Name: Muis Compleet Stasis Model van Inferior Vena Cava trombose (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 34 s
Description: Leer een muismodel van inferieure vena cava-trombose met complete stasis om trombusvorming en ontstekingsprogressie te bestuderen. Deze methode kwantificeert veneus weefsel en trombusbelasting gedurende zes dagen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Muis Anesthesie Procedures <ol><li> Dieren uit hun kooi en geplaatst in een verdovingsmiddel pre-operatieve inductie kamer voor gas inductie bij 5% isofluraan en 100% zuurstof, bij een debiet van 0,5 liter per minuut (vaporizer gecontroleerd). </li><li> Muizen worden verdoofd in de verdoving inductie kamer, verwijderd van kamer en het ventrale buik wordt geschoren met de tondeuse, of onderhouden in de kamer als een haar ontharingscrème wordt gebruikt (1min). </li><li> Hoewel nog steeds onder sedatie, ze zijn gewogen, zijn de ogen gesmeerd met steriele oogzalf en vervolgens geplaatst in een dorsale recumbancy op een warm water circuleert apparatuur voor verwarming van onder algehele narcose, met een neus, met behulp van isofluraan en zuurstof. Op dit punt de zuurstof tarief wordt verlaagd tot 0,2 liter per minuut. </li><li> De buik is bespoten met chloorhexidine-oplossing (chloorhexidine diacetaat wordt snel bacterialcidal en persistent) en veegde met een steriel gaasje drie keer of totdat de operatiewond schoon is. </li></ol> 2. Muis Micro-chirurgische en recovery procedures <ol><li> Een ventrale middellijn incisie (2cm) wordt gemaakt met iris schaar door de huid en de buikwand het blootstellen van de buik. Een steriele zoutoplossing gedrenkte 2x2in gaas wordt gebruikt om de darmen naar links van het dier kant weer te geven. Een muis restrainer is opgezet zodat visualisatie van de vena cava inferior (IVC). </li><li> Op dit punt, is een onderhouds-niveau van 2% isoflurance en 100% zuurstof van 0,2 liter / min wordt gebruikt voor de rest van de chirurgische procedure. </li><li> Stompe dissectie wordt vergemakkelijkt met een steriele applicator staafje en een extra delicate iris half gebogen weefsel tang. Voorzichtigheid is geboden bij het hanteren muisweefsels want ze zijn uiterst kwetsbaar. Bij het binnenkomen van de buikholte, gebruik dan een steriele zoutoplossing gedrenkte 4x4in gaas om na te denken en exterioriseren de darmen op een steriel laken, waardoor visualisatie van het IVC. </li><li> Alle IVC terug branches, van de renale aderen naar de iliacale bifurcatie, worden dichtgeschroeid terwijl de zijtakken zijn geligeerd met 7-0 niet-reactief prolene hechtingen. </li><li> Het IVC is gescheiden van de aorta, gewoon inferieur aan de nier aderen. 7-0 prolene wordt gebruikt om de IVC ligeren. </li><li> De laparotomie site is gesloten in een twee-lagen mode. Ons laboratorium maakt gebruik van 5-0 Vicryl, een synthetisch hechtdraad, in een doorlopend patroon af te sluiten van de buikwand. Adhesive huidlijm wordt gebruikt om de huid te sluiten. Er zijn geen externe hechtingen voor verwijdering. </li><li> Muizen worden dan teruggevonden in een individuele muizenkooi, waargenomen na operatie (45 minuten tot 2 uur) onder een warmtelamp (minimale afstand 24-inch uit de buurt van kooi), keerde daarna terug naar hun oorspronkelijke woningen. Pijnstillers en anti-inflammatoire middelen kunnen worden gebruikt als het niet interfereert met studie doelstelling. Wetenschappelijke redenen om pijnstillers te weigeren, veterinaire en ICUCA goedkeuring nodig zijn. Ons laboratorium heeft uitgewezen dat Buprenorfine, 0.05-0.1 mg / kg SQ is een uitstekende pre-en post-operatieve analgeticum voor muizen. Bovendien kan Lidocaïne op 4mg/kg (0,4 ml / kg van een 1% oplossing) worden toegediend in de incisie site wanneer systemische analgetica kan experimentele resultaten verwarren. </li><li> Sham dieren uit elke experimentele groep ondergaat de bovenstaande dissectie gebruikt voor de chirurgische benadering, met uitzondering van het IVC of een drainerende vestigingen zijn niet afgebonden of dichtgeschroeid. </li><li> Euthanasie wordt uitgevoerd in overeenstemming met de aanbevelingen uiteengezet door de American Veterinary Medical Association richtsnoeren inzake Euthanasie voor knaagdieren in te stellen. </li></ol>

<ol><li>Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+mortality+of+venous+thrombosis%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study.</a> J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).</li>
<li>White, R. H., Keenan, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+race+and+ethnicity+on+the+incidence+of+venous+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism.</a> Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).</li>
<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).</li>
<li>Henke, P. K., Varga, A., De, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+vein+thrombosis+resolution+is+modulated+by+monocyte+CXCR2-mediated+activity+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).</li>
<li>McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+is+associated+with+impaired+thrombus+resolution+in+a+mouse+model+of+stasis+induced+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis.</a> Thromb Res. 125, 72-78 (2010).</li>
<li>Myers, D., Farris, D., Hawley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selectins+influence+thrombosis+in+a+mouse+model+of+experimental+deep+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis.</a> J Surg Res. 108, 212-221 (2002).</li>
<li>Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-selectin+and+leukocyte+microparticles+are+associated+with+venous+thrombogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis.</a> J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).</li>
<li>Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+venous+thrombosis+with+an+oral+inhibitor+of+P+selectin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin.</a> J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).</li>
</ol>

De muis complete Stasis Model van Inferior Vena Cava Trombose kan worden uitgevoerd op meerdere stammen van muizen van verschillende leeftijden. Het model is het meest geschikt is voor muizen van minstens 20 gram in gewicht. Dit dier model van veneuze trombose kunnen onderzoekers bestuderen inflammatoire interacties tussen de ader wand en de occlusieve veneuze trombus. Vanuit onze ervaring hebben we gemerkt dat 10 of meer dieren per groep nodig zijn om statistische significantie te verkrijgen tussen de groepen voor thro...

<table border="1"><tbody><tr><td> Supplies and Equipment </td></tr><tr><td> Isofluraan gas </td></tr><tr><td> Prolene 7-0 hechtdraad </td></tr><tr><td> Vicryl 5-0 hechtdraad </td></tr><tr><td> Huidlijm </td></tr><tr><td> Oog glijmiddel </td></tr><tr><td> Nolvasan Oplossing of bacteriostatisch oplossing </td></tr><tr><td> Stereomicroscoop omvang </td></tr><tr><td> MediCapture </td></tr><tr><td> Cotton Applicators </td></tr><tr><td> 2x2 Gauze </td></tr><tr><td> Verwarming pad </td></tr><tr><td> Verdoving machine </td></tr><tr><td> Glazen kraal instrument sterilisator </td></tr><tr><td> Micro-chirurgische instrumenten </td></tr><tr><td> Buik te fixeren, </td></tr></tbody></table>

muis compleet stasis model van inferior vena cava trombose

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Veneuze trombo-embolie (VTE) omvat zowel diepe veneuze trombose (DVT) en longembolie (PE). In de Verenigde Staten (VS), de hoge morbiditeit en mortaliteit te maken VTE een serieus gezondheidsprobleem 1-2. Na hart-en vaatziekten en beroertes, VTE is de derde meest voorkomende vasculaire ziekte 3. In de VS alleen, er is een naar schatting 900.000 mensen die lijden elk jaar met 300.000 sterfgevallen die jaarlijks 3. Een betrouwbare in-vivo diermodel om de mechanismen van deze ziekte onderzoek nodig is. De voordelen van het gebruik van de muis compleet stasis model van de vena cava inferior trombose zijn meerdere. De muis-model zorgt voor de toediening van zeer kleine hoeveelheden van de beperkte beschikbaarheid te testen stoffen, het verminderen van de kosten dramatisch. Meest veelbelovend is het potentieel voor muizen met gen-knockouts die het mogelijk maken specifieke ontstekings-en stollingsfactor functies worden afgebakend. Huidige moleculaire testen zorgen voor de kwantificering van ader muur, trombose, volbloed en plasma voor assays. Echter, een grote zorg met betrekking tot dit model is de operatieve grootte van beperkingen en de brosheid van de schepen. Ook vanwege de kleine steekproef IVC gewicht (gemiddeld 0.005 gram) is het noodzakelijk om het aantal dieren aan nauwkeurige statistische analyse voor weefsel, trombose, en bloed testen, zoals real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot te verhogen, enzym-linked immunosorbent (ELISA), zymografie, ader wand-en trombus cellulaire analyse, en vol bloed en plasma assays 4-8. Het grote nadeel van de stasis model is dat het ontbreken van de bloedstroom het maximale effect van de toegediende systemische therapeutische middelen op de trombus en aderwand remt.

De muis volledige stase model van de vena cava inferior trombose levert kwantificeerbare hoeveelheden aderwand weefsel en trombus. Het is nuttig gebleken voor het evalueren van interacties tussen de ader muur en de occlusieve trombus en bij de beoordeling van de progressie van acute naar chronische ontsteking.

Muis Compleet Stasis Model van Inferior Vena Cava trombose

Veneuze trombo-embolie (VTE) omvat zowel diepveneuze trombose (DVT) als longembolie (LE). In de Verenigde Staten (V.S.) zijn de hoge morbiditeit en ...

Het algemene doel van deze procedure is om de IVC te ligeren, waardoor een volledige stasis ontstaat die leidt tot een trombus, om zo thrombogenese en resolutie te bestuderen. Dit wordt bereikt door eerst de IVC bloot te leggen met een ventrale mediane incisie. Vervolgens worden alle drainerende takken naar de rugzijde en zijden gelokaliseerd en vervolgens gecauteriseerd of geligeerd.Vervolgens wordt de vena cava inferior (VCI) onder de niervenen van de aorta gescheiden en afgebonden. Ten slotte worden de VCI en de trombus op verschillende tijdstippen geoogst voor moleculaire evaluatie. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die de mate van trombusbelasting tot en met dag zes laten zien.Het muismodel voor ligatie van de vena cava inferior is in ons laboratorium ontwikkeld om gen-gedelete muizen te bestuderen. Een visuele demonstratie van dit chirurgische model is essentieel, aangezien de procedurele stappen moeilijk aan te leren zijn vanwege de microsurgische technieken die nodig zijn om dit protocol uit te voeren. Begin met het anesthetiseren van het dier in een preoperatieve inductiekamer met 5% isofluraan en 100% zuurstof met een stroomsnelheid van 0,5 liter per minuut.Verwijder het dier uit de kamer, houd het dier op zijn rug en scheer de ventrale buik met een elektrische trimmer. Weeg vervolgens het dier. Smeer daarna de ogen in met een steriele oogzalf.Plaats het dier op de rug op een warm waterkussen onder algemene anesthesie met isofluraan en zuurstof. Spray de buik met een chloorhexidine-oplossing en veeg deze af met steriel gaas. Desinfecteer de buik totdat de operatielocatie schoon is om met de chirurgie te beginnen.Maak met een irisschaar een ventrale midline-incisie door de huid en de abdominale wand, en leg de buikholte vrij met behulp van steriel gaas gedrenkt in fysiologische zoutoplossing. Verschuif de darmen van het dier naar de linkerzijde. Gebruik een muishouder om de vena cava inferior (VCI) bloot te leggen.Vanaf deze stap tot het einde van de operatie wordt de anesthesie in stand gehouden met 2% isofluoraan en 100% zuurstof met een debiet van 0,2 liter per minuut. Voer met een steriel wattenstaafje en extra fijne iristang een botte dissectie van de abdominale fascia uit om de IVC en alle zijtakken bloot te leggen.Cauteriseer eerst alle achterste zijtakken van de Vena Cava Inferior (IVC) vanaf de niervenen tot aan de iliaca-bifurcatie. Ligeer vervolgens de zijtakken met niet-absorbeerde Prolene-hechtdraad van maat 7-0. Scheid de IVC van de aorta net inferior van de niervenen.Gebruik 7-0 prolinehechtingen om de IVC af te binden. Sluit de buikwand met 5-0 Vicryl synthetische hechtingen. Breng vervolgens adhesieve huidlijm aan om de huid te sluiten.Houd het dier in een herstelkooi onder een warmtelamp, en plaats het dier vervolgens terug in de oorspronkelijke huisvestingseenheid. Deze analyse vergelijkt controlemuizen met dieren die ten tijde van de euthanasie een IVC-ligatie en trombose hadden ondergaan. Op dag twee of dag zes werden de IVC-trombus en de bijbehorende vene-wand verwijderd en gewogen.De meting van het thrombusgewicht stelt de onderzoeker in staat om de mate van trombose en de mate van resolutie hiervan in de loop van de tijd te documenteren. Het is een indicator voor de inflammatoire gebeurtenis geassocieerd met de activatie van endotheelcellen. De meting is daarnaast een nuttige indicatie van hoe effectief een therapeutisch middel is in het verminderen van ontsteking en de hoeveelheid thrombus in de vene-wand. Hier is de IVC samen met de aorta verwijderd.In paraffine ingebedde coupes op objectglazen, gekleurd met hematoxyline en eosine. Deze grafiek geeft het aantal polymorfnucleaire cellen of PMN's weer in weefsels van controlemuizen versus experimentele muizen. De meting van inflammatoire celpopulaties in de veneuze wand wordt gebruikt om de natuurlijke overgang van een acute naar een chronische inflammatoire respons in de veneuze wand te documenteren; bij de aanwezigheid van veneuze trombi in een normaal dier zou een acute inflammatoire respons op dag twee hoofdzakelijk uit neutrofielen moeten bestaan.Zoals in deze figuur wordt aangegeven, zou de populatie neutrofielen in de aderverwand bij afwezigheid van een infectie na dag twee moeten afnemen. In ons muismodel van veneuze trombose wordt hier het aantal monocyten in de aderverwand vergeleken.Een meer subacute en chronische ontstekingsreactie van de aderwand zal stijgingen vertonen. In monocytenpopulaties van de aderwand scheiden monocyten proteolytische enzymen uit, waarvan is aangetoond dat ze de natuurlijke resolutie van de veneuze trombus bevorderen. Na verloop van tijd, indien er geen infectie aanwezig is. Na het bekijken van deze video zou u nu een goed inzicht hebben in hoe ons IVC-ligatiemodel moet worden uitgevoerd.Dit model is uitermate geschikt voor het bestuderen van thrombogenese en de resolutie van trombus over een bepaalde periode.

mouse-complete-stasis-model-of-inferior-vena-cava-thrombosis

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De elektrolytische inductie van endotheel activatie aan het interne oppervlak van de vena cava inferior resulteert in een veneuze soort trombusvorming te wijten aan endotheel activatie en gedeeltelijke bloed stasis, twee componenten van de triade Virchow's.

Elektrolytische Inferior Vena Cava Model (EIM) van veneuze trombose

This video demonstrates the procedure of replicating a thrombotic stroke in a mouse model by blocking the right common carotid artery and exposing the mouse to a low-oxygen environment. This process reduces blood and oxygen flow to the brain, causing blood clot formation and brain damage.

Inducing Thrombotic Stroke Through Hypoxia and Ischemia in a Mouse Model

We beschrijven hier stenose in de vena cava inferior als lymfkliertest model van diep-veneuze trombose. Dit model recapituleert bloed stroom beperking, een van de grote trekkers van veneuze trombose bij de mens.

Stenose van de Vena Cava Inferior: een lymfkliertest Model van diep-veneuze trombose

Dit protocol beschrijft de stappen voor het verkrijgen van veneuze trombose met behulp van een stase-model. Daarnaast zijn we met behulp van een niet-invasieve methode voor het meten van de vorming van trombose en resolutie na verloop van tijd.

Diep-veneuze trombose geïnduceerd door Stasis in muizen gecontroleerd door hoge frequentie Ultrasonografie

Een aortocaval fistel werd gecreëerd door het prikken van de Murine infra-nieraorta door beide muren in de inferieure Vena Cava en werd gevolgd door het creëren van een stenose in zijn uitstroom via gedeeltelijke ligatie van de inferieure vena cava. Dit reproduceerbare model kan worden gebruikt om centraal veneuze stenose te bestuderen.

Murine model van centraal veneuze stenose met behulp van Aortocaval fistel met een uitstroom stenose

Hier stellen we een nieuw Sprague-Dawley (SD) rattenmodel van superieure sagittale sinus (SSS) trombose vast via een draademboliemethode, en de stabiliteit en betrouwbaarheid van het model werden geverifieerd.<br...

Vaststelling van een rattenmodel van superieure sagittale-sinus occlusie via een draad-emboliemethode

Dit artikel heeft tot doel een geoptimaliseerde methode te presenteren voor het beoordelen van veneuze trombose in een muiskankermodel, met behulp van vasculaire clips om veneuze ligatie te bereiken. Optimalisatie minimaliseert de variabiliteit in trombosegerelateerde metingen en verbetert de relevantie voor bij de mens kankergerelateerde veneuze trombose.

Veneuze trombosetest in een muismodel van kanker

Het protocol presenteert een overlevingsmodel voor knaagdieren om interventies met een venoplastiekballon (VB) te testen in niet-trombotische, trombotische en posttrombotische diepe aders.

Knaagdier Inferieure Vena Cava Venoplastiek Ballon Model

Om onze kennis van cellulaire en moleculaire neotissue vorming te verbeteren, werd een muizenmodel van het TEVG recent ontwikkelde. De transplantaten werden geïmplanteerd infrarenale vena cava tussenvoeging enten in C57BL / 6 muizen. Dit model behaalt dezelfde resultaten als die bereikt bij onze klinische onderzoek, maar over een veel kortere tijd-cursus.

Implantatie van de vena cava inferior Interpositie Graft in muismodel

Kanker is een complexe ziekte die wordt beïnvloed door het weefsel rondom de tumor en lokale pro- en anti-inflammatoire mediatoren. Daarom kan orthotroop injectie modellen plaats subcutane modellen nuttig om de progressie van kanker te bestuderen op een wijze die beter nabootst humane pathologie.

Orthotopische Injectie van borstkankercellen in de uiervet Pad van Muizen tumorgroei te bestuderen.

Leer een muismodel van inferieure vena cava-trombose met complete stasis om trombusvorming en ontstekingsprogressie te bestuderen. Deze methode kwantificeert veneus weefsel en trombusbelasting gedurende zes dagen.

Muis Compleet Stasis Model van Inferior Vena Cava trombose

Meer video's verkennen