Modellering Neurale Immune Signalering van episodische en chronische migraine gebruik verspreiden Depressie In Vitro

Het doel van deze video is om te illustreren hoe hippocampale plaksnedeculturen kunnen worden gebruikt om de neurale immuunsignalering te ontcijferen die de gevoeligheid voor verspreidingsdepressie moduleert, de meest waarschijnlijke onderliggende oorzaak van migraine-aura en misschien ook migraine. Verspreidingsdepressie kan gemakkelijk worden opgewekt in hippocampale plaksnedeculturen. Omdat de culturen wekenlang in vitro worden gehouden, kan het gedrag van individuele celtypen over langere perioden worden gemeten, nagebootst en gemoduleerd.

Dit is vooral belangrijk voor de studie van neurale immuunsignalering. Omdat volwassen hippocampale herfsneden een rustige immuuntoestand bereiken, kunnen immuunreacties van verspreidingsdepressie worden beoordeeld zonder de mogelijk verwarrende effecten van anesthesie met behulp van moderne moleculaire biologische technieken. Gevoelige detectie van cytokinesignalering van zo weinig als 50 cellen tot ongeveer 90.000 cellen in een plak kan dienovereenkomstig worden bepaald.

Hippocampale herfsnedeculturen zijn ideaal geschikt voor gebruik bij de ontwikkeling van nieuwe neurale immuuntherapeutischa om migraine te verlichten. Mijn naam is Yian Berg en dit zijn Aya Puss en Heidi Mitchell van het laboratorium van Richard Craig en de afdeling Neurologie van het University of Chicago Medical Center. Vandaag laten we het gebruik van rattenhippocampus, lice, culturen en de studie van laag niveau immuunsignalering van verspreidingsdepressie zien.

Verspreidingsdepressie is een paroxismaal neuraal evenement dat wordt veroorzaakt door een uitbarsting van verhoogde synaptische activiteit, die vervolgens snel gevolgd wordt door een tijdelijke verlies van alle activiteit. Toenemend bewijs toont aan dat laag niveau immuunsignalering synaptische activiteit in de hersenen kan beïnvloeden en op zijn beurt kan worden beïnvloed door synaptische activiteit. We veronderstellen dat cytokines de gevoeligheid voor verspreidingsdepressie moduleren en als gevolg daarvan migraine-aura en misschien ook migrainehoofdpijn.

De procedures die we hier beschrijven zijn ontworpen om potentieel verwarrende immuuncelactivatie te minimaliseren en ons vermogen om laag niveau immuunsignalering te detecteren te verhogen. Dit stelt ons in staat om het breedste scala aan neuro-immuunsignalering en de interacties ervan met verspreidingsdepressie te detecteren. Om deze procedure te beginnen, maak grondelektroden door glasbuizen op 4,5 millimeter lengte te snijden.

Polijst vervolgens de gesneden secties kort aan beide uiteinden. Breng vervolgens 100 milliliter een molaire kaliumchlorideoplossing aan de kook en voeg er 3,5 gram agar en 0,5 gram EDTA aan toe. Roer de mix continu om een heldere gele oplossing te produceren.

Plaats een stuk kort flexibele buis over elke glasbuis. Trek vervolgens de warme kaliumchloride-agri-oplossing in de glasbuis en een korte afstand in de flexibele buis. Laat de zuiging los en laat het kaliumchloride-agar langzaam uit de open punt van de glasbuis druppelen.

Terwijl het agar druppelt, raak een stuk ijs met de punt van de open glasbuis, waardoor het agar aan de elektrodetip zal geleren en niet geleren nadat het weer in de glasbuis is teruggekomen. Zodra het agar is geleerd, verwijdert u voorzichtig de flexibele buis zonder de positie van de agra te veranderen. Doe in de glasbuizen 0,5 milliliter een molaire kaliumchloride in elke put van een centrifugeerbuisrek van 1,5 milliliter.

Plaats vervolgens de punt van elke kaliumchloride-afgl-glasbuis in afzonderlijke putten om de punten vochtig te houden. Houd vervolgens een zilverdraad van 15 gauge van 80 centimeter lengte vast met een hemostaat. Reinig elk van de vier zijden door de draad door een slijpsteen te schrapen die op het aanrecht wordt gehouden.

Snij vervolgens de draad in stukken van vier centimeter. Plaats ze 20 tot 30 minuten in een scintillatieglas gevuld met bleekmiddel. Om een stevige zilver-tot-zilverchloridelaag over het gereinigde zilveroppervlak te plaatsen, buig de draad doormidden en steek deze in de glasbuis gevuld met kaliumchloride-agar waarbij ongeveer vier tot zes millimeter blootgesteld blijft.

Bedek vervolgens de glasbuispunt met de zilverdraad en een klein deel van de draad met goop, een waterbestendige en flexibele lijm om te voorkomen dat het kaliumchloride-agar uitdroogt, herhaal dit voor alle elektroden en laat de lijm een nacht drogen. Na het trekken, bewaar de elektroden in scintillatieglazen met vijf milliliter een molaire kaliumchlorideoplossing en 25 milligram EDTA. Ongeveer vijf tot zes elektroden per flesje bij vier graden Celsius.

Maak opname-elektroden met bo silicaatglasbuizen met filamenten. Maak vervolgens een stimulerende elektrode door ongeveer 20 centimeter lengte te snijden van teflon gecoat platinemeridium. Buig vervolgens de lengte doormidden, knoop de losse uiteinden in een losse vierkante knoop, waarbij ongeveer twee centimeter van de knoop tot aan de uiteinden van de draad overblijft.

Bevestig de knoop in de koppeling van een elektrische blikjesopener die op een tafel staat geplaatst terwijl u het andere uiteinde van de draad met een hemostaat vasthoudt. Zet de blikjesopener kort aan en uit totdat de draad stevig gedraaid is. Om de platinemeridium-gedraaide draden aan leidende draden te bevestigen, plak je eerst de platinemeridium-gedraaide draad op een werkblad en laat je een plasje geconcentreerd zoutzuur vallen over een vrij einde van de gedraaide draad.

Plaats vervolgens het ontmantelde uiteinde op een leidende draad naast het uiteinde van de gedraaide draad en breng warmte aan vanuit een fijnpuntige soldeerbout en soldeer totdat de twee draden stevig zijn bevestigd. Schuif een korte lengte hitteschrompelbuis over de blootgestelde draadverbinding en krimp deze met warmtebrand. Polijst de punt van een 15 centimeter lange pastpijp en leid de gedraaide platina-meridianadraad door de pijp.

Gebruik een waterafstotende epoxy om beide uiteinden van de elektrode te verzegelen. Bevestig tenslotte bananenpluggen aan de uiteinden van de leidende draad voor de verbinding met de stimulus-isolator onder stereoscopische observatie. Pla