Name: Autoloog bloed injectie tot spontane intracerebrale bloeding in Muizen Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-24T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: Leer een autoloog bloedinjectiemodel voor intracerebrale bloeding bij muizen met een dubbele injectietechniek. Deze methode minimaliseert bloedreflux en doodruimte voor betrouwbaar onderzoek naar pathologie en gedragsuitkomsten in vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Het werk werd gefinancierd door een beurs van het Institute for Translational Medicine en Therapeutics, en een training subsidie ​​van het Instituut voor Geneeskunde en Engineering (T32HL007954) aan de Universiteit van Pennsylvania en de Marlene L. Cohen en Jerome H. Fleisch Scholar Grant op de University of Connecticut Health Center (LHS) en NIH NS-029331 (FAW).

1. De voorbereiding van de apparatuur <ol><li> Veeg de stereotaxische frame en pomp met 75% ethanol om bacteriële besmetting te minimaliseren. </li><li> Steriliseer Hamilton spuit en fused silica naald. Opmerking: Als chemische sterilisatie wordt gebruikt, moet u een paar keer spoelen in steriel water voor gebruik. </li><li> Veeg het oppervlak van de paraffine papier met 75% ethanol en laten drogen. </li></ol> 2. De voorbereiding van de muis voor injectie Let op: Ben muizen geleverd aan uw dier faciliteit minstens 7 dagen voor de operatie om hen in staat stellen om te wennen aan de nieuwe omgeving en stress te verminderen. <ol><li> Weeg muis voor pre-operatieve baseline. </li><li> Veroorzaken anesthesie met 30% zuurstof, 70% lachgas, en 4% isofluraan tot niet reageren op de staart knijpen </li><li> Injecteren muis met buprenorfine 0.1mg/kg intraperitoneaal voor post-operatieve analgesie </li><li> Shave hoofdhuid </li><li> Jas ogen met steriele vaseline </li><li> Bereid hoofdhuid met betadine x 3 doekjes, dan laat de hoofdhuid drogen </li><li> Maak 1 cm middellijn sagittale incisie van de hoofdhuid met behulp van steriele chirurgische scalpel Opmerking: Een royale incisie wordt compleet blootstelling van de schedel monumenten mogelijk te maken. </li><li> Shave 1 cm van de ventrale oppervlak van de staart vanaf 1 cm van de basis en voor te bereiden met betadine x 3 doekjes </li><li> Plaats muis op stereotaxische kader Opmerking: Het is belangrijk om ervoor te zorgen muis stevig in het frame met oppervlakte van de schedel parallel met de basis van het frame, met een uitstekende blootstelling van bregma en ten minste 3 mm aan de rechterkant van bregma. </li></ol> 3. Intracerebrale bloeding chirurgie Opmerkingen: Gedurende de hele operatie de muis wordt verdoofd met 30% zuurstof, 70% lachgas, en 1-3% isofluraan, onderbreking gehandhaafd blijft op 37 ± 0,5 ° C met behulp van een thermistor-gecontroleerde verwarming pad en gecontroleerd door rectale thermometer. <ol><li> Bevestig steriele 27 g naald op 1 cc spuit op het frame. </li><li> Stel stereotaxische arm totdat de naald is precies boven bregma. </li><li> Stel de arm zodat naald in +2.5 mm lateraal van bregma en lager aan de oppervlakte van de schedel. </li><li> Handmatig draaien spuit om braam gat te maken op het oppervlak van de schedel bij het toepassen van lichte neerwaartse beweging van frame-zorg niet volledig te perforeren schedel. </li><li> Handmatig te verwijderen naald en compleet braam gat met spuit / naald Let op: Voltooiing van de braam gat met de hand maakt voor onmiddellijke herkenning wanneer u geperforeerd de binnenste tabel van de schedel en minimaliseert het risico van onbedoeld duwen naald in de hersenen parenchym. </li><li> Maak dwarse incisie op de buik oppervlak van de staart met steriele chirurgische mes en laat 2 tot 3 grote druppels arteriële bloed te vallen op paraffine papier. Dan snel stoppen met bloeden met een druk met behulp van steriel gaas. </li><li> Trekken 17 microliter bloed in Hamilton spuit en plaats de spuit op de pomp. </li><li> Stel stereotaxische arm naar punt 5 ° mediaal ten opzichte van verticale as. </li><li> Zorgvuldig aan te passen stereotaxische arm, zodat punt van de naald over de braam gat in de schedel en vervolgens een lagere naald 3,5 mm. </li><li> Wacht twee minuten daarna de naald 0,5 mm te trekken (zodat tip is 3 mm diep) </li><li> Wacht 5 minuten zodat de hersenen opnieuw uit te breiden rond de naald en het risico van het bloed refluxen van de naald inbrengen spoor tijdens de injectie te minimaliseren. </li><li> Injecteer blood 1 pl / minuut voor 7,5 pi. </li><li> Wacht 5 minuten zodat de eerste de bloedstolling en voor weefsel verschuift naar optreden verhogingen van intracraniële druk te minimaliseren. </li><li> Injecteer de resterende 7,5 pi op 1 ul / minuut </li><li> Laat de naald in de plaats te blijven gedurende 25 minuten te laten zijn voor de bloedstolling Opmerking: Het niet te wachten voor de bloedstolling zal resulteren in het bloed van reflux van de naald inbrengen site wanneer de naald </li><li> Trek langzaam de naald en onmiddellijk spoelen met heet water om eventuele resten van bloed in de naald te voorkomen dat stolling en zorgen voor hergebruik van de naald. </li><li> Haal de muis uit het frame en sluit de staart en de hoofdhuid incisies met veterinaire chirurgische lijm. </li><li> Schakel de anesthesie. </li><li> Laat de muis om te ontwaken terwijl ze continu verwarmd met gratis toegang tot vochtig voedsel. </li><li> Keer terug muis om kooi met nestgenoten toen helemaal wakker. Plaats nat voer pellet op de bodem van de kooi om dieren te helpen bij de toegang tot voedsel. </li></ol> 4. Representatieve resultaten: <img src="/files/ftp_upload/2618/2618fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Coronale deel van de hersenen van muizen 15 minuten na ICH operatie. Direct na het offer van de hersenen werd gecontroleerd op de ICH succes gebaseerd op het bruto inspectie van een coronale gedeelte op de naald inbrengen site. Bloedingen die naar beneden gevolgd aan de basis van de hersenen, tot de naald spoor langs de corpus callosum, of in de ventrikels werden geacht geen succes en dat muizen werd geëlimineerd uit alle analyses. Overall ICH success cijfers waren 75-85% in 50 muizen met 0% sterfte. <img src="/files/ftp_upload/2618/2618fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Cilinder testen hebben aangetoond linker hemiparese na rechts basale ganglia ICH. (A) Sample muis achter na de ICH-operatie. Let op de plaatsing van alleen de rechter voorpoot op de muur van de cilinder na het linker basale ganglia ICH. (B) Grafiek van de cilinder het testen van 1 resultaten van cohort van muizen na de operatie ICH (n = 5) in vergelijking met placebo (n = 4). Sham muizen hadden alle procedures met uitzondering van bloed-injectie (naald werd ingebracht in de hersenen). Elke muis werd geplaatst in een 12-cm diameter helder glazen cilinder en gecontroleerd op 20 opsteekt. De eerste plaatsing van de voorpoten op de wand van de cilinder werd gescoord per achterzijde. Latere bewegingen (zoals de laterale exploratie) waren niet gescoord totdat de muis terug naar de grond en de volgende achterste gescoord. De lateralisatie index werd berekend als (# rechter voorpoot plaatsingen aan de kant van de cilinder - # linker voorpoot plaatsingen) / (# # rechts + links + # beide), waarbij 0 aangegeven geen voorkeur voorpoot en 1 aangegeven alleen het recht voorpoot werd gebruikt .

<ol><li>Hua, Y., Schallert, T., Keep, R. F., Wu, J., Hoff, J. T., Xi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+Tests+After+Intracerebral+Hemorrhage+in+the+Rat%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Behavioral Tests After Intracerebral Hemorrhage in the Rat.</a> Stroke. 33, 2478-2484 (2002).</li>
<li>James, M., Warner, D., Laskowitz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+Models+of+Intracerebral+Hemorrhage%3A+A+Translational+Perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Neurocritical+Care%22%5BJournal%5D)">Preclinical Models of Intracerebral Hemorrhage: A Translational Perspective.</a> Neurocritical Care. 9, 139-152 (2008).</li>
<li>Foerch, C., Arai, K., Jin, G., Park, K. -P., Pallast, S., van Leyen, K., Lo, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+Model+of+Warfarin-Associated+Intracerebral+Hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Experimental Model of Warfarin-Associated Intracerebral Hemorrhage.</a> Stroke. 39, 3397-3404 (2008).</li>
<li>Nakamura, T., Xi, G., Hua, Y., Schallert, T., Hoff, J. T., Keep, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+hemorrhage+in+mice%3A+model+characterization+and+application+for+genetically+modified+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Intracerebral hemorrhage in mice: model characterization and application for genetically modified mice.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 24, 487-494 (2004).</li>
<li>Rynkowski, M. A., Kim, G. H., Komotar, R. J., Otten, M. L., Ducruet, A. F., Zacharia, B. E., Kellner, C. P., Hahn, D. K., Merkow, M. B., Garrett, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+intracerebral+hemorrhage+using+autologous+blood+infusion%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protocols%22%5BJournal%5D)">A mouse model of intracerebral hemorrhage using autologous blood infusion.</a> Nat. Protocols. 3, 122-128 (2008).</li>
<li>Wang, J., Fields, J., Doré, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+an+improved+preclinical+mouse+model+of+intracerebral+hemorrhage+using+double+infusion+of+autologous+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">The development of an improved preclinical mouse model of intracerebral hemorrhage using double infusion of autologous whole blood.</a> Brain Research. 1222, 214-221 (2008).</li>
<li>Zhao, X., Sun, G., Zhang, J., Strong, R., Song, W., Gonzales, N., Grotta, J. C., Aronowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoma+resolution+as+a+target+for+intracerebral+hemorrhage+treatment%3A+Role+for+peroxisome+proliferator-activated+receptor+%CE%B3+in+microglia%2Fmacrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Hematoma resolution as a target for intracerebral hemorrhage treatment: Role for peroxisome proliferator-activated receptor γ in microglia/macrophages.</a> Annals of Neurology. 61, 352-362 (2007).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Deze chirurgische model van intracerebrale bloeding in muizen met behulp van autoloog bloed staart slagader resulteert in een reproduceerbaar model van spontane basale ganglia bloeding. Een ICH-model bij muizen biedt het voordeel van de beschikbaarheid van transgene dieren voor de pathofysiologie te onderzoeken, maar hun kleine formaat maakt neurochirurgische procedures meer technisch moeilijker dan in de grotere dieren. Het collagenase model en de autologe bloed injectie model zijn twee ger...

Stereotaxisch frame voor muis neurochirurgie (Stoelting, 51.925) Microinfusion pomp en processor (UMP-3 en Micro4, World precisie-instrumenten, Sarasota, FL) Muis warmer (Stoelting, 50300) Inhalatie muis anesthesie (Braintree Scientific, EZ-AF9000) 25 pi gasdicht borosilicate Hamilton spuit met gecoate zuiger en zonder naald (Hamilton bedrijf, Reno, NV, 1702RN spuit: 765401, ferrule: 30949, spacer: 30946) fused silica naald gesneden 2 cm lengte (Hamilton, 17739) * Noot Hamilton spuit en gesmolten silica naald kan worden hergebruikt voor meerdere operaties als voorafgaand aan elke operatie gesteriliseerd. Deze materialen zijn van cruciaal belang om te voorkomen dat de bloedstolling. Steriele chirurgische handschoenen Chirurgische jurk, motorkap en het masker Betadine 75% ethanol steriele naald 27 g (voor eenmalig gebruik) steriele 1 cc spuit (eenmalig gebruik) steriele chirurgische mes Cidex steriel water buprenorfine en isofluraan steriel gaasje paraffine papier pleinen Veterinaire chirurgische lijm (Vetbond, 3M, St. Paul, MN)

autoloog bloed injectie tot spontane intracerebrale bloeding in muizen model

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Het onderzoek naar de pathofysiologie van letsel na een intracerebrale bloeding (ICH) vereist een reproduceerbaar diermodel. Hoewel ICH verantwoordelijk is voor 10-15% van alle beroertes, bestaat er nog steeds geen specifieke effectieve therapie. Het model voor autologe bloedinjectie bij muizen omvat de stereotaxische injectie van arterieel bloed in de basale ganglia, wat een spontane hypertensieve bloeding bij de mens nabootst. De respons op de bloeding kan vervolgens in vivo worden bestudeerd en de neurobehaviorale tekorten worden gekwantificeerd, wat een beschrijving van de daaropvolgende pathologie en het testen van potentiële therapeutische middelen mogelijk maakt. De procedure die in dit protocol wordt beschreven, maakt gebruik van de dubbele injectietechniek om het risico op bloedreflux via het naalkanaal te minimaliseren, bevat geen anticoagulantia in het pompsysteem en elimineert alle dode ruimte en uitrekbare slangetjes in het systeem.

De autoloog bloed injectie model van intracerebrale bloeding bij muizen beschreven in dit protocol maakt gebruik van de dubbele injectietechniek te minimaliseren het risico van het bloed reflux tot de naald baan, geen anticoagulantia in het pompsysteem, en elimineert alle dode ruimte en uitbreidbaar slangen in het systeem.

Autoloog bloed injectie tot spontane intracerebrale bloeding in Muizen Model

Onderzoek naar de pathofysiologie van letsel na een intracerebrale bloeding (ICB) vereist een reproduceerbaar diermodel. Hoewel ICB verantwoordelijk is voor 10-15% ...

Het algemene doel van deze procedure is om een spontane intracerebrale bloeding bij de muis te modelleren om de aanhoudende pathologie en neurobehaviorale uitkomsten in vivo te bestuderen. Dit wordt bereikt door de muis eerst voor te bereiden op de operatie. De ventrale zijde van de staart en de hoofdhuid worden geschoren en gereinigd.Vervolgens wordt, met behulp van de referentiepunten van de schedel, een nauwkeurig geplaatste boorgat door de schedel gemaakt. Ten derde wordt er bloed onttrokken uit de staartslagader en stereotactisch in de basale ganglia geïnjecteerd. De injectienaald wordt vervolgens voorzichtig verwijderd en de incisie wordt gesloten.Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die lokale ontsteking, celdood en een neurologisch tekort aantonen via immunohistochemie, flowcytometrie en functionele tests, tussen andere methoden. In het algemeen zullen onderzoekers die nieuw zijn met de procedure moeite hebben met bloedstollingsproblemen, omdat de kleine hoeveelheid geïnjecteerd bloed in het systeem zal stollen in de tijd die nodig is om de injectie uit te voeren. Na het induceren van anesthesie met isofluorine, scheer de hoofdhuid en veeg de huid drie keer schoo

autologous-blood-injection-to-model-spontaneous-intracerebral

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Klinisch relevante diermodellen van intracerebrale bloeding (ICH) zijn nodig om onze kennis van hemorragische beroerte te breiden en nieuwe therapeutische strategieën te onderzoeken. In deze studie beschrijven we twee ICH en beoordelen modellen die eenzijdig injecties van ofwel autoloog volbloed of bacteriële collagenase implementeren in de basale ganglia (corpus striatum) van muizen.

Modeling intracerebrale bloeding in Muizen: Injectie van autoloog bloed of bacterieel collagenase

This video demonstrates the procedure for establishing a subarachnoid hemorrhage rat model. An anesthetized rat is implanted with probes to measure intracranial pressure and cerebral blood flow. The target site is identified, and the needle is inserted at a pre-chiasmatic position. Autologous blood is then injected into the subarachnoid space, increasing intracranial pressure and decreasing cerebral blood flow, establishing the model.

Establishing a Subarachnoid Hemorrhage Rat Model Induced by Autologous Blood Injection

Source: Tang, X. et. al., Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood. J. Vis. Exp. (2021)This protocol describes the controlled infusion of autologous blood into the pontine region of a rat's brain to model massive pontine hemorrhage. The purpose is to simulate a localized brain bleed by increasing localized pressure.

Inducing Massive Pontine Hemorrhage in a Rat Model by Autologous Blood Injection

Een gestandaardiseerde muismodel van subarachnoïdale bloeding door intraluminale Cirkel van Willis perforatie wordt beschreven. Vaatperforatie en subarachnoïdale bloeden worden bewaakt door intracraniële druk monitoring. Daarnaast zorgen verschillende vitale parameters worden geregistreerd en gecontroleerd om fysiologische omstandigheden te handhaven.

Een muizenmodel van subarachnoïdale bloeding

Preklinische modellen van intracerebrale bloeding worden gebruikt om bepaalde aspecten van klinische ziekte na te bootsen. Daardoor kunnen mechanismen van letsel en potentiële therapeutische strategieën worden onderzocht. In dit protocol worden twee modellen van intracerebrale bloeding beschreven, intrastriatale (basal ganglia) injecties van autoloog bloed of collagenase.

Intrastriatal Injectie van autoloog bloed of Clostridium Collagenase als muismodellen van intracerebrale bloeding

We beschreven in dit protocol een gestandaardiseerde subarachnoïdale bloeding (SAH) muis model door een dubbele injectie van autologe volbloed in de cisterna magna. De hoge mate van standaardisatie van de dubbele injectieprocedure vertegenwoordigt een midden-tot-acuut model van SAH met relatieve veiligheid met betrekking tot sterfte.

Dubbele directe bloedinjectie in de Cisterna Magna als model van subarachnoïdale bloeding

We presenteren een protocol om een enorm pontine bloedingsmodel in een rat vast te stellen via dubbele injectie van autoloog bloed.

Massieve Pontine bloeding door dubbele injectie van autologe bloed

Subarachnoïdale bloeding blijft een hoge last van mortaliteit en morbiditeit bij de mens met zich meebrengen. Om verder onderzoek naar de aandoening en de pathofysiologie ervan te vergemakkelijken, wordt een pre-chiasmatisch, enkelvoudig injectiemodel gepresenteerd.

Pre-chiasmatische, enkele injectie van autoloog bloed om experimentele subarachnoïdale bloeding in een rattenmodel te induceren

Ziekte van Parkinson is een neurodegeneratieve aandoening die resulteert uit de degeneratie van dopaminerge neuronen in het centrale zenuwstelsel, waardoor voortbeweging defecten. Rotenone modellen ziekte van Parkinson in Drosophila. In dit document worden twee testen die zowel spontaan en schrikken geïnduceerde motoriek gebreken veroorzaakt door rotenon karakteriseren.

Methoden te karakteriseren Spontane en Schrik-geïnduceerde Locomotion in een-Rotenon geïnduceerde Parkinson&#39;s Disease Model van<em&gt; Drosophila</em

Hier beschrijven we een methode voor de vaststelling van een model voor Zika virus-geïnduceerde microcefalie in muis. Dit protocol bevat methoden voor embryonale, Neonatale en volwassene-fase intracerebrale inoculatie van de Zika-virus.

Tot vaststelling van Muismodellen voor Zika-Virus-geïnduceerde neurologische aandoeningen met behulp van intracerebrale injectie strategieën: embryonale, Neonatale en volwassen

Leer een autoloog bloedinjectiemodel voor intracerebrale bloeding bij muizen met een dubbele injectietechniek. Deze methode minimaliseert bloedreflux en doodruimte voor betrouwbaar onderzoek naar pathologie en gedragsuitkomsten in vivo.

Autoloog bloed injectie tot spontane intracerebrale bloeding in Muizen Model

Meer video's verkennen