Name: Het gebruik van een Opknoping Weight System voor Coronary Artery Occlusion in Muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-19T11:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: Leer een hangend-gewichtssysteem voor coronaire arterie-occlusie bij muizen om myocardiale ischemie en ischemische preconditionering in vivo te bestuderen. Deze methode maakt onderzoek naar cardioprotectieve mechanismen mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De huidige studies worden ondersteund door National Heart, Lung, and Blood Institute R01 Grant-HL0921, R01-R01-DK083385 en HL098294 naar HK Eltzschig, de 1K08HL102267-01 naar T. Eckle, en de Stichting voor Anesthesie Onderwijs en Onderzoek Subsidies voor T. Eckle en HK Eltzschig, en American Heart Association Grant aan T. Eckle en HK Eltzschig en een Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) onderzoek fellowship aan M. Koeppen. Wij danken Shelley Eltzschig voor het kunstwerk.

Algemene opmerkingen: Alle handelingen moeten worden uitgevoerd onder een rechtop dissectiemicroscoop (Olympus, SZX10 met Z-Axis Crank Post met STU2 StandBoom voet) en het gebruik van een chirurgische coagulator. Ventilatie is van cruciaal belang voor de procedure en dus een bepaalde hoeveelheid tijd moet worden besteed aan de keuze van de ventilator en het optimaliseren van de ventilatie techniek. Temperatuur, bloeddruk en anesthesie moet stabiel zijn in de hele. 1. Anesthesie, intubatie en Monitoring <ol><li> Gebruik C57BL / 6 muizen die ten minste 10 weken oud. Veroorzaken anesthesie met behulp van natriumpentobarbital bij een dosering van 70 mg / kg lichaamsgewicht ip Behoud anesthesie met ongeveer 10 mg / kg / h natriumpentobarbital. Wees voorzichtig met een overdosis aangezien dit beduidend lager de bloeddruk. Re-dosering van fenobarbital - ook na uur-kan leiden tot ernstige verhoging van de plasmaspiegels. Op basis van een sterk bewijs ten aanzien van isofluraan als cardioprotectief compound adviseren wij het ​​gebruik van de 'inert' en gevestigde pentobarbital in een model voor myocardischemie 46-56. </li><li> Plaats muizen op een temperatuur-gecontroleerde verwarmde tafel (RT, Effenberg, München, Duitsland) met een rectale thermometer probe aan thermische feedback controller om de lichaamstemperatuur te handhaven op 37 ° C. </li><li> Na de anesthesie-inductie veilig muizen in een liggende positie, met de bovenste en onderste ledematen aan de tafel met behulp van een tape en een hechting vastgemaakt aan de enkels. Doe hetzelfde voor het hoofd met behulp van de tanden. Een voldoende straatverbod is belangrijk voor een succesvolle intubatie en goed gecontroleerde chirurgie. Voorafgaand aan de operatie, dekking van de muis met minerale olie om het risico van de muis haar allergie te verminderen. </li><li> Chirurgisch Expose de luchtpijp en het uitvoeren van een tracheale intubatie met behulp van bluntpolyethylene canules (Insyte 22 g, Beckton Dickinson, USA). U moet de naald stomp te kunnen gebruiken als een stilet. </li><li> Trek de tong met behulp van een tang en dan duw in een hoek van 15 graden naar het lichaam. Zelfs na blootstelling van de luchtpijp en het gebruik van een microscoop, kan dit vereist wat training. Wees ervan bewust dat een kleine beschadiging van de luchtpijp kan leiden tot het onvermogen om het dier te ventileren in de hechtdraad. Dus, als u problemen luchtwegproblemen controleer de luchtpijp voor kleine gaatjes. </li><li> Bevestigen de juiste plaatsing van de tube door directe visualisatie van de canule in de luchtpijp eerder blootgesteld boven de carina. </li><li> Sluit de buis aan een ventilator. Wij raden een druk gecontroleerde ventilatie-techniek met behulp van een Servo 900 C van Siemens (DRE Veterinary, USA). Dieren zullen vervolgens worden geventileerd met behulp van piek inspiratoire druk van 10 mbar, de frequentie van 110 ademhalingen / min en een positief eind-expiratoire druk van 3-5 mbar met een FiO 2 = 0,4. Instellingen nodig zou kunnen hebben enkele aanpassingen die het makkelijkst kan worden bereikt door het controleren van de longen tijdens open thorax chirurgie. Zorg ervoor dat de longen niet zijn ingestort of overbelast. Ondanks het feit dat de Servo 900 C is gebouwd als ventilator voor de mens, het gebruik ervan in een druk gecontroleerde ventilator instelling werkt uitstekend voor de ventilatie van de muizen. </li><li> Voer Blood gas analyse naar de normale gasuitwisseling (partiële druk van zuurstof, PaO 2 van 115 ± 15 mm Hg en de partiële druk van koolstofdioxide, Paco 2 van 38 ± 6 mmHg) te bevestigen na 4 tot 6 uur de tijd ventilatie met behulp van de i-STAT System (Abbott, USA). </li><li> Monitor de hartfrequentie met een ECG (bijvoorbeeld Hewlett Packard, Böblingen, Duitsland). Zorg ervoor dat de hartfrequentie niet dalen tot onder 450. Als de muis ontwikkelt bradicardia controleert de temperatuur en de verdoving dosis / concentratie. Xylacin / Ketamin anesthesie leidt tot een hart hart van de 250 / min en wordt daarom niet aanbevolen. </li><li> Breng een juiste vloeistof vervanging. Een infuus met fysiologisch zout 0,1 ml / uur via een arteriële of veneuze katheter moet voorafgaand aan het begin van ischemie worden uitgevoerd. Ook kan een zoutoplossing bolus van 500 ul worden gegeven ip voorafgaand aan de operatie. Thoractomy kan leiden tot een daling van de bloeddruk en kunnen extra zout boli vereisen. Na ischemie, kan een infusiesnelheid tot 1 ml / uur nodig zijn om een ​​gemiddelde arteriële bloeddruk boven 60 mmHg te houden en een voldoende reperfusie van cruciaal belang voor infarct kleuring met behulp van TTC te garanderen. </li><li> Plaats een halsslagader (PE10, Tip OD (mm / "), Tapered&gt; 0.024 mm/.011") voor continue registratie van de bloeddruk. De halsslagader wordt blootgesteld via stompe dissectie van de paratracheale spieren. Na verdere blootstelling en zorgvuldige vermijding van elk weefsel trauma (het bijzonder van de nervus vagus), wordt een katheter ingebracht in het vat met twee hechtingen en een kleine klem. Bevestig de arm om het lichaam voordat u begint met het ontleden van de slagader. Dit zal blootstellen een langer stuk van de slagader. Knoop aan het einde van het proximale deel van de halsslagader. Bevestig een grotere klem aan het einde van de hechting aanverkrijgen van spanning. Plaats een ander hechtdraad rond de slagader en ontleden de slagader van de zeer distale einde. Hier, een kleine klem. Gebruik micro-schaar om een ​​kleine diagonale opening in de slagader snijden. Houd de opening met een fijn pincet (Dumont, WPI) en vooraf de juiste maat katheter met je handen / tang. Maak een knoop met je tweede hechtdraad en zet de slagader. Draai de klem en vooraf de katheter verder. Bevestig de katheter met een aantal knopen en tape. </li></ol> 2. Techniek van een coronaire occlusie <ol><li> Ontleden van de huid en bloot de linker thorax muur met behulp van een stompe dissectie techniek. </li><li> Snijd de spieren borstvin majors en minors aan de thorax wand bloot te leggen met een cauterisatie. Door aan de pectoralis major, de longen daalt, waardoor een pincet uit de elektrochirurgische unit kan worden gestoken, en, 1-3 mm boven de long, een horizontale lijn het oversteken van de scheurt moet worden gecoaguleerd. </li><li> Door het gebruik van een afgestompte schaar, knip de thorax wand. Aangepast veiligheidsspelden, waar de vangst plaat is verwijderd en de stompe eind is gebogen, worden vervolgens gebruikt om de borstkas te openen. </li><li> Ter vergemakkelijking van de definitieve plaatsing van de hechting, coaguleren en knip de thorax muur langs het membraan naar de linker zijde van de thorax. </li><li> Expose het hart door het ontleden van het hartzakje. Om te voorkomen dat het middenrif bewegingen te verwijderen en snijd de diafragma zenuw. </li><li> Gebruik een kleine natte katoenen stok met een tang en draai het hart naar de rechterkant. Identificeer de linker kransslagader (LCA) en zorg ervoor dat de longen niet te opgeblazen. Optimaliseren van de opening van de thorax om een ​​stevige bevestiging van het hart hebben bij het plaatsen van de hechting. Als de bloeddruk te laag is de identificatie zou worden gecompliceerd. Extra Boli van zout kunnen verbeteren identificatie van de LCA. De LCA is een helder rood schip het oversteken van de hart horizontaal (in tegenstelling tot de terugkerende aderen). Soms wordt de LCA gezien best zonder een microscoop. Gebruik niet te veel licht. Dit kan leiden tot reflecties maken van visualisatie onmogelijk te verbreken. </li><li> Zodra de LCA is visueel geïdentificeerd, plaats een 8,0 nylon hechtdraad (Prolene, Ethicon, Notiefies, USA) rond de LCA. Voor de toepassing van intermitterende LCA occlusie, we goedkeuring gehecht aan een chronische model van cardiomyopathie 42 met behulp van een opknoping gewicht systeem. </li><li> Rijg de hechting door middel van een klein stukje plastic buis (PE-10 buizen) met een stompe randen en bevestig twee kleine gewichten (1g, bijv. gebruik Eppendorf buizen gevuld met water) aan elk uiteinde. Met de gewichten vrij opknoping over een stang, moet de LCA onmiddellijk te worden afgesloten. Bovendien, als het gewicht is opgelucht, is LCA occlusie beëindigd in een keer. Succesvolle LCA occlusie moet worden bevestigd door een onmiddellijke kleurverandering van het schip van licht rood naar donker violet, verandering van kleur van het myocard door het vat (van helder rood tot wit) en de aanwezigheid van ST-verhogingen in het ECG. Tijdens reperfusie, de veranderingen van de kleur onmiddellijk verdwijnen. Houd het hart nat met een 37 ° C, zoutoplossing geweekt, stuk van hydrofiel katoen in heel (zie ook figuur 1). </li><li> Kies je ischemie tijd volgens uw primaire belang. In feite, voor studies van cardioprotectieve effecten van IP, zou het ideaal zijn om een ​​ischemie tijd geassocieerd met een infarct in grootte van ongeveer 30 tot 40% van de AAR gebruiken. Zo zou het mogelijk zijn om veranderingen in beide richtingen, bijvoorbeeld kleinere maten met een hart-infarct IP of grotere infarct maten met een experimentele therapeutische of een specifieke gendeletie te tonen. Daarnaast, muizen met een grootte van het infarct van minder dan 50% meestal overleeft het experiment, terwijl infarct maten van 60 tot 80% zijn vaak niet overleefd en de dieren sterven voordat de reperfusie tijd is voltooid. Met behulp van ons model 10 minuten van myocardiale ischemie, gevolgd door 2 uur reperfusie resulteren in een infarct grootte van 3,5 ± 1,3% van de AAR. In tegenstelling, een ischemie tijd van 60 minuten resulteert in een gemiddelde grootte van het infarct van 42 ± 5,2% van de AAR (p &lt;0,01) 39. Zo beschouwen we een 60 minuten van ischemie als ideaal om veranderingen in beide richtingen te bestuderen. Toch moet u mogelijk de ischemie tijd in te stellen in gen gerichte muizen met een verbreken fenotype. </li><li> Kies het juiste moment reperfusie. Het reperfusie tijd is van cruciaal belang voor de TTC kleuring. De kleurloze verf wordt gereduceerd tot een baksteen-rood gekleurd precipitaat door dehydrogenases in aanwezigheid van de co-enzym NADH. Stervende cellen verliezen hun vermogen om NADH en daarom worden afgebakend als bleke gebieden binnen de rode gekleurde levensvatbaar myocard te behouden. Infarctgrootte afbakening van TTC vereist dat NADH is gewassen volledig uit de necrotische gebied. Echter, als reperfusie is niet lang genoeg is, kan infarctgrootte afbakening van TTC kleuren resulteren in een onderschatting van de werkelijke infarctgrootte 43. In onze handen, na een ischemie tijd van 60 min, de grootte van het infarct meting is gestegen van 11,5 ± 4,5% na 30 minuten tot 42,2 ± 5,1%na 120 minuten. Geen verdere toename van de grootte van het infarct kunnen worden gedetecteerd met langere reperfusie tijden (240 minuten) 39. Zo hebben we een 2 uur reperfusie periode, die lijkt ook redelijk in de context van cardiale enzymen determination.If je bedenkt ischemie conditionering raden, raden wij aan vier cycli van IP (5 min ischemie, 5 min reperfusie), gevolgd door een ischemie van 60 min en een reperfusie tijd van 2 uur. Onder deze omstandigheden was IP geassocieerd met een 3,2-voudige reductie van infarctgrootte van 42,2 ± 5,1% tot 13,3 ± 3,3% van de AAR 39. Echter, als gevolg van de opknoping gewicht systeem kan verschillende regimenten conditionering gemakkelijk worden toegepast. </li></ol> 3. Bepaling van de omgeving At Risk (AAR) en myocard infarct grootte Na inductie van een myocard infarct (met of zonder IP), is het gebied doorbloed door het LCA (gebied in gevaar, AAR) en de grootte van het infarct zelf zal worden bepaald met behulp van een kleuring techniek. Vervolgens zal infarct dan worden berekend als percentage van een myocardinfarct ten opzichte van de AAR. Om dit te doen, is een eerder beschreven dubbele kleuring techniek met blauwe en triphenyltetrazolium chloride Evan's (TTC) gebruikt 44. <ol><li> Bepaal de AAR door middel van retrograde injectie van 1% blauwe kleurstof Evan's in de aorta, terwijl de LCA is afgesloten. Als alternatief, als een carotis katheter op zijn plaats is, gebruik deze route voor Evans blauw injectie. Evans blauwe vlek zal alle myocardweefsel blauw, behalve de AAR. Het is van cruciaal belang voor deze stap om luchtbellen te voorkomen binnen de katheter, zoals ze zouden worden geïnjecteerd in de coronaire circulatie en het voorkomen van blauwe vlekken Evan's. Voorafgaand aan de Evans blauwe vlekken die u zou willen bloed voor cardiale enzymen metingen te verzamelen. Bovendien is het verwijderen van bloed door het injecteren van 5 ml van een zoutoplossing via een aorta-of carotis katheter aanbevolen. </li><li> Accijnzen het hart en was in ijskoud 0,9% zoutoplossing </li><li> Insluiten in 2% agarose. Gebruik geen heet agarose omdat dit succesvol zal verkleuring te voorkomen. </li><li> Na 30 minuten bij +4 ° C (of 15 minuten -20 ° C), knip het hart in plakjes van 1 mm met behulp van een hart matrix of microtoom. Als u het hart in de vriezer te vermijden droge bevriezing die zal leiden tot niet-gekleurde harten. </li><li> Incubeer de plakjes met 1% TTC bij 37 ° C gedurende 10 min met behulp van een 15 ml blauwe pet in een waterbad. Hierdoor kan de infarct gebied dat moet worden afgebakend als een wit gebied, terwijl levensvatbaar weefsel vlekken rood. </li><li> Fixeer de gekleurde schijfjes met 10% fomaldehyde 's nachts. Door dit te doen, is het infarct gebied beter contrast verbeteren van de kwaliteit van de foto's. </li><li> Bepaal het gebied in gevaar (AAR) en de grootte van het infarct via planimetrie het gebruik van de software NIH Image 1.0 45. </li><li> Bereken het percentage van de infarct myocardium uit het gebied in gevaar. </li></ol> 4. Cardiac Enzyme meting Vanwege de beperkingen in verband met de TTC vlekken adviseren wij als extra uitlezing voor hartinfarct de ernst van de bepaling van cardiaal troponine I (cTnI) niveaus in het serum van muizen. Het bloed zal worden verkregen uit de poortader en serum cTnI niveaus worden dan bepaald met een kwantitatieve snelle cTnI assay (Life Diagnostics, Inc, West Chester, PA, USA). 5. Representatieve resultaten: <img src="/files/ftp_upload/2526/2526fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. (A) Model van cardiale IP met behulp van een opknoping gewicht systeem van coronaire occlusie. Deze techniek vereist geen knoop voor coronaire occlusie. (B, C) chirurgische setup. (D) Afbeelding van een muizen-hart met de linker kransslagader (LCA, pijlen) na occlusie. Visuele identificatie van de LCA is noodzakelijk voor ligatie en ischemische preconditionering bij muizen. Een 8.0 nylon hechtdraad is geplaatst rond de LCA 1-2 mm onder de linker oorschelp. De hechting is voorzien van schroefdraad door een kleine plastic buis (*). Het einde van elke hechting is bevestigd aan een klein gewicht (1g) en de hechting wordt geplaatst over stangen aan beide zijden. (E) Bepaling van de AAR na LCA occlusie en retrograde injectie van blauwe kleurstof Evan's in de aorta. De AAR blijft onbesmet terwijl de rest van het myocard is blauw. Na incubatie van AAR weefsel met TTC, het infarct gebied bevlekt wit, terwijl levensvatbaar weefsel gekleurd rood.

De huidige studie beschrijft een nieuwe techniek van het uitvoeren van IP in een intacte murine model met behulp van een opknoping-gewicht-systeem en dus het vermijden coronaire occlusie van een knoop. In feite is deze studie toont zeer reproduceerbare infarct maten en cardiale bescherming door IP, dus het minimaliseren van de variabiliteit in verband met knoop op basis van coronaire occlusie modellen. Onderzoekers die overwegen te bestuderen cardioprotectie van IP bij muizen kunnen baat hebben bij dit model.

<table><tbody><tr><td>Natrium-pentobarbital (Fatal Plus)</td><td>Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd</td><td>V.P.L. 9372</td><td>4mg/mL in saline</td></tr><tr><td>TTC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>17779 Fluka</td><td>1.5 % in PBS</td></tr><tr><td>Evans Blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E2129</td><td>10g in 1 L PBS</td></tr><tr><td>Insyte 22 G</td><td>BD Biosciences</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Hechtdraad, zijde 4.0</td><td>Harvard Apparatus</td><td>517698</td><td></td></tr><tr><td>Hechtdraad, Prolene 8.0</td><td>Ethicon Inc.</td><td>M8739</td><td>herbruikbaar</td></tr><tr><td>Hartmatrix</td><td>Zivic Instruments</td><td># HSMS001</td><td></td></tr><tr><td>Siemens 900 C</td><td>DRE Veterinary</td><td># 336</td><td>gereviseerd</td></tr><tr><td>dissectiemicroscoop (SZX10 )</td><td>Olympus Corporation</td><td>n/a</td><td>rekening houdend met een ruime werkafstand</td></tr><tr><td>Verwarmingsplateau</td><td>Rt, Effenberger, Germany</td><td>n/a</td><td>enige en enige leverancier</td></tr><tr><td>Bloeddrukmeetapparaat</td><td>Cyber Sense, Inc</td><td>BPM02</td><td></td></tr><tr><td>I STAT</td><td>Abbott Laboratories</td><td>n/a</td><td></td></tr></tbody></table>

het gebruik van een opknoping weight system voor coronary artery occlusion in muizen

Use of a Hanging Weight System for Coronary Artery Occlusion in Mice

Muriene studies van acute blessure is een gebied van intensief onderzoek, als knock-out muizen voor verschillende genen worden steeds beschikbaar 1-38. Cardioprotectie door ischemische preconditionering (IP) blijft een gebied van intensief onderzoek. Om verder te ontrafelen zijn moleculaire basis, het gebruik van knock-out muizen studies is vooral van belang 7, 14, 30, 39. Ondanks het feit dat eerdere studies al met succes cardiale ischemie en reperfusie uitgevoerd in muizen, dit model is technisch zeer uitdagend. In het bijzonder, visuele identificatie van de kransslagader, de plaatsing van de hechting rond het schip en coronaire occlusie door koppelverkoop af het schip met een ondersteunde knoop is technisch moeilijk. Daarnaast, heropening van de knoop voor intermitterende reperfusie van de kransslagader in het onderzoektijdvak, zonder dat chirurgisch trauma voegt extra uitdaging. Bovendien kunnen als de knoop is niet gebonden aan sterk genoeg is, onbedoelde reperfusie te wijten aan gebrekkige occlusie van de coronaire invloed op de resultaten. In feite kan dit gemakkelijk optreden als gevolg van de beweging van het kloppend hart. Op basis van mogelijke problemen in verband met het gebruik van een geknoopte coronaire occlusie-systeem, we goedkeuring gehecht aan een eerder gepubliceerde model van chronische cardiomyopathie op basis van een opknoping gewicht systeem voor intermitterende coronaire occlusie tijdens OT 39. In feite kan coronaire occlusie dus worden bereikt zonder de coronaire af te sluiten met een knoop. Bovendien kan reperfusie van het schip gemakkelijk worden bereikt door het ondersteunen van de opknoping gewichten, die in een afgelegen localisatie van hart-weefsels. We testten het systeem systematisch, inclusief variatie van ischemie en reperfusie tijden, conditionering regimenten, lichaamstemperatuur en genetische achtergronden 39. In aanvulling op vlekken infarct, testten we cardiaal troponine I (cTnI) als een marker van een myocardinfarct in dit model. In feite waren de plasmaspiegels van cTnI gecorreleerd met infarct maten (R2 = 0,8). Ten slotte kunnen we zien in verschillende studies dat deze techniek zeer reproduceerbare infarct maten opbrengst in murine IP en myocardinfarct 6, 8, 30, 40, 41. Daarom kan deze techniek nuttig zijn voor onderzoekers die na te streven moleculaire mechanismen die betrokken zijn bij hartfalen door IP met behulp van een genetische aanpak in muizen met gerichte gendeletie. Verdere studies op de cardiale IP met behulp van transgene muizen kunnen overwegen deze techniek.

Een muismodel voor myocardiale ischemie en ischemische preconditionering is een belangrijk instrument studie cardioprotectief mechanismen<em&gt; In vivo</em&gt;. Hier melden wij een gemakkelijke toepassing<em&gt; In situ</em&gt; Model voor cardiale IP met behulp van een opknoping gewicht voor coronaire occlusie.

Het gebruik van een Opknoping Weight System voor Coronary Artery Occlusion in Muizen

Muizenstudies naar acuut letsel zijn een gebied van intensief onderzoek, aangezien knockout-muizen voor verschillende genen steeds breder beschikbaar worden 1-38. ...

Het algemene doel van deze procedure is om myocardiale ischemie in het hart van de neuron op te wekken, met of zonder ischemische preconditionering. Dit wordt bereikt door eerst een geoptimaliseerde techniek voor anesthesie, positionering, ventilatie en vochttoediening toe te passen. De tweede stap van de procedure is het uitvoeren van een laterale thoracotomie om de toegang tot de kransslagader te vergemakkelijken.De derde stap is het plaatsen van een ultrafijne hechtdraad onder de slagader en het toepassen van een systeem met een hangend gewicht om een occlusie op te wekken. Ten slotte wordt Evans blue-kleurstof in de halsslagader geïnjecteerd en wordt TTC-kleuring op het hart uitgevoerd om het geïnfarceerde weefsel te visualiseren. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die de omvang van het beschadigde myocardium bij genetisch gemodificeerde of farmacologisch behandelde dieren laten zien.Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn met deze methode moeite hebben vanwege de moeilijkheid bij het identificeren van de kransslagader en de complexiteit van de anesthesie, ventilatie en vloeistofsuppletie. Plaats voor het begin een geanestheseerde muis in rugligging op een temperatuurgecontroleerde warmtetafel, maak lussen van hechtmateriaal rond elke extremiteit en plak de hechtingen vervolgens met tape op de tafel vast. Bevestig daarna de kop door een hechtdraad onder de bovenste tanden door te halen.Muisbewegingen tijdens de fixatie. Het gebruik van de hechting wijst op een ontoereikende anesthesiediepte voor de chirurgische procedure. Indien dit wordt waargenomen, moet de muis opnieuw worden gedoseerd met een derde tot een kwart van de initiële dosis pentobarbital, waarna de anesthesie moet worden bevestigd via een teenknijptest.Zodra de muis is voorbereid, kan deze worden bedekt met minerale olie om blootstelling aan allergenen uit het haar te verminderen. Dien een zoutoplossing-bolus van 500 µL toe en voer een rectale probe in die is verbonden met een thermische feedbackregelaar om te waarborgen dat de lichaamstemperatuur op 37 °C blijft. Om de trachea bloot te leggen, wordt een incisie langs de nek gemaakt en deze stomp gedilateerd.Disseceer de omringende spieren en het bindweefsel. Houd de tong vast met een pincet en voer voorzichtig een botte polyethyleen canule in onder een hoek van 15 graden richting het lichaam. Bevestig de correcte plaatsing van de tube door directe visualisatie van de canule in de eerder blootgelegde trachea.Boven de Corina. Sluit de slang aan op een servo 900 C ventilator. Stel de maximale inspiratoire druk in op 10 millibars met een frequentie van 110 ademhalingen per minuut, en een positieve end-expiratoire druk van drie tot vijf millibars met een fractie geïnspireerde zuurstof gelijk aan 0.4.Zodra het dier succesvol is aangesloten op de ventilator, wordt er een katheter in de arteria carotis ingebracht voor het meten van de bloeddruk en de hartslag. Er kan een langer stuk arterie worden blootgelegd als de poot eerst aan de zijkant van het lichaam wordt bevestigd. Begin met het bot dissecteren van de paratracheale spieren om de arteria carotis bloot te leggen; zodra deze is geïsoleerd, wordt er een hechting bij het proximale uiteinde van de arterie geplaatst en wordt deze vastgezet met een klem of tape.Plaats een tweede hechting op ongeveer 0,5 centimeter afstand van de eerste en knoop deze vast, maar trek de hechting rond de arterie niet aan. Dissekeer de arterie tot aan het uiterste distale uiteinde en plaats een kleine klem om bloedverlies te voorkomen. Gebruik microscharen om een kleine diagonale opening in de arterie te knippen onder de eerste hechting.Houd de opening vast met een fijne pincet tijdens het inbrengen van de katheter. Schuif de katheter verder naar voren. Haal de tweede hechtdraad erdoorheen en trek de knoop aan om deze op zijn plaats te houden.Draai vervolgens de klem los en schuif de katheter verder naar voren. Bevestig de katheter met enkele knopen en tape. Zodra de katheter op zijn plaats zit, wordt er fysiologische zoutoplossing geïnfuseerd met een snelheid van 0,1 milliliter per uur en wordt deze aangesloten op het bloeddrukmeetapparaat.Bevestig tot slot klemmen aan de extremiteiten om de hartslag te bewaken. Nu de chirurgische voorbereidingen zijn voltooid, wordt er een incisie over de borst gemaakt om de pectoralisspieren bloot te leggen. Snijd de pectoralisspieren door zodat ze verticaal omhoog getrokken kunnen worden.Gebruik een marker om een horizontale lijn op de thoraxwand aan te brengen op de plaats waar de incisie wordt gemaakt bij gebruik van de m. cordy. Contracties zijn normale reacties op de aangelegde stroom. Deze bewegingen moeten worden onderscheiden van een onjuiste anesthesiediepte door in de tenen te knijpen met de vingers of een pincet.Houd de spier omhoog vóór het snijden om te zorgen dat de longen naar beneden zakken en uit de weg zijn. Snijd de thoraxwand door met botte scharen en gebruik aangepaste veiligheidsnaalden om de thorax open te houden. Snijd vervolgens de thorax langs het diafragma weg van de thoraxholte.Trek eerst de beoogde snijlijn na met een qy en maak vervolgens een verticale snede langs het diafragma richting de linkeronderzijde van de thorax. Disseceer het pericard om het hart bloot te leggen en knip de nervus phrenicus door. Om bewegingen van het diafragma te voorkomen, kan een vochtige wattenstaaf worden gebruikt om het hart naar de rechterkant te draaien.Identificeer de linker coronaire arterie (LCA) en optimaliseer de opening van de thorax. Dit garandeert een stevige grip op het hart. Houd het hart tijdens de gehele procedure vochtig met een met fysiologische zoutoplossing gedrenkt stukje watten bij 37 °C. Plaats, zodra deze is geïdentificeerd, een nylon hechting onder de LCA.Bereid het systeem met hangend gewicht voor door beide uiteinden van de hechtdraad door een klein stukje plastic buisje met stompe randen te rijgen. Bevestig aan elk uiteinde van de hechtdraad een klein gewicht en drapeer deze over een stang zodat er spanning ontstaat terwijl de gewichten vrij over de stang hangen. De LCA moet onmiddellijk worden afgesloten. Succesvol.LCA-occlusie kan worden bevestigd door een onmiddellijke kleurverandering van het vat van lichtrood naar donkerpaars en van het door het vat gevoede myocardium van helderrood naar wit. Beëindig de LCA-occlusie op een vooraf bepaald tijdstip door de druk van de gewichten te verlichten. Succesvolle reperfusie is zichtbaar wanneer de kleur terugkeert om het risicogebied te bepalen.Of injecteer 1% Evans blue-kleurstof in de aorta terwijl de LCA is afgesloten. Evans blue zal al het myocardweefsel blauw kleuren, behalve het a r.Voor verdere analyse van het infarctgebied wordt het hart uitgesneden en gewassen in ijskoude 0,9% zoutoplossing. Bed het hart in 2% aeros en laat dit 30 minuten rusten bij vier graden Celsius. Snijd het hart in plakken van één millimeter dik.Incubeer de plakjes met 1% TTC gedurende 10 minuten bij 37 °C met behulp van een hartmatrix of microtoom. Door gebruik te maken van een 15 milliliter blauwe dop in een waterbad, zal het infarctgebied wit blijven terwijl levensvatige weefsels na kleuring rood kleuren. Deze techniek heeft de weg vrijgemaakt voor onderzoekers op het gebied van myocardiale ischemie om cardioprotectieve effecten te onderzoeken met behulp van genetische en farmacologische modellen.

use-of-a-hanging-weight-system-for-coronary-artery-occlusion-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Een precieze muis model voor acute nierschade (AKI) als gevolg van ischemie is een belangrijk instrument om acute nierschade te onderzoeken en eventueel vinden therapeutische instrumenten om schade aan de nieren te behandelen. De opknoping gewicht systeem biedt een tool voor onmiddellijke en betrouwbare renale arterie occlusie en reperfusie zonder dat renale congestie.

Het gebruik van een Opknoping gewicht System voor geïsoleerde renale arterie occlusie

We hebben een nieuw muizenmodel van een opknoping gewicht systeem voor het portal triade occlusie. Deze techniek kan nuttig zijn voor toekomstige onderzoeken ischemie muizen lever modellen.

Gebruik van een hangende gewicht System voor lever ischemie in Muizen

Tal van genetische manipulaties en / of intramyocardial injecties van genen, eiwitten, cellen en / of biomaterialen wordt toegevoegd aan de dimensie van de tijd in studies van de acute ischemie / reperfusie schade en chronische remodeling bij muizen. Deze video illustreert de microchirurgische procedures voor ischemie / reperfusie, permanent coronaire ligatie, en intramyocardial injectie studies.

Kransslagader Ligatie en Intramyocardial Injectie in een muizenmodel van Infarction

De chirurgische procedure gebruikt om experimentele myocardinfarct bij de muis begint met linker thoractomie tussen de derde en vierde ribben om visualiseren het voorste oppervlak van het hart en linker long. De linker coronaire arterie geligeerd, wordt de borst gesloten en de muis mag spontaan herstellen.

Gewijzigd Techniek voor Coronary Artery Ligatie in Muizen

Chirurgisch trauma veroorzaakt een ontstekingsreactie. Cytokines en endogene liganden zijn bekend voor het moduleren van een myocard infarct grootte na ischemie en reperfusie. We presenteren een aangepaste gesloten kist model van muizen ischemie en reperfusie met behulp van gewichten opknoping om de effecten van thoracotomie te minimaliseren.

Een murine Closed-borst Model van myocardiale ischemie en reperfusie

In this video, we describe a surgical procedure to generate a mouse model of myocardial infarction by permanently ligating the left anterior descending coronary artery.

Generating Murine Model of Myocardial Infarction: A Surgical Procedure for Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery in Mouse Model

Hartfalen is de belangrijkste oorzaak van ziekenhuisopname en een belangrijke doodsoorzaak. Een model van permanente ligatie van de linker voorste afdalende kransslagader bij muizen wordt toegepast om ventriculaire remodellering en cardiale disfunctie na een myocardinfarct te onderzoeken. De techniek van invasieve hemodynamische metingen bij muizen wordt gepresenteerd.

Permanente Ligatie van de linker anterior Aflopend Kransslagader in Muizen: Een model van Post-myocardinfarct Remodelling en hartfalen

Minimaal invasieve dwarse aorta vernauwing (MTAC) behoudt de essentie van de reguliere dwarse aorta vernauwing (TAC), terwijl het elimineren van het gebruik van een ventilator met tracheale intubatie. Het blijkt een zeer wenselijke werkwijze voor high-throughput studies linker ventrikel overbelasting, met name translationele studies.

Minimaal Invasieve Transversale Aorta Vernauwing in Muizen

Hierin beschrijven we een chirurgische ingreep die laat zien hoe u permanente ligatie van de linker-anterieure aflopende coronaire slagader bij muizen bereikt. Dit model is van groot belang om de pathofysiologie van myocardiaal infarct en de gelijktijdige biologische processen te onderzoeken.

Murine myocardinfarct model met behulp van permanente Ligatie van linker anterieure aflopende coronaire slagader

Hier wordt een chirurgische procedure gepresenteerd voor permanente ligatie van de linker kransslagader bij muizen. Dit model kan worden gebruikt om de pathofysiologie en bijbehorende ontstekingsreactie na een hartinfarct te onderzoeken.

Ligatie van de linker kransslagader: een chirurgisch muizenmodel van myocardinfarct

Leer een hangend-gewichtssysteem voor coronaire arterie-occlusie bij muizen om myocardiale ischemie en ischemische preconditionering in vivo te bestuderen. Deze methode maakt onderzoek naar cardioprotectieve mechanismen mogelijk.

Het gebruik van een Opknoping Weight System voor Coronary Artery Occlusion in Muizen

Meer video's verkennen