JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 2:36 min. • September 30th, 2026
Begin met een recombinant tot expressie gebracht, RNA-vrij nucleoproteïne-fosfoproteïnecomplex dat specifiek is voor een virus.
Incubeer het complex met virus-specifieke RNA-oligonucleotiden om de assemblage van nucleocapside-achtige partikels te initiëren.
Tijdens de assemblage verdringt het virale RNA het fosforeiwitfragment, waardoor het nucleoproteïne het RNA kan omsluiten en nucleocapside-achtige deeltjes vormt.
Centrifugeer het monster om eventuele neerslag te verwijderen.
Neem een vooraf geëquilibreerde grootte-uitsluitingschromatografiekolom gevuld met een poreuze hars en breng het supernatant hierop aan.
Terwijl het monster door de kolom stroomt, worden grote nucleocapsidecomplexen uit de poriën uitgesloten en elueren deze als eerste.
Eiwitcomplexen van gemiddelde grootte en kleine RNA-moleculen dringen de poriën binnen en elueren later.
Monitor de absorbentie van het eluaat om een elutieprofiel met duidelijke pieken te genereren.
De eerste piek toont geassembleerde nucleocapsiden, gevolgd door kleinere proteïnecomplexen en vrij RNA.
Verzamel de fractie die overeenkomt met de nucleocapside-piek voor validatie en verdere analyse.
Voor de assemblage van virus-specifieke nucleocapsiden
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's