Name: Neuromodulatie en Mitochondriale Transport: Live Imaging in hippocampale neuronen dan lange duur (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 50 s
Description: Leer mitochondriale transport visualiseren in hippocampale neuronen met behulp van fluorescentiemicroscopie en lentivirale labeling. Deze methode maakt langetermijnobservatie van neuromodulator-effecten op mitochondriale dynamiek mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We willen graag Donald Hutson bedanken voor hun bijdrage zijn technische expertise en grote vaardigheid bij het ontwerp en de fabricage van de fase-top incubator. We zijn ook dankbaar dat Ayda Dashtaei voor haar uitstekende technische bijstand. Al het werk werd ondersteund door Neurowetenschappen Research Foundation.

<ol><li>Ligon, L. A., Steward, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Movement+of+mitochondria+in+the+axons+and+dendrites+of+cultured+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Movement of mitochondria in the axons and dendrites of cultured hippocampal neurons.</a> J Comp Neurol. 427, 340-350 (2000).</li>
<li>Miller, K. E., Sheetz, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+evidence+for+coherent+low+velocity+axonal+transport+of+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Direct evidence for coherent low velocity axonal transport of mitochondria.</a> J Cell Biol. 173, 373-381 (2006).</li>
<li>Macaskill, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miro1+is+a+calcium+sensor+for+glutamate+receptor-dependent+localization+of+mitochondria+at+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Miro1 is a calcium sensor for glutamate receptor-dependent localization of mitochondria at synapses.</a> Neuron. 61, 541-555 (2009).</li>
<li>Morris, R. L., Hollenbeck, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+transport+of+mitochondria+along+microtubules+and+F-actin+in+living+vertebrate+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Axonal transport of mitochondria along microtubules and F-actin in living vertebrate neurons.</a> J Cell Biol. 131, 1315-1326 (1995).</li>
<li>Rintoul, G. L., Filiano, A. J., Brocard, J. B., Kress, G. J., Reynolds, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+decreases+mitochondrial+size+and+movement+in+primary+forebrain+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glutamate decreases mitochondrial size and movement in primary forebrain neurons.</a> J Neurosci. 23, 7881-7888 (2003).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrawley%2C+JN+%22Current+protocols+in+neuroscience%22">Current protocols in neuroscience</a>. , J. Wiley. (1999).</li>
<li>Fedoroff, S., Richardson, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFedoroff%2C+S+%22Protocols+for+neural+cell+culture%22">Protocols for neural cell culture</a>. , 3rd edn, Humana Press. (2001).</li>
<li>Chen, S., Owens, G. C., Crossin, K. L., Edelman, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+stimulates+mitochondrial+transport+in+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Serotonin stimulates mitochondrial transport in hippocampal neurons.</a> Mol Cell Neurosci. 36, 472-483 (2007).</li>
<li>Chen, S., Owens, G. C., Edelman, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+inhibits+mitochondrial+motility+in+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Dopamine inhibits mitochondrial motility in hippocampal neurons.</a> PLoS One. 3, e2804-e2804 (2008).</li>
<li>Chen, S., Owens, G. C., Makarenkova, H., Edelman, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDAC6+regulates+mitochondrial+transport+in+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">HDAC6 regulates mitochondrial transport in hippocampal neurons.</a> PLoS One. , e10848-e10848 (2010).</li>
<li>Curran, M. A., Kaiser, S. M., Achacoso, P. L., Nolan, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+transduction+of+nondividing+cells+by+optimized+feline+immunodeficiency+virus+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Efficient transduction of nondividing cells by optimized feline immunodeficiency virus vectors.</a> Mol Ther. 1, 31-38 (2000).</li>
</ol>

Gebruikmakend van lentivirus-gemedieerde expressie van een fluorescerend eiwit gericht op mitochondria in geïnfecteerde gekweekte neuronen en een goedkope lab-bouwfase-top incubator die beeldvorming van levende cellen voor langere duur maakt, zijn we in staat geweest om de link tussen beweging en mitochondriale neuromodulatory signalen te onderzoeken , zoals serotonine (5-HT), dopamine (DA) en acetylcholine (ACh). Onze studies hebben bijgedragen tot een signaalroute dat voor de eerste keer, mitochondriale mensenhandel links naar veranderingen in de activiteit van neuronen-gemoduleerd door neurotransmitters zoals 5-HT en DA verduidelijken - die zich in het hart van de neurale functie. We vinden dat het gebruik van gerichte fluorescente eiwitten de observatie van gelabelde mitochondria in levende gekweekte neuronen gedurende langere perioden die mogelijk meer fysiologisch relevante dan de veel kortere duur, die mogelijk met behulp van vitale kleurstoffen vergunningen. Bovendien is de intensiteit van het fluorescerende eiwit signaal stelt ons in staat om de blootstelling keer kort te houden tijdens het beeld acquisitie, het minimaliseren van de mogelijkheid van fotobleken of fototoxiciteit. Ten slotte is een eenvoudige en goedkope stage-top incubator die omgevingstemperatuur, vochtigheid en CO 2 niveau handhaaft, terwijl het minimaliseren van de verdamping van de media, laat ons toe om mitochondriale beweging volgen in levende neuronen in uren of zelfs dagen. Onderzoekers die wensen om een ​​stage-top incubator fabriceren voor de lange-termijn observaties van mitochondriën in levende neuronen hoeft niet aan de precieze details van ons ontwerp, op voorwaarde dat de eigenschappen van de gebruikte materialen (bijvoorbeeld gas permeabel membraan om verdamping van de media te voorkomen ) en principes toegepast (bijvoorbeeld, temperatuur en luchtvochtigheid, buffering van de pH, onderhoud van de osmolariteit) zijn over het algemeen consistent met wat is beschreven in dit protocol.

<table border="1"><tbody><tr><th> Hoeveelheid </th><th> Beschrijving (en locatie in Figuur 1) </th></tr><tr><td> 1 </td><td> Weefselkweek incubator (H) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Hittebestendige kunststof behuizing (Delrin of vergelijkbaar) (A) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Kunststof frame voor 35mm GBM deksel (voor het aanbrengen van membraan naar petrischaal) (M) </td></tr><tr><td> 1-2 </td><td> lineaire ft Clear PFTE (Teflon) membraanmateriaal </td></tr><tr><td> 4 </td><td> Messing duimschroeven </td></tr><tr><td> 2 </td><td> Kleine 10kOhm heatsink weerstanden (gebruikt als verwarmings-elementen binnen stage-top incubator behuizing) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Transformator (levering van stroom naar 9V weerstanden) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Terrarium temperatuurregelaar en sonde (thermostatische regeling van kracht om heatsink weerstanden via transformator) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 2000ml erlenmeyer (demper voor trillingen in de slang voor de stage-top incubator) (K) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 1 / 8 &quot;sorbothane vel (pakking materiaal voor de basis van stage-top incubator) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Luchtdicht ABS (of vergelijkbare) plastic doos (behuizing voor aquarium pomp) (J) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Aquarium pomp (I) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Kleine computer koelventilator </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Plastic behuizing voor ventilator (L) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 9V transformator voor computer koelventilator </td></tr><tr><td> 20-30ft </td><td> Nalgene of siliconen slang (verbindingen tussen weefselkweek en podium-top incubatoren; vocht vallen) (F, G, N) </td></tr><tr><td> 2 </td><td> Plastic kranen (voor het openen en te sluiten voordat de luchtstroom en na de stage-top incubator) (O) </td></tr><tr><td> 4 </td><td> Prikkeldraad messing slang-aansluitingen (voor de slang verbindingen van / naar stage-top incubator en aquarium pomp behuizing) </td></tr><tr><td> 2 </td><td> Messing snelkoppelingen (voor de slang verbindingen naar / van stage-top incubator) </td></tr><tr><td> 2 </td><td> Messing snelkoppelingen (voor de slang verbindingen naar / van stage-top incubator) </td></tr></tbody></table> Tabel 1. Stage-top incubator delen: <table border="1"><tbody><tr><th> Naam van het serum </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th></tr><tr><td> Poly-D-lysine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P7280-5MG </td></tr><tr><td> laminine </td><td> Roche Applied Science </td><td> 11243217001 </td></tr><tr><td> 35 mm met glazen bodem gerechten </td><td> MatTek </td><td> P35GC-0-14-C </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Life Technologies </td><td> 10567 </td></tr><tr><td> B27 </td><td> Life Technologies </td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td> Glutamax </td><td> Life Technologies </td><td> 35050 </td></tr><tr><td> Lipide-rijke BSA </td><td> Life Technologies </td><td> 11020-021 </td></tr><tr><td> L-Asparagine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P0380-100G </td></tr><tr><td> L-Proline </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A8381-100G </td></tr><tr><td> Vitamine B-12 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> V2876-100mg </td></tr><tr><td> 5-HT </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H9523-25mg </td></tr><tr><td> 8-OH-DPAT </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H8520-25mg </td></tr><tr><td> Dopamine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H8502-5G </td></tr><tr><td> Bromocriptine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> B2134-25mg </td></tr><tr><td> SKF38393 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D047-100mg </td></tr></tbody></table>

neuromodulatie en mitochondriale transport: live imaging in hippocampale neuronen dan lange duur

Neuromodulation and Mitochondrial Transport: Live Imaging in Hippocampal Neurons over Long Durations

Om te begrijpen van de relatie tussen mitochondriale vervoer en de neuronale functie, is het essentieel om mitochondriale gedrag in levende gekweekte zenuwcellen voor een langere duur van 1-3 te nemen. Dit is nu mogelijk door het gebruik van vitale kleurstoffen en fluorescerende eiwitten waarmee cytoskelet componenten, organellen, en andere structuren in levende cellen kunnen worden gelabeld en vervolgens gevisualiseerd via dynamische fluorescentie microscopie. Bijvoorbeeld, in embryonale kip sympathische neuronen, was mitochondriale beweging gekarakteriseerd met behulp van de vitale kleurstof rhodamine 123 4. In een andere studie, mitochondriën werden gevisualiseerd in de rat voorhersenen neuronen door transfectie van mitochondrially gerichte EYFP 5. Echter, beeldvorming van de primaire neuronen gedurende minuten, uren of zelfs dagen presenteert een aantal punten. De belangrijkste hiervan zijn: 1) het onderhoud van de kweekomstandigheden zoals temperatuur, vochtigheid en pH tijdens lange sessies beeldvorming, 2) een sterke, stabiele fluorescerende signaal naar zowel de kwaliteit van verworven beelden en nauwkeurige meting van de intensiteit van het signaal tijdens de beeldanalyse te verzekeren; en 3) het beperken van de blootstelling keer tijdens beeldacquisitie aan fotobleken te minimaliseren en te vermijden fototoxiciteit. We beschrijven hier een protocol dat de waarneming, visualisatie en analyse van mitochondriale beweging in gekweekte hippocampale neuronen met een hoge temporele resolutie en onder optimale condities leven toelaat. We hebben geconstrueerd een betaalbare stap-top incubator dat een goede temperatuurregeling en atmosferische gasstroom verleent, en beperkt ook de mate van media verdamping, verzekeren een stabiele pH en osmolariteit. Deze incubator is aangesloten, via de inlaat en uitlaat slangen, met een standaard weefselkweek incubator, die een constante vochtigheidsgraad en een sfeer van 5-10% CO 2 / lucht levert. Dit ontwerp biedt een kosteneffectief alternatief voor de veel duurdere microscoop incubators die niet noodzakelijk de levensvatbaarheid van de cellen te verzekeren gedurende vele uren of zelfs dagen. Om dit te visualiseren mitochondriën, we cellen infecteren met een lentivirus dat codeert voor een rood fluorescerend eiwit dat is gericht op het mitochondrion. Dit zorgt voor een sterke en aanhoudende signalen, die in samenhang met het gebruik van een stabiele xenon lichtbron, laat ons toe om belichtingstijden beperken tijdens beeldacquisitie en alles, maar sluit fotobleken en fototoxiciteit. Twee injectie-poorten aan de bovenkant van het podium-top incubator kan de acute toediening van neurotransmitters en andere reagentia bedoeld om moduleren mitochondriale beweging. Kortom, lentivirus-gemedieerde expressie van een organel-gerichte rood fluorescerend eiwit en de combinatie van onze stage-top incubator, een conventionele omgekeerde fluorescentie microscoop, CCD-camera, en xenon lichtbron ons toelaten om time-lapse beelden van de mitochondriale vervoer te verwerven in levende neuronen over een langere duur dan die mogelijk is in studies inzetten van conventionele vitale kleurstoffen en off-the-shelf life support systemen.

Beschrijven we een protocol dat beeldvorming van mitochondriën kan in levende neuronen via fluorescentie microscopie over lange duur. Imaging gedurende langere perioden wordt bereikt door lentivirus-gemedieerde expressie van een mitochondrially gerichte fluorescerend eiwit en het gebruik van een goedkope stage-top incubator, dat is ontworpen en gebouwd in ons laboratorium.

Neuromodulatie en Mitochondriale Transport: Live Imaging in hippocampale neuronen dan lange duur

Om de relatie tussen mitochondriaal transport en neuronale functie te begrijpen, is het cruciaal om het gedrag van mitochondriën in levende gecultiveerde ...

Het algemene doel van deze procedure is het visualiseren van mitochondriaal transport in gecultiveerde neuronen over langere tijdspannen met behulp van fluorescentiemicroscopie van levende cellen. Dit wordt bereikt door eerst de mitochondriën in de gecultiveerde neuronen te labelen met een organel-gericht fluorescent eiwit. De tweede stap van de procedure is het verkrijgen van beelden van het mitochondriaal transport onder controlecondities.De derde stap van de procedure is het verkrijgen van time-lapse beeldreeksen van mitochondriaal transport na acute toediening van neuromodulatoren zoals serotonine. De laatste stap van de procedure is het uitvoeren van een analyse van de verkregen time-lapse beeldreeksen. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die aantonen dat neurotransmitters het mitochondriaal transport moduleren.Dergelijke resultaten worden alleen behaald door fluorescent gelabelde mitochondriën in neuronen over lange perioden in beeld te brengen. Het belangrijkste voordeel van deze methode ten opzichte van bestaande technieken, zoals labeling met vitale kleurstoffen of transiënte transfectie van GFP, is dat deze methode het mogelijk maakt om langetermijnobservaties van mitochondriaal transport in gezonde gekweekte neuronen uit te voeren. Chen, een associate fellow uit mijn laboratorium, zal deze procedure demonstreren om een stabiel verwarmde en bevochtigde omgeving te waarborgen.De incubator op het objecttafel is via een gesloten circuit verbonden met een standaard weefselkweekincubator; een A-P-F-T-E membraandeksel voor glazen kweekschaaltjes van 35 millimeter met platte bodem maakt gasuitwisseling mogelijk tussen de neuronale cultuur en de omgeving in de incubator. Samen maken deze en andere functies de langdurige observatie van gekweekte neuronen onder verschillende experimentele omstandigheden mogelijk. Breng de kweekschaal met gekweekte hippocampale neuronen, die het mito turbo red-eiwit tot expressie brengen, over naar een weefselkweekkast.Vervang het plastic deksel door het PTFE-membraandeksel en verplaats de kweekschaal naar de microscoop. Klem de basis van de incubator vast aan de objecttafel van de microscoop en plaats vervolgens voorzichtig de kweekschaal met het membraandeksel erop. Lijn in de uitsparing de incubatorbehuizing uit met de stalen pennen op de incubatorbasis en laat de behuizing op de basis zakken.Draai destelschroeven aan tot er een goede afdichting is bereikt tussen de behuizing en de basis. Zet de controller van het filterwiel van de microscoop, de lichtbron en de CCD-camera aan voordat u de imaging-software opent. In dit protocol wordt slide-boek vijf gebruikt voor de beeldacquisitie.Schakel over naar een 63 x olie-immersieobjectief en laat de objectiefrevolver zakken. Breng voorzichtig immersie-olie aan op het oppervlak van het objectief. Klik op het icoon voor het focusvenster in de werkbalk en schakel de brightfield-lamp in door de lampschuif te verschuiven.Om de lichtintensiteit aan te passen, stelt u via de oculairs scherp op een veld met cellen en zoekt u een cel van belang. Selecteer het XI three-filter onder het tabblad 'scope', bepaal via de oculairs het brandvlak voor de mitochondriën in de cellen die zijn gelabeld met het mito turbo red-eiwit, en schakel vervolgens over naar de CCD-camera. Klik op het pictogram voor beeldvastlegging in de werkbalk, beginnend met een initiële belichtingstijd van 100 milliseconden.Bepaal de optimale belichting door gebruik te maken van de knoppen 'test' en 'find best' in het acquisitievenster. Vink onder het vak 'capture type' de optie 'time-lapse' aan en selecteer het gewenste beeldingsinterval en de duur van de beeldingssessie onder de 'time-lapse capture'-opties.Start de time-lapse beeldacquisitie door op de startknop rechtsonder in het acquisitievenster te klikken. Nadat een controlesessie voor beeldvorming is voltooid, worden neurotransmitters of andere reagentia toegediend via de injectiepoorten aan de bovenzijde van de incubator op het objecttafelblad. Na toevoeging van de serotonine-receptoragonist 8-OH-DPAT bewegen voorheen stationaire mitochondriën, aangegeven door de pijlpunt, langs het axon van het hippocampale neuron.De gemiddelde snelheid en directionaliteit van individuele mitochondria zijn samengevat vóór de toevoeging van serotonine. De meerderheid van de mitochondria is stationair; echter, na de toevoeging van serotonine vertoont 42% van de mitochondria nu directionele beweging en leggen zij grotere afstanden af dan die mitochondria die directionele beweging vertonen in de afwezigheid van serotonine. Omgekeerd zijn, na de toevoeging van dopamine, 92% van de mitochondria stationair tijdens de laatste 15 minuten van een beeldsessie na deze procedure.Andere methoden voor het monitoren van meer dan één signaal kunnen worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden. Bijvoorbeeld hoe calciumactiviteit en mitochondriaal transport in neuronen met elkaar samenhangen.

neuromodulation-mitochondrial-transport-live-imaging-hippocampal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Live-cell imaging is met name van nut bij het bestuderen van de dynamiek van organel mensenhandel. Hier beschrijven we een protocol voor live beeldvorming van dense-core blaasjes in gekweekte neuronen met behulp van wide-field fluorescentie microscopie. Dit protocol is flexibel en kan worden aangepast aan image andere organellen, zoals mitochondriën, endosomen, en peroxisomen.

Live-Imaging van dicht-core Blaasjes in het jeugdwerk Gekweekte hippocampale neuronen

Source: Katsalifis, A., et al. Live Imaging of the Mitochondrial Glutathione Redox State in Primary Neurons using a Ratiometric Indicator. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates the imaging of mitochondrial redox state in primary neurons using a ratiometric fluorescent indicator. By applying two excitation wavelengths under a fluorescence microscope, the fluorescence intensity ratio is measured to assess mitochondrial oxidation. The protocol includes N-methyl-D-aspartate (NMDA) stimulation...

Imaging the Mitochondrial Redox State in Primary Neurons Using a Ratiometric Indicator

Intracellulair Ca2+-remodellering bij veroudering kan bijdragen aan excitotoxiciteit en neuronbeschadiging, processen gemedieerd door Ca2+-overbelasting. We wilden Ca2+-remodellering in de verouderende hersenen onderzoeken door middel van fluorescentie- en bioluminescentie-beeldvorming van cytosolisch en mitochondriaal Ca2+ in langetermijnculturen van hippocampusneuronen van ratten, een model voor neuronale veroudering.

Fluorescentie en Bioluminescentie beeldvorming van Subcellulaire Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; In Aged hippocampus Neuronen

Deze methode beschrijft een chronische voorbereiding die optische toegang tot de hippocampus van levende muizen mogelijk maakt. Deze voorbereiding kan worden gebruikt voor het uitvoeren van longitudinale optische beeldvorming van neuronale structurele plasticiteit en activiteit-opgeroepen cellulaire plasticiteit over een periode van enkele weken.

Longitudinale Two-photon beeldvorming van dorsale Hippocampal CA1 in levende muizen

Verminderde mitochondriale vervoer en morfologie zijn betrokken bij verschillende neurodegeneratieve ziekten. Het gepresenteerde protocol maakt gebruik van geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide voorhersenen neuronen om mitochondriale vervoer en morfologie in erfelijke spastische dwarslaesie te beoordelen. Dit protocol maakt karakterisering van mitochondriale handel langs axonen en analyse van hun morfologie mogelijk, wat de studie van neurodegeneratieve ziekte zal vergemakkelijken.

Analyseren van mitochondrial transport en morfologie in de mens geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide neuronen in erfelijke Spastische dwarslaesie

Dit artikel demonstreert de voorbereiding van een op maat gemaakt beeldvormingsvenster aangevuld met infusiekanule en de implantatie ervan op het CA1-gebied van de hippocampus bij muizen.

Craniotomie procedure voor het visualiseren van neuronale activiteiten in Hippocampus van zich gedragende muizen

Dit artikel beschrijft een protocol om verschillen in basale redoxtoestand en redoxresponsen op acute verstoringen in primaire hippocampus- en corticale neuronen te bepalen met behulp van confocale levende microscopie. Het protocol kan met minimale aanpassingen worden toegepast op andere celtypen en microscopen.

Live imaging van de mitochondriale glutathion redoxtoestand in primaire neuronen met behulp van een ratiometrische indicator

Dit artikel beschrijft een methode voor chronische in vivo observatie van de rustende microglia in de hippocampus CA1 van de muis met behulp van nauwkeurig gecontroleerde chirurgie en twee-fotonenmicroscopie.

In Vivo Chronische twee-foton beeldvorming van microglia in de hippocampus van de muis

De huidige methoden beschrijven een niet-ratiometrische benadering voor hoge resolutie, sub-compartimentale calciumbeeldvorming in vivo in Caenorhabditis elegans met behulp van direct beschikbare genetisch gecodeerde calciumindicatoren.

Subcellulaire beeldvorming van neuronale calciumbehandeling in vivo

Het mitochondriale netwerk is uiterst complex, waardoor het zeer uitdagend is om te analyseren. Een nieuwe MATLAB-tool analyseert live confocale mitochondriën in timelapse-beelden, maar resulteert in een groot uitvoervolume dat individuele handmatige aandacht vereist. Om dit probleem aan te pakken, werd een routinematige optimalisatie ontwikkeld, waardoor een snelle bestandsanalyse mogelijk is.

Geoptimaliseerde geautomatiseerde analyse van homeostasemodulatie van levende neuronale mitochondriën door isovormspecifieke retinoïnezuurreceptoren

Hier laten we zien hoe transfectie van primaire hippocampale knaagdierneuronen kan worden gecombineerd met confocale beeldvorming met levende cellen om pathologische eiwitgeïnduceerde effecten op axonaal transport te analyseren en mechanistische routes te identificeren die deze effecten mediëren.

Beeldvorming van levende cellen gebruiken om de effecten van pathologische eiwitten op axonaal transport in primaire hippocampusneuronen te meten

Leer mitochondriale transport visualiseren in hippocampale neuronen met behulp van fluorescentiemicroscopie en lentivirale labeling. Deze methode maakt langetermijnobservatie van neuromodulator-effecten op mitochondriale dynamiek mogelijk.

Neuromodulatie en Mitochondriale Transport: Live Imaging in hippocampale neuronen dan lange duur

Meer video's verkennen