JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 2:37 min. • September 30th, 2026
Begin met een multiwellplaat met epitheelcellen die zijn geïnfecteerd met het zikavirus, een enkelstrengs RNA-virus.
Tijdens de infectie laat het virus het RNA vrij dat een dubbelstrengs RNA- of dsRNA-intermediair vormt.
Om deze dsRNA-intermediaten te detecteren, vervangt u het medium door methanol om de cellen te permeabiliseren en de cellulaire integriteit te behouden.
Verwijder het methanol en was met een buffer.
Voeg een blokkeringsoplossing toe om aspecifieke antilichaambinding te voorkomen.
Voeg een primair antilichaam toe dat specifiek is voor het virale dsRNA.
Incubeer met voorzichtig schudden bij een lage temperatuur om het primaire antilichaam te laten binden aan het virale dsRNA.
Spoel af met een buffer, voeg een secundair antilichaam gekoppeld aan een rode fluorofoor toe en incubeer.
De secundaire antilichamen binden aan de primaire antilichamen.
Was met een buffer en voeg vervolgens een fluorescerende DNA-bindende kleurstof toe om de kern te kleuren.
Observeer onder een fluorescentiemicroscoop om het gelabelde virale dsRNA-intermediair binnen de geïnfecteerde cel te visualiseren.
Verwijder voor de immunocytochemie het medium uit de wells van de 12-wells plaat en voeg één millilit
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's