Cecal Ligatie Puncture Procedure

Hallo, mijn naam is Miguel Toscano van het laboratorium van Dr. Dena van de afdeling Microbiologie en Hematologie aan Temple University. Vandaag gaan we u laten zien hoe u het iCal-ligatie- en punctiemodel opzet in de C 57 Black Seas-muizenstam. In ons laboratorium gebruiken we dit model om humane sepsis na te bootsen.

In essentie bestaat dit model uit een punctie van het serum waardoor fecale materie in de peritoneumholte vrijkomt om een polymicrobiële sepsis te induceren, wat vervolgens leidt tot een versterkte immuunrespons. In dit model raken veel organen en verschillende celtypen onomkeerbaar beschadigd. Dit kan uiteindelijk leiden tot de dood van het dier.

Laten we beginnen. Het anesthetiseren van de muis. De eerste stap is het anesthetiseren van het dier door middel van een intraperitoneale injectie.

Een mengsel van ketamine en xylazine in een verhouding van één op één. Om te voorkomen dat de muis bijt en om te voorkomen dat het dier gewond raakt, moet de muis met één hand bij de staart worden vastgepakt. Met de andere hand wordt de muis tegen de vloer aan gedrukt.

Vervolgens pakken we de muis bij de achterkant van de kop en draaien we het dier op zijn rug om de buik vrij te maken. Met een insulinespuit van 29 gauge injecteren we 20 tot 30 µL van het anestheticum in de peritoneale holte. Ter voorbereiding van de muis op de procedure pakken we de muis bij de rug en scheren we de buik door de staart en/of het pootje van de muis vast te drukken.

We controleren of de muis niet gevoelig is voor pijn, waarna de buik wordt gedesinfecteerd. Dit gebeurt eerst door te scrubben met een Betadine-oplossing, gevolgd door het afvegen met een isopropylalcoholdoekje gedurende ten minste één minuut. Het uitvoeren van de laparotomie: om een laparotomie uit te voeren, tillen we de huid in het midden van de buik op met de pincet en maken we een kleine incisie van ongeveer één centimeter lang.

Til vervolgens het perineum op en maak een tweede kleine incisie om de peritoneale holte bloot te leggen. Houd het peritoneale membraan vast met een gebogen pincet. Identificeer en leg het caecum bloot door dit door het peritoneale membraan te leiden.

Plaats deze over de buik. Nu vindt de ligatie plaats. Dit is een belangrijke factor.

Om de ernst van het model te bepalen, kunnen we de intensiteit van de procedure moduleren. Afhankelijk van de uitgebreidheid van de ligatie zullen de muizen een mildere sepsis ontwikkelen. Indien de ligatie dichter bij het uiteinde van het caecum wordt uitgevoerd, ontstaat er een milde sepsis; in het midden een sepsis van gemiddelde ernst en dichter bij de ileocaecale klep een ernstige sepsis. De ernst van de procedure zal worden weerspiegeld in het sterftepercentage.

Ligeer nooit de ileocecale klep. Voer nu de ligatie uit met zijden hechtdraad en maak een dubbele knoop om deze stevig vast te zetten. Houd het caecum vast en maak voorzichtig een punctie vlakbij de ligatieplaats en maak een tweede punctie dichter bij het uiteinde van het caecum. Het membraan van het caecum is zacht en zal zeer gemakkelijk geperforeerd worden.

Door naalden met verschillende diktes te gebruiken en één of twee perforaties aan te brengen, kunnen we ook de ernst van het model moduleren. De hier getoonde methode met één of twee puncties is een alternatieve techniek voor de klassieke punctie die volledig door het weefsel gaat. Het voordeel van de methode met één of twee puncties is dat men de hoeveelheid uitgestoten feces beter kan controleren wanneer het cecum wordt samengedrukt.

Houd het caecum met beide vingers vast en druk het caecum voorzichtig uit om een zeer kleine hoeveelheid feces te extraheren. Sluit vervolgens de laparotomie, til het peritoneum op en plaats het caecum zorgvuldig terug in de peritoneale holte.

Wees uiterst voorzichtig om accidentele doorboringen van het caecum met de pincet te vermijden; het gebruik van een grotere pincet wordt aanbevolen. Het is nu tijd om de peritoneale holte te sluiten. Gebruik hiervoor zijden hechtdraad en zorg ervoor dat de sluiting zeer zorgvuldig wordt uitgevoerd.

We beginnen aan één zijde van de wond waar we een knoop leggen. Zet de hechting voort tot aan de andere zijde door de zijde onder de lus van de vorige punctie door te voeren. Om de huid te sluiten, kunnen we Mitchell-wondclips of reflexclips gebruiken, waarbij het juiste instrument wordt gebruikt om de clips te sluiten.

Plaats zoveel klemmen als nodig is om er zeker van te zijn dat de wond gesloten is. Reanimeer de muizen door subcutaan één milliliter voorverwarmde zoutoplossing te injecteren. Met behulp van een naald van 25 gauge zal deze vloeistofresuscitatiemaatregel de hyperdynamische fase van sepsis induceren, waarmee de procedure wordt voltooid.

Plaats de muis onder een infrarode warmtelamp, of eventueel op een warmtepad, totdat de muis zich heeft hersteld van de anesthesie. Bied voedsel en water aan op de bodem van de kooi en controleer de dieren elke acht tot 12 uur op tekenen van ziekte. Injecteer buprenorfine subcutaan voor postoperatieve analgesie.

Een ander te gebruiken analgeticum is T.Tramadol. Tekenen en symptomen van sepsis zijn koorts, lethargie, piloerectie, diarree, samenhuddelen en malaise. Ernstig zieke dieren vertonen een sterke daling van de lichaamstemperatuur en bewegen nauwelijks om lijden te voorkomen.

Ze moeten in dit stadium worden geëuthanaseerd. Dit is hoe we de sickle-ligatie en het punctiemodel uitvoeren. We hopen dat u deze demonstratie van de procedure met interesse heeft gevolgd en dat deze zeer nuttig is voor uw onderzoek voordat u start met uw dierstudie. We raden u ten zeerste aan om voor de training oude of ongebruikte muizen te gebruiken, zodat u de juiste ernstgraad voor uw experimenten kunt vaststellen door de lengte van de ligatie, de dikte van de naald en het aantal puncties aan te passen.

Dat gezegd hebbende, tot ziens.