium te verwijderen.
Resuspendeer de cellen in gebufferde zoutoplossing en breng de cellen vervolgens over naar een cuvette.
Introduce RNA getranscribeerd van een cDNA-kloon van volledige lengte van het Japanse encefalitisvirus (JEV), gedragen in een bacterieel kunstmatig chromosoom.
Pas elektrische pulsen toe om het celmembraan tijdelijk te permeabiliseren, zodat RNA kan binnendringen.
Laat de cellen herstellen en breng ze vervolgens over naar een kweekmedium.
Het geïntroduceerde RNA imiteert inheems viraal RNA om nieuwe virionen te produceren.
Verdun de cellen seriële en plaat ze op verse cellagen.
Incubeer de cellen om de virionen de kans te geven de naburige cellen te infecteren.
Bedek met agarose-medium en incubeer. Het medium vormt een halfvaste laag, waardoor de virale verspreiding naar nabijgelegen cellen wordt beperkt.
De geïnfecteerde cellen lyseren en vormen discrete plaques, wat de succesvolle rescue van infectieus JEV bevestigt.
Begin met BHK-21-cellen die gedurende 24 uur zij
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's