Name: Cecal Ligatie Puncture Procedure (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: Leer de cecale ligatie- en punctiemethode voor sepsisonderzoek met C57BL/6 muizen. Dit model simuleert polymicrobiële sepsis en helpt bij het bestuderen van immuunresponsen en orgaanschade.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door een subsidie ​​van de Pennsylvania Department of Health. Dr Miguel Garcia Toscano was een postdoc aan de Temple University, gefinancierd door de Alfonso Martin Escudero Foundation tijdens deze studie. We willen Iliya Yordanov en Kevin Kotredes bedanken voor het maken van de video.

1. Cecal Ligatie en Prik als een muismodel voor Human Sepsis Voor deze procedure C57BL / 6 muizen (7-9 weken oud) worden gebruikt. <ol><li> Verdoven van de muis door het injecteren van intraperitoneaal een oplossing van 1:1 ketamine (75mg/kg) en xylazine (15mg/kg). Als referentie, injecteren 30 ul van de 1:1-oplossing in een muis met een gewicht van 20 gram. Als alternatief kunnen muizen worden verdoofd met isofluraan geïnhaleerd met behulp van een verdoving vaporizer. </li><li> Scheer de buik van de muis en desinfecteren gebied door eerst betadine oplossing gevolgd door af te vegen met een 70% alcohol (nummer 1 in de reeks van plaatjes hieronder). Chloorhexidine kan worden gebruikt als een alternatief ontsmettingsmiddel. Optioneel: een steriel laken kan worden gebruikt om het gebied schoon te houden. </li><li> Onder aseptische omstandigheden, de praktijk een 1 tot 2 cm middellijn laparotomie en bloot de blindedarm met aangrenzende darm (2 en 3). </li><li> De blindedarm is strak geligeerd met een 6,0 zijden hechtdraad (6-0 PROLENE, 8680G, Ethicon) aan de basis onder de ileo-cecal klep, en is geperforeerd of twee keer met een 19-gauge naald (4 en 5) op dezelfde kant van de blindedarm. Houdt u er rekening mee dat de lengte van de geligeerde blindedarm gedefinieerd als de afstand van het distale einde van de blindedarm te ligatie punt zal de mate van ernst te bepalen. Een afstand van&gt; 1 cm produceert hoogwaardige sepsis, terwijl een afstand van ≤ 1 cm produceert midden-tot lage kwaliteit sepsis. Merk ook op dat het gebruik van de blindedarmkeutels perforatie methode hier getoond wordt is verschillend van de standaard door en door punctie techniek (de invoering van een naald door de blindedarm). Beide methoden betrouwbaar leveren hetzelfde resultaat sepsis. Echter, een nadeel van de door en door techniek is dat het niet gemakkelijker regelen van de hoeveelheid ontlasting geëxtrudeerd als de blindedarm wordt geperst. </li><li> De blindedarm is vervolgens voorzichtig geperst om een ​​kleine hoeveelheid ontlasting extruderen van de perforatie sites (6). De blindedarm wordt teruggegeven aan de buikholte en het buikvlies wordt gesloten met 6,0 zijden hechtingen. (7). </li><li> De huid wordt gesloten met Reflex 7mm clips (RS-9258, Roboz chirurgische instrumenten) of Michel wond clips (7 mm, RS-9270) (8). </li><li> Reanimeren muizen door het injecteren subcutaan 1 ml van de voorverwarmde 0,9% zoutoplossing met behulp van een 25G naald. Deze vloeistof reanimatie maatregel zal leiden tot de hyperdynamische fase van sepsis. Deze kritische stap verder is beschreven in de discussie sectie. </li><li> Optioneel: Injecteer onderhuids buprenorfine (0,05 mg / kg lichaamsgewicht) of tramadol (20mg/kg lichaamsgewicht) voor post-operatieve analgesie. Er rekening mee dat deze opiaten kan de ademhaling en beweging te onderdrukken en deze effecten kunnen verkeerd worden geïnterpreteerd als tekenen van sepsis. </li><li> De dieren worden tijdelijk geplaatst op een verwarmingselement of als alternatief weer onmiddellijk naar een kooi met blootstelling aan een infrarood warmte lamp van 150W tot ze herstellen van de narcose. Het herstel is vanaf 30 minuten tot 1 uur. </li><li> Bieden gratis toegang tot voedsel en water (hydrogel) geplaatst op de bodem van de kooi. </li><li> Muizen worden bewaakt elke 12 uur om te overleven voor een tot twee weken of gedood op verschillende tijdstippen voor de analyse van de verschillende parameters. </li></ol> Als controle voor de experimentele opzet, sham dieren zou de laparotomie techniek te volgen zonder ligatie en punctie. Zes tot 12 uur na de chirurgische procedure muizen zullen worden lusteloos en koorts, pilo-erectie, diarree, verdringt, en malaise, alle symptomen van sepsis. Muizen met zeer ernstige sepsis kan nauwelijks bewegen voorafgaand aan het overlijden en vertonen een dramatische daling van de lichaamstemperatuur. Op deze stap muizen moeten worden gedood om langdurige pijn en lijden te voorkomen. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig0.jpg" alt="Figuur 0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Cijfer 0"> 2. Meest voorkomende geanalyseerde parameters Het evalueren van de uitkomst van de procedure, kunnen verschillende parameters worden geanalyseerd in organen, cel-extracten of lichaamsvloeistoffen. Monsters kunnen worden verzameld op verschillende tijdstippen van drie uur tot een week na de chirurgische ingreep. <ol><li> Muizen overleven. </li><li> Cytokines en chemokines in het serum, buikholte en orgel extracten. <ol><li> Interleukine-6: Geproduceerd en vrijgegeven door monocyten, dendritische cellen, macrofagen, B-cellen, T-cellen, granulocyten, mestcellen en nog veel meer soorten cellen. Het speelt een belangrijke rol in de acute fase reactie en ontsteking. </li><li> Tumor necrose factor-α: Pleiotrophic cytokine die een centrale rol bij ontstekingen en apoptose speelt. Geproduceerd door monocyten, macrofagen, neutrofielen, dendritische cellen en fibroblasten. </li><li> nterleukin-1β: Geproduceerd door monocyten, NK-cellen, dendritische cellen, B-cellen en T-cellen. Induceert koorts en acute fase eiwit synthese. </li><li> Interleukine 10: Bevordert fagocytische opname en Th2 reacties op, maar onderdrukt antigen presentatie en Th1 pro-inflammatoire reacties. </li><li> Interleukine 10: Bevordert fagocytische opname en Th2 reacties op, maar onderdrukt antigeen presentatie en Th1 pro-inflammatoire reacties. </li><li> Monocyt chemotactische proteïne-1 (ook bekend als CCL2): Recruits monocyten, geheugen T-cellen, en dendritische cellen naar sites van weefselbeschadiging en infectie. </li><li> KC (CXCL1): Geproduceerd door macrofagen en endotheelcellen. Muis KC is een krachtige neutrofiele lokstof en activator. </li><li> RANTES: Een monocyten chemoattractant. Het kan chemoattract gestimuleerde CD4 + / CD45RO + memory T-cellen en gestimuleerd CD4 + en CD8 + T-cellen met na ve en geheugen fenotypes. </li><li> Interferon-γ: afgescheiden door Th1-cellen, cytotoxische T-cellen, dendritische cellen en natural killer (NK) cellen. Verhoogt antigen presentatie en lytische activiteit in macrofagen en onderdrukt Th2 cel-activiteit. Bevordert de hechting en binding die nodig zijn voor migratie van leukocyten en bevordert de NK-cel activiteit. </li><li> High-Mobility Group B-1 eiwit: In monocyten is een nucleaire factor kappa B activator door te binden aan de cellulaire receptor voor de vervroegde glycatie eindproducten (RAGE), het activeren van de release van pro-inflammatoire mediatoren in de late fase van sepsis. </li></ol></li><li> Myeloperoxidase bepaling in organen als een maatregel van neutrofielen infiltratie. Myeloperoxidase (MPO) is een enzym peroxidase het meest overvloedig aanwezig is in neutrofiele granulocyten. Het is een lysosomale eiwit opgeslagen in azurofiele korrels van de neutrofielen. MPO is een heem pigment, die zijn groene kleur veroorzaakt in afscheiding die rijk zijn aan neutrofielen, zoals pus en sommige vormen van slijm. </li><li> Bacteriën belasting in organen en bloed, te meten als het aantal kolonievormende eenheden per milliliter. </li></ol> 3. Representatieve resultaten De CLP-procedure werd in eerste instantie uitgevoerd in de C57BL / 6 muizenstam. We testten verschillende parameters te moduleren van de ernst van sepsis door het veranderen van de lengte van de ligatie en de dikte van de naald zoals getoond in de figuren 1 en 2. Tussen deze twee factoren, de lengte van de ligatie lijkt effectiever dan de dikte van de naald procent overleven veranderen. Zoals weergegeven in figuur 1, provoceert het vergroten van de lengte van de ligatie met meer dan 1 cm een toename van de mortaliteit van 100% ten opzichte van muizen met een ligatie van ≤ 1cm. Het verhogen van de dikte van de naald verminderde ook het percentage overleving van 100% (met behulp van een 22G naald) tot 55% (met een 19G naald) met twee lekke banden. We hebben ook het effect getest van CLP op de C57BL / 6 en 129SvJ muizen om te bepalen of de verschillende muizenstammen vergelijkbare of verschillende gevoeligheid display CLP-geïnduceerde sepsis. Figuur 3 laat zien dat onder dezelfde voorwaarden, 129SvJ muizen meer vatbaar zijn voor infectie dan C57BL / 6, aangegeven door een verhoogde mortaliteit procent. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Effect van ligatie lengte van de blindedarm in dierlijke overleving. CLP werd uitgevoerd in C57BL / 6 muizen met behulp van twee verschillende lengtes van cecal ligatie. Deze ene parameter van invloed op dramatisch dier overleven, omdat alle dieren in de groep met een ligatie gebied langer dan 1 cm stierf in minder dan 3 dagen in vergelijking met een groep dieren met een ligatie oppervlakte van 1 cm ongeveer. (N = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Invloed van de naald dikte op de overleving. CLP werd uitgevoerd in C57BL / 6 muizen met behulp van twee verschillende naalden maten, 19G en 22G. Muizen met de blindedarm geperforeerd met behulp van een 19G naald toonde een 55-60% overleven. In tegenstelling muizen met de blindedarm geperforeerd met behulp van een 22G naald toonde aan 100% te overleven, hoewel ze typische symptomen van een ontsteking ervaren tijdens de eerste 3-4 dagen, die verdween na 4 dagen (n = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig3.jpg" alt="Figuur 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3. Vergelijking van sepsis gevoeligheid tussen twee verschillende muizenstammen. De CLP-model is uitgevoerd in 129SvJ en C57BL / 6 onder dezelfde voorwaarden. Aan het einde van de evaluatieperiode het percentage overleving van de 129SvJ stam werd 25% minder dan in de C57BL / 6 stam, wat wijst op een hogere gevoeligheid voor ontstekingen veroorzaakt door polymicrobiële infectie. (N = 6).

<ol><li>Angus, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+severe+sepsis+in+the+United+States%3A+analysis+of+incidence%2C+outcome%2C+and+associated+costs+of+care%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care.</a> Crit Care Med. 29, 1303-1310 (2001).</li>
<li>Riedemann, N. C., Guo, R. F., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+enigma+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">The enigma of sepsis.</a> J Clin Invest. 112, 460-467 (2003).</li>
<li>Eichacker, P. Q., Gerstenberger, E. P., Banks, S. M., Cui, X., Natanson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meta-analysis+of+acute+lung+injury+and+acute+respiratory+distress+syndrome+trials+testing+low+tidal+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Meta-analysis of acute lung injury and acute respiratory distress syndrome trials testing low tidal volumes.</a> Am J Respir Crit Care Med. 166, 1510-1514 (2002).</li>
<li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sepsis%3A+setting+the+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Animal models of sepsis: setting the stage.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).</li>
<li>Doi, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, P. S., Star, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sepsis+and+sepsis-induced+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Animal models of sepsis and sepsis-induced kidney injury.</a> J Clin Invest. 119, 2868-2878 (2009).</li>
<li>Godshall, C. J., Scott, M. J., Peyton, J. C., Gardner, S. A., Cheadle, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+background+determines+susceptibility+during+murine+septic+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Genetic background determines susceptibility during murine septic peritonitis.</a> J Surg Res. 102, 45-49 (2002).</li>
<li>De Maio, A., Torres, M. B., Reeves, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+determinants+influencing+the+response+to+injury%2C+inflammation%2C+and+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Genetic determinants influencing the response to injury, inflammation, and sepsis.</a> Shock. 23, 11-17 (2005).</li>
<li>Diodato, M. D., Knoferl, M. W., Schwacha, M. G., Bland, K. I., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+the+inflammatory+response+and+survival+following+haemorrhage+and+subsequent+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">Gender differences in the inflammatory response and survival following haemorrhage and subsequent sepsis.</a> Cytokine. 14, 162-169 (2001).</li>
<li>Turnbull, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+age+on+mortality+and+antibiotic+efficacy+in+cecal+ligation+and+puncture%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Effects of age on mortality and antibiotic efficacy in cecal ligation and puncture.</a> Shock. 19, 310-313 (2003).</li>
<li>Miyaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethyl+pyruvate+decreases+sepsis-induced+acute+renal+failure+and+multiple+organ+damage+in+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Ethyl pyruvate decreases sepsis-induced acute renal failure and multiple organ damage in aged mice.</a> Kidney Int. 64, 1620-1631 (2003).</li>
<li>Torres, M. B., De Maio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+exaggerated+inflammatory+response+after+CLP+correlates+with+a+negative+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">An exaggerated inflammatory response after CLP correlates with a negative outcome.</a> J Surg Res. 125, 88-93 (2005).</li>
<li>Doi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AP214%2C+an+analogue+of+alpha-melanocyte-stimulating+hormone%2C+ameliorates+sepsis-induced+acute+kidney+injury+and+mortality%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">AP214, an analogue of alpha-melanocyte-stimulating hormone, ameliorates sepsis-induced acute kidney injury and mortality.</a> Kidney Int. 73, 1266-1274 (2008).</li>
<li>Wilson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+resuscitation+attenuates+early+cytokine+mRNA+expression+after+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trauma%22%5BJournal%5D)">Fluid resuscitation attenuates early cytokine mRNA expression after peritonitis.</a> J Trauma. 41, 622-627 (1996).</li>
<li>Zanotti-Cavazzoni, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+resuscitation+influences+cardiovascular+performance+and+mortality+in+a+murine+model+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Fluid resuscitation influences cardiovascular performance and mortality in a murine model of sepsis.</a> Intensive Care Med. 35, 748-754 (2009).</li>
<li>Hugunin, K. M., Fry, C., Shuster, K., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+tramadol+and+buprenorphine+on+select+immunologic+factors+in+a+cecal+ligation+and+puncture+model%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Effects of tramadol and buprenorphine on select immunologic factors in a cecal ligation and puncture model.</a> Shock. 34, 250-260 (2010).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.<br /&gt; Animal experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de National Institute of Health Guide voor Zorg en gebruik van proefdieren, en goedgekeurd door het dier zorg en het gebruik commissie aan de Temple University.

Hier laten we in detail hoe de CLP-model in muizen uit te voeren en het moduleren van de graad van ernst. In vergelijking met andere dierlijke modellen van sepsis, kunnen CLP worden uitgevoerd in een muizenstam van verschillende leeftijd en geslacht. Het is een relatief gemakkelijk en goedkoop chirurgische procedure. In dit model, de graad van ernst heeft een directe impact op het percentage van de overleving. De lengte van de ligatie, de dikte van de naald en het aantal lekke banden zijn pa...

<table border="1"><tbody><tr><th> Naam van het serum </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th><th> Reacties </th></tr><tr><td> Ketamine </td><td> Ketaset </td><td> 0856-2013-01 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> AnaSed </td><td> NADA # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> Insulinespuit 29g </td><td> Exel </td><td> 26028 </td><td></td></tr><tr><td> Zijden hechtdraad, 6-0 PROLENE </td><td> Ethicon </td><td> 8680G </td><td></td></tr><tr><td> 19G en 25G Needle </td><td> BD </td><td> 305186 </td><td></td></tr><tr><td> Scheerapparaat </td><td> Algemene voorraad </td><td> Algemene voorraad </td><td></td></tr><tr><td> Infrarood warmtelamp </td><td> Algemene voorraad </td><td> Algemene voorraad </td><td></td></tr><tr><td> Michel wond clips 7mm </td><td> Roboz Chirurgische Instr </td><td> RS-9270 </td><td></td></tr><tr><td> Ear Loop Mask </td><td> Fisher Scientific </td><td> 19-130-4181 </td><td></td></tr><tr><td> Dissection schaar </td><td> Roboz Chirurgische Instr </td><td> RS-6702 </td><td></td></tr><tr><td> Betadine oplossing </td><td> VWR </td><td> 63410-992 </td><td></td></tr><tr><td> Chirurgische tang </td><td> Roboz Chirurgische Instr </td><td> RS-5135 </td><td></td></tr><tr><td> 70% isopropylalcohol pad </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-031-350 </td><td></td></tr><tr><td> Buprenorfine </td><td> Bedford Labs </td><td> 55390-100-10 </td><td></td></tr><tr><td> Tramadol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 42965 </td><td></td></tr></tbody></table>

cecal ligatie puncture procedure

Cecal Ligation Puncture Procedure

Human sepsis wordt gekenmerkt door een reeks van systemische reacties in reactie op een intensieve en massale infectie die niet ter plaatse te worden opgenomen door de gastheer. Op dit moment, sepsis behoort tot de top tien oorzaken van sterfte in de Verenigde Staten intensive care units 1. Tijdens sepsis zijn er twee gevestigde hemodynamische fasen die kunnen elkaar overlappen. De eerste fase (hyperdynamische) wordt gedefinieerd als een enorme productie van pro-inflammatoire cytokines en reactive oxygen species door macrofagen en neutrofielen dat vasculaire permeabiliteit (leidend tot hypotensie), hartfunctie beïnvloedt en leidt tot metabole veranderingen culminerend in weefsel necrose en orgaanfalen. Bijgevolg is de meest voorkomende oorzaak van sterfte is acute nierschade. De tweede fase (hypodynamic) is een anti-inflammatoire proces waarbij veranderde monocyten antigen presentatie, verminderde lymfocyten proliferatie en de functie en verhoogde apoptose. Deze staat bekend als immunosuppressie of immuun depressie verhoogt sterk het risico op infecties nocosomial en uiteindelijk de dood. De mechanismen van deze pathofysiologische processen zijn niet goed getypeerd. Omdat beide fasen van sepsis kan leiden tot onherstelbare en onherstelbare schade, is het essentieel om vast te stellen de immunologische en fysiologische status van de patiënt. Dit is de belangrijkste reden waarom veel therapeutische medicijnen zijn mislukt. Hetzelfde geneesmiddel gegeven in verschillende stadia van sepsis kan worden therapeutische of anderszins schadelijk of hebben geen effect 2,3. Sepsis te begrijpen op verschillende niveaus is het cruciaal om een geschikte en uitgebreide diermodel dat het klinische verloop van de ziekte reproduceert hebben. Het is belangrijk om de pathofysiologische mechanismen die tijdens sepsis karakteriseren en het model voorwaarden voor het testen van potentiële therapeutische middelen te controleren. Voor het bestuderen van het ontstaan ​​van de menselijke sepsis onderzoekers hebben ontwikkeld verschillende diermodellen. De meest gebruikte klinische model is cecal ligatie en prik (CLP). De CLP-model bestaat uit de perforatie van de blindedarm waardoor de release van fecaal materiaal in de buikholte om een ​​verergerd immuunrespons geïnduceerd door polymicrobiële infectie te genereren. Dit model voldoet aan de menselijke conditie, dat is klinisch relevant. Als bij mensen, muizen die CLP ondergaan met vloeistof reanimatie tonen de eerste (vroege) hyperdynamische fase die in de tijd ontwikkelt tot de tweede (late) hypodynamic fase. Daarnaast is de cytokine profiel is gelijk aan dat in de menselijke sepsis waar sprake is van verhoogde lymfocyten apoptose (beoordeeld in 4,5). Als gevolg van de meerdere en overlappende mechanismen die betrokken zijn bij sepsis, onderzoekers moeten een geschikte sepsis model van gecontroleerde ernst met het oog op consistente en reproduceerbare resultaten te verkrijgen.

De muis model van cecal ligatie en lek als een waardevol instrument voor de studie van de menselijke sepsis.

Cecal Ligatie Puncture Procedure

Sepsis bij de mens wordt gekenmerkt door een reeks systemische reacties als respons op een intensieve en massale infectie die niet lokaal kon worden ingedamd door de ...

Hallo, mijn naam is Miguel Toscano van het laboratorium van Dr. Dena van de afdeling Microbiologie en Hematologie aan Temple University. Vandaag gaan we u laten zien hoe u het iCal-ligatie- en punctiemodel opzet in de C 57 Black Seas-muizenstam. In ons laboratorium gebruiken we dit model om humane sepsis na te bootsen.In essentie bestaat dit model uit een punctie van het serum waardoor fecale materie in de peritoneumholte vrijkomt om een polymicrobiële sepsis te induceren, wat vervolgens leidt tot een versterkte immuunrespons. In dit model raken veel organen en verschillende celtypen onomkeerbaar beschadigd. Dit kan uiteindelijk leiden tot de dood van het dier.Laten we beginnen. Het anesthetiseren van de muis. De eerste stap is het anesthetiseren van het dier door middel van een intraperitoneale injectie.Een mengsel van ketamine en xylazine in een verhouding van één op één. Om te voorkomen dat de muis bijt en om te voorkomen dat het dier gewond raakt, moet de muis met één hand bij de staart worden vastgepakt. Met de andere hand wordt de muis tegen de vloer aan gedrukt.Vervolgens pakken we de muis bij de achterkant van de kop en draaien we het dier op zijn rug om de buik vrij te mak

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Beschrijven we een nieuwe chirurgische methode voor catheterizing 'darm loops' in het ileum van schapen. Zodra de dieren hebben zich hersteld van een operatie en hebben opgeruimd antibiotica en pijnstillers, kunnen meerdere behandelingen direct worden gestort in lussen via de katheters.

Catheterisatie van de intestinale Loops bij herkauwers

De C-seal is een biofragmentable drain geniet de bescherming van de colorectale anastomose. In deze video, zijn details van de productie, invoering en het gebruik getoond.

De C-seal: Een Biofragmentable Drain Bescherming van de Geniete colorectale anastomose van lekkage

De Colon ascendens Stent Peritonitis (CASP) is een zeer gestandaardiseerd model voor de polymicrobiale abdominale sepsis bij knaagdieren. Dit artikel beschrijft de chirurgische ingreep van CASP. Het CASP model en zijn varianten kan de systematisch onderzoek van verschillende problemen met betrekking tot het onderwerp van sepsis.

Colon ascendens Stent Peritonitis (CASP) - een gestandaardiseerd model voor polymicrobiële abdominale sepsis

Experimentele sepsis kan worden geïnduceerd in muizen met de blindedarm ligatie en punctie (CLP) methode. Voor deze protocollen autofagie in vivo beoordelen in het kader van CLP-geïnduceerde sepsis worden hier gepresenteerd: Een protocol voor het gebruik autofagie (GFP)-LC3 muizen, en een protocol voor autophagosome vorming van elektronenmicroscopie.

Cecal ligatie en punctie-geïnduceerde Sepsis als een model om Autophagy studie bij muizen

We presenteren een chirurgische procedure om de intestinale lymfe-lymfeklier bij neonatale varkens te kateteriseren om grote hoeveelheden componenten van het lipidenmetabolisme uit efferente lymfe te verzamelen.

Long-Term catheterisatie van de intestinale Lymfe Stam en verzamelen van lymfe in Neonatale Pigs

Dit protocol beschrijft een centraal gecatheteriseerd muismodel van langdurige kritieke ziekte. We combineren de cecale ligatie en punctie methode om sepsis te induceren met het gebruik van een centrale veneuze lijn voor vloeistoffen, geneesmiddelen en nutriëntenadministratie om de menselijke klinische setting na te bootsen.

Het gebruik van een centrale veneuze lijn voor vloeistoffen, drugs en Nutrient Administration in een muismodel van Kritieke Ziekte

De toegang van voedingsstoffen, microbiota metabolieten en medicijnen voor het verkeer wordt geregeld door de darm-bloed-barrière (GBB). Beschrijven we een directe methode voor het meten van de GBB permeabiliteit in vivo, die, in tegenstelling tot veelgebruikte indirecte methoden, wordt vrijwel niet beïnvloed door de functies van lever en nieren.

Een In Vivo -methode voor het uitrekenen van de Gut-bloed barrière en lever metabolisme van Microbiota producten

Dit protocol beschrijft technieken om besmettelijke resultaten te meten aan de onderliggende secundaire ziekenhuisinfecties in de immunosuppressieve voorwaarde, eerst door de oprichting van cecal afbinding/punctie muizen dan uitdagend hen met intranasal infectie Maak een klinisch relevant model van immunosuppressie sepsis.

Ontwerp van Cecal afbinding en punctie en Intranasal infectie Dual model van sepsis-geïnduceerde immunosuppressie

Dit protocol presenteert de operationele details van cecal ligatie en punctie (CLP) in een muismodel van sepsis. CLP is een van de meest gebruikte technieken om een diermodel van sepsis te maken. Daarom is een gestandaardiseerd CLP-protocol vereist voor het verkrijgen van betrouwbare onderzoeksresultaten.

Evaluatie van een betrouwbare biomarker in een cecale ligatie en punctie-geïnduceerd muismodel van sepsis

De huidige pilotstudie beschrijft de ontwikkeling van laparoscopische non-mesh cerclage pectopexie om bekkenorgaanprolaps te behandelen. De procedure kan worden gebruikt om eventuele complicaties in verband met het gebruik van mesh te voorkomen.

Laparoscopische non-mesh cerclage pectopexie voor bekkenorgaanprolaps

Leer de cecale ligatie- en punctiemethode voor sepsisonderzoek met C57BL/6 muizen. Dit model simuleert polymicrobiële sepsis en helpt bij het bestuderen van immuunresponsen en orgaanschade.

Cecal Ligatie Puncture Procedure

Meer video's verkennen