Name: De driedimensionale menselijke huid Reconstrueer model: een instrument om de normale huid en melanoomprogressie Study (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: Leer een 3D-huidreconstructiemodel genereren voor melanocyt- en melanoombiologie met fibroblasten, keratinocyten en collageen. Deze methode ondersteunt preklinisch geneesmiddelonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken de Wistar Institute Animal Facility, Microscopie Facility, Histotechnology Facility en Research Supply Center. Dit onderzoek werd deels gefinancierd door subsidies van de National Institutes of Health CA 076674, CA 098101, 025874 en CA CA 10815.

1. De driedimensionale menselijke huid reconstrueren Model: <ol><li> Voorbereiding van de acellulaire laag: Meng de volgende reagentia in een 50 ml buis op ijs: 0,59 ml 10x EMEM, 50 ul 200mm L-glutamine, 0,6 ml FBS, 120 pl 7,5% Natriumbicarbonaat en 4,6 ml bovine collageen I. Voeg 1 mL het mengsel in elke insert van weefselkweek trays. Incubeer gedurende 30 minuten op kamertemperatuur en laat de gel te stollen. Kleur van het mengsel moet worden van stro-geel tot roze. </li><li> Trypsinize menselijke fibroblasten van cultuur flessen met 0,25% trypsine / EDTA, voeg DMEM met 10% FBS te neutraliseren. Verzamel cellen door centrifugeren en resuspendeer 0,45 x 10 6 cellen in 1,5 ml DMEM met 10% FBS. Voor de dermale stamcellen, het verzamelen van 6600 dermale bollen (wanneer dermale stamcellen groeien in stamcellen medium, vormen ze bolletjes op een vergelijkbare manier met neurospheres) door te tikken op fles naar de sferen, centrifugeren los te maken. </li><li> Voorbereiding van de cellaag: Meng de volgende in een 50 ml buis op ijs: 1,65 ml 10x EMEM, 150 pi 200 mM L-glutamine, 1,85 ml FBS, 350 ul 7,5% Natriumbicarbonaat, 14 ml bovine collageen I en 1,5 mL fibroblasten schorsing uit stap 2 (alternatief, een combinatie van 0,45 x 10 6 fibroblasten en 6600 dermale sferen te gebruiken in 1,5 ml van de huid te reconstrueren medium I voor de huid stamcellen reconstrueert), goed mengen. Voeg 3 ml van het mengsel aan elke acellulaire laag-coating te voegen. Incubeer 45 min bij 37 ° C in een 5% CO 2 weefselkweek incubator. Kleur van het mengsel moet worden van stro geel naar roze. Na de gel stolt, voeg DMEM met 10% FBS (2 ml binnen en 10 ml buiten het invoegen in elke well van de huid te reconstrueren trays). Incubeer voor 4 dagen en zorg ervoor dat de gel contracten. </li><li> Aspireren medium van zowel binnen als buiten elke insert. Voeg wassen medium (HBSS met 1% gedialyseerd FBS) 2 ml aan de binnenkant en 10 ml aan de buitenkant van de plaatsen om te wassen regelmatig serum. Incubeer gedurende 1 uur bij 37 ° C. </li><li> De voorbereiding van de huid te reconstrueren medium: <ol><li> Voor normale melanocyt en dermale stamcel reconstrueert: Om basisch milieu (500 ml), meng de volgende reagentia: 490 ml keratinocyte serum-vrij medium, 1,8 ml runder hypofyse-extract, 10 ml gedialyseerd foetaal runderserum, 500 pl van 10 ug / mL SCF, 562,5 ul van 4 ug / ml bFGF en 500 ul van 264 ug / ml ET-3. Medium I: Voeg 10 pl EGF van 100 ug / ml tot 100 ml elementaire medium. Medium II: Voeg 2 pl EGF tot 100 ml elementaire medium. Medium III: Voeg 720 ul CaCl 2 van 1 M tot 300 ml elementaire medium. </li><li> Voor melanoom huid te reconstrueren: Om Medium I (100ml), de volgende reagentia mix: 72,5 ml DMEM, 24 ml F12 (HAM's), 2 ml L-glutamine van 200 mm, 200 ul hydrocortison van 269 g / mL, 200 ul VV-regeling van de 500X, 200 ul O-phosphorylethanolamine van 0,05 M, 200 ul adenine van 90 mm, 200 ul Progesteron van 2 nm, 240 pl CaCl 2 van 1 m, 200 pl Triiodothyronine van 10 Nm en 100 ul van chelexed pasgeboren kalf serum (ontbinden 3 g Chelex 100 in 100 ml serum, roer 1,5 uur bij 4 ° C, filter steriliseren). Om ervoor te Medium II (100ml), meng de volgende reagentia: 72,5 ml DMEM, 24 ml F12 (HAM's), 2 ml L-glutamine van 200 mm, 200 ul hydrocortison van 269 g / mL, 200 ul VV van 500X, 200 ul O-phosphorylethanolamine van 0,05 M, 200 ul adenine van 90 mm, 200 ul Progesteron van 2 nm, 240 ul van 1 M CaCl2, 200 ul Triiodothyronine van 10 nm en 100 ul pasgeboren kalf serum. Om ervoor te Medium III (300ml), meng de volgende reagentia: 142,5 ml DMEM, 142,5 ml F12 (HAM's), 6 ml L-glutamine van 200 mm, 600 ul hydrocortison van 269 g / mL, 600 ul VV van 500X , 600 ul O-phosphorylethanolamine van 0,05 M, 600 ul adenine van 90 mm, 600 ul Progesteron van 2 nm, 720 pl CaCl 2 van 1 M, 600 ul Triiodothyronine van 10 Nm en 6 mL pasgeboren kalf serum. </li></ol></li><li> Trypsinize humane keratinocyten van cultuur flessen met 0,05% trypsine / EDTA, trypsine met soja-bonen trypsine-remmer (250 mg / L in 1x fosfaat-gebufferde zoutoplossing) te neutraliseren, spin down, resuspendeer een cel pellet op 4,17 x 10 6 cellen / ml in de huid te reconstrueren medium I. </li><li> Trypsinize menselijke melanocyten of melanoom cellen van cultuur flessen met 0,05% trypsine / EDTA, neutraliseren trypsine met soja-bonen trypsine-remmer, spin down, een celpellet op 0,83 resuspendeer x 10 6 cellen / ml in de huid te reconstrueren medium I. </li><li> Verwijder het wassen medium van zowel binnen als buiten elke insert. </li><li> Voeg de huid reconstrueren medium I (1,5 ml aan de binnenkant en 10 ml aan de buitenkant van elke insert). </li><li> Neem 600 pi celsuspensie van keratinocyten en 600 pi celsuspensie van melanocyten of melanoomcellen, meng goed. Verdeel 200 ul gemengde cel suspensie druppelsgewijs aan de binnenkant van elke insert. Voor de dermale stamcellen te reconstrueren, gebruik 100 ul van keratinocyten opschorting slechts. Incubeer gedurende 2 dagen bij 37 ° C. </li><li> Aspireren huid te reconstrueren medium Ivan zowel de binnenkant en de buitenkant van elke insert. Voeg de huid reconstrueren medium II (2 ml aan de binnenkant en 10 ml naar buiten). Incubeer nog 2 dagen bij 37 ° C. </li><li> Aspireren huid te reconstrueren medium II van de binnenkant en de buitenkant van elke insert, voeg 7,5 ml huid medium III reconstrueren om alleen de buitenkant. Vanaf dit punt, het oppervlak van reconstrueert begint wordt blootgesteld aan de lucht. Verandering medium III om de andere dag tot dag 18. </li><li> Oogst huid te reconstrueren op dag 18: <ol><li> Aspireren media van de binnenkant en de buitenkant van inserts. </li><li> Verwijder de inzetstukken uit lade met een pincet. </li><li> Knip de te reconstrueren (inclusief het polycarbonaat filter) door het traceren van een cirkel dicht bij de rand met een scalpel. </li><li> Snijd de wederopbouw en het filter in de helft op een hard oppervlak. </li></ol></li><li> Voor paraffine secties: plaats de helft van de te reconstrueren in een histologie cassette tussen twee zwarte TBS biopsie papieren en genieten van de hele cassette in 10% formaline voor meer dan 4 uur. Plaats vervolgens de cassette in 70% ethanol en op te slaan bij 4 ° C totdat u klaar bent om het te reconstrueren voor paraffine inbedding proces. </li><li> Voor vriescoupes: <ol><li> Leg de andere helft van de te reconstrueren in 50% saccharose bij 4 ° C gedurende 1-2 uur, verander dan de sucrose te 2M en bij 4 ° C op te slaan voor een ander 1-2 uur. </li><li> Verdeel een optimale snijden temperatuur het vriespunt media (LGO) in een wegwerp basis mal, zodat het vult ongeveer 50% van de boot. Vermijd luchtbellen in de LGO. </li><li> Pak de rand van het te reconstrueren met een tang en verwijder de te reconstrueren uit de sucrose. Plaats het op Kimwipes tot de Kimwipes absorberen de sucrose. </li><li> Breng de te reconstrueren in de basis vorm op de top van de LGO, met behulp van pincet en een spatel. Bedek de bovenkant van het te reconstrueren met meer LGO tot de basis vorm is helemaal vol. Zorg ervoor dat je geen luchtbellen hebben in de LGO waardoor het snijden moeilijk. </li><li> Gelijkmatig Plaats het basisstation schimmel op gemalen droog ijs, en laat de LGO volledig bevriezen. </li><li> Wikkel de basis vorm in aluminiumfolie en bij -70 ° C op te slaan totdat u klaar bent om het te snijden met een cryostaat. </li></ol></li><li> Graft een skin te reconstrueren op een muis: <ol><li> Bereid een 50 ml Falcon buis met 5 ml DMEM (voor invriezen en ontdooien de huid van muizen). </li><li> Gebruik een vrouwelijke SCID haarloze outbred muis rond de 6 weken. </li><li> De muis is verdoofd met isofluraan (EZ anesthesie systeem): de eerste verdoving wordt uitgevoerd in de inductie kamer met 4% isofluraan (voor de muis wordt verplaatst naar de chirurgische bed) en onderhouden van anesthesie door middel van een neuskegel adempauze tijdens de procedure (isofluraan: 1,5-2% ). Warmte ondersteuning door een verwarmde pad om onderkoeling en steriele toegediende oogheelkundige smeermiddel te voorkomen oculaire letsel te voorkomen tijdens de anesthesie. </li><li> Doe 600 ml water in een beker en laat op de top van een hete plaat om temperatuur van het water te houden tussen 40 - 60 ° C. </li><li> Reinig de huid van muizen met samengestelde benzoë tinctuur en alcohol prep swabs. </li><li> Markeer een lijn op de top van de muis terug naar dezelfde positie te houden voor het hechten later. </li><li> Snijd een ronde wondbed ongeveer 1,2 cm in diameter op de muis bovenrug met behulp van Iris schaar en pincet. Bedek de wond met een steriel gaasje sponzen. Leg de ronde muis huid in 5 ml DMEM, dan laat in vloeibare stikstof container totdat het helemaal bevroren. Ontdooi de buis in heet water op de top van een hete plaat totdat er ontdooid. Herhaal dit 3 keer. </li><li> Maak de huid te reconstrueren uit de transwell met behulp van chirurgische mes en verwijder het membraan zeer zorgvuldig, overdracht van de huid (epidermis naar boven) te reconstrueren op de top van het wondbed. </li><li> Plaats de muis huid (epidermis naar boven) op de top van de huid te reconstrueren. </li><li> Maak de eerste hechting op de marker eerder gemerkt, de tweede op de bodem, daarna nog twee hechtingen aan de zijkanten van de muis huid op te lossen. </li><li> Reinig de huid van muizen na de transplantatie. Verwijder de neuskegel en houd de muis op het verwarmde pad totdat wakker en ambulante. </li><li> Zet de muis in een nieuwe kooi. </li><li> Post-operatieve analgesie: Meloxicam (1 mg / kg) via subcutane injectie onmiddellijk na de operatie, 24 uur en 48 uur na de operatie. </li></ol></li></ol> 2. Representatieve resultaten: Huid reconstrueert met normale melanocyten en dermale stamcellen De huid reconstrueert worden gekweekt in een speciaal 6-well tray met inserts. De dermale compartiment is gekweekt in DMEM met 10% FBS voor de eerste vier dagen (Fig. 1A). De huid reconstrueren medium I wordt gebruikt wanneer keratinocyten zijn bezaaid met melanocyten of melanoom cellen (Fig. 1B). De epidermis is blootgesteld aan de lucht op dag 9 en dit maakt keratinocyten om onderscheid te maken (Fig. 1C). Op dag 18, de epidermis van de huid reconstrueert is samengesteld uit gelaagd keratinocyten lagen. De ongedifferentieerde basale laag en opeenvolgend gedifferentieerde lagen zijn verticaal georiënteerd (fig. 1D). VlekING het gedeelte van reconstrueert met de melanocytaire marker S100 laat zien dat melanocyten worden uitgelijnd in de basale laag van de opperhuid en te communiceren met meerdere keratinocyten door dendriet extensies (fig. 1E). De dermale compartiment bevat fibroblasten ingebed in een collageen type I matrix. Gedeponeerd collageen IV geeft de basale membraan, die de opperhuid scheidt van de dermis (fig. 1F). Wanneer dermale stamcellen (gelabeld met GFP lentivirale vector) zijn ingebed met fibroblasten in een collageen I matrix, trekken ze naar de epidermis en te differentiëren in melanocyten (1), (afb. 2). Meerdere lagen van keratinocyten in de epidermis worden ontwikkeld. Huid reconstrueert van melanoom tumoren Clinicopathologische studies wijzen uit dat melanomen vooruitgang in een stapsgewijs: gemeenschappelijke verworven naevi, dysplastische nevi, RGP (radiale groeifase) melanomen, VGP (verticale groeifase), melanomen en metastatische melanomen (7). Verschillende stadia van melanoom cellijnen zijn morfologisch op elkaar lijken in 2-D cultuur (Fig. 3A-D), maar wanneer zij worden opgenomen in de huid reconstrueert, het gedrag van de cellen weerspiegelt hun in vivo eigenschappen. De locatie en de groei van normale melanocyten worden streng gecontroleerd in de huid reconstrueert (Afb. 3E). RGP primaire melanomen WM35 prolifereren voornamelijk in de epidermis (fig. 3F), terwijl VGP melanomen WM793 groeien invasief in de dermis (Fig. 3G). Uitgezaaide melanomen 1205Lu agressief diep binnen te dringen in de dermis (Fig. 3H). <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/2937/2937fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Huid reconstrueert met normale melanocyten. De bruto uiterlijk van de huid reconstrueert is te zien in AC. A. Fibroblasten gemengd met collageen worden gekweekt in DMEM met 10% FBS en vorm dermale compartiment. B. keratinocyten en melanocyten worden gezaaid op de top van de dermis en groeien in de huid te reconstrueren medium. C. De epidermis wordt blootgesteld aan de lucht op dag 9. D. H &amp; E-gekleurde huid te reconstrueren presenteert de opperhuid bestaat uit verticaal, gericht op basale laag, en achtereenvolgens gedifferentieerde gestratificeerde cellagen. De dermis bevat fibroblasten ingebed in een collageen type I matrix. E. S100-positieve melanocyten (zwarte pijlen) zijn uitgelijnd op de basaalmembraan en te communiceren met meerdere keratinocyten. F. collageen IV-kleuring geeft aan dat de basale membraan, die de opperhuid scheidt van de dermis. Alle kleuringen in DF werden uitgevoerd op in formaline gefixeerde, in paraffine ingebedde coupes. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/2937/2937fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Dermal stamcellen in de huid reconstrueert migreren naar de epidermis en differentiëren in melanocyten. Op dag 5 na het uitzaaien keratinocyten, single GFP-positieve cellen (groen) start migreren uit van sferen. De epidermis is nog steeds bestaat uit een enkele laag. Op dag 8, een enkele cellen bij de epidermis-dermis interface. Per dag 10, zijn GFP-positieve cellen strak uitgelijnd op de basale membraan positie. De gemigreerde GFP-positieve cellen in de opperhuid uitdrukkelijke melanocytaire marker HMB45 (rood, zoals aangegeven door witte pijlen). Kernen zijn gekleurd met DAPI (blauw). De epidermis is ontwikkeld als meerdere lagen. De kelder membraan wordt aangegeven met witte stippellijnen. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/2937/2937fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3. Huid reconstrueert van de verschillende stadia van melanomen: AD. Normale melanocyten en melanoom cellen gekweekt in 2D culturen. A. Melanocyten van de voorhuid. B. RGP WM35 cellen. C. VGP WM793 cellen. D. uitgezaaide melanomen 1205Lu cellen. E. Normale melanocyten bevinden zich op de basale membraan. F. RGP melanoom WM35 cellen groeien als cel clusters in de opperhuid. G. VGP melanoom WM793 cellen binnen te dringen in de dermis door basaal membraan. H. uitgezaaide melanoom 1205Lu cellen binnen te dringen agressief diep in dermis. Het oplossen van problemen <table border="1"><tbody><tr><td> Probleem </td><td> Het oplossen van problemen </td></tr><tr><td> Collageen mengsel niet stollen </td><td> Collageen mengsel kleur moet worden stro-geel naar roze, anders pH-waarde is verkeerd en collageen kan niet gel. Als de kleur is helder geel, moet meer natriumbicarbonaat worden toegevoegd druppelsgewijs. </td></tr><tr><td> Collageen precipitaten voortijdig in de mixuture </td><td> Houd alle componenten op ijs totdat het collageen mengsel wordt geplaatst op de plaats </td></tr><tr><td> Gecontracteerd collageen is niet eens (de ene kant is dikker dan de andere kant) </td><td> Kalibreer de plank van de incubator </td></tr><tr><td> De opperhuid wordt gevormd met minder dan drie lagen keratinocyten. </td><td> Gebruik ongedifferentieerde keratinocyten bij lagere passages </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Sun, T., Jackson, S., Haycock, J. W., MacNeil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+skin+cells+in+3D+rather+than+2D+improves+their+ability+to+survive+exposure+to+cytotoxic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Culture of skin cells in 3D rather than 2D improves their ability to survive exposure to cytotoxic agents.</a> J Biotechnol. 122, 372-381 (2006).</li>
<li>Smalley, K. S., Lioni, M., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+isn%27t+flat%3A+taking+cancer+biology+to+the+next+dimension%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Anim%22%5BJournal%5D)">Life isn't flat: taking cancer biology to the next dimension.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 42, 242-247 (2006).</li>
<li>Sun, T., Norton, D., McKean, R. J., Haycock, J. W., Ryan, A. J., MacNeil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+3D+cell+culture+system+for+investigating+cell+interactions+with+electrospun+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Development of a 3D cell culture system for investigating cell interactions with electrospun fibers.</a> Biotechnol Bioeng. 97, 1318-1328 (2007).</li>
<li>Kremer, M., Lang, E., Berger, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypical+engineering+of+differentiated+composite-skin+equivalents+of+human+keratinocytes+in+a+collagen-GAG+matrix+%28INTEGRA+Artificial+Skin%29+in+a+perfusion+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Organotypical engineering of differentiated composite-skin equivalents of human keratinocytes in a collagen-GAG matrix (INTEGRA Artificial Skin) in a perfusion culture system.</a> Langenbecks Arch Surg. 386, 357-363 (2001).</li>
<li>Escámez, M. J., Garcí, M., Larcher, F., Meana, A., Muñoz, E., Jorcano, J. L., Del Río, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+model+of+wound+healing+in+genetically+modified+skin-humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">An in vivo model of wound healing in genetically modified skin-humanized mice.</a> J Invest Dermatol. 123, 1182-1191 (2004).</li>
<li>Li, L., Fukunaga-Kalabis, M., Yu, H., Xu, X., Kong, J., Lee, J. T., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dermal+stem+cells+differentiate+into+functional+epidermal+melanocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Human dermal stem cells differentiate into functional epidermal melanocytes.</a> J Cell Sci. 123, 853-860 (2010).</li>
<li>Meier, F., Nesbit, M., Hsu, M. Y., Martin, B., Van Belle, P., Elder, D. E., Schaumburg-Lever, G., Garbe, C., Walz, T. M., Donatien, P., Crombleholme, T. M., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+melanoma+progression+in+skin+reconstructs%3A+biological+significance+of+bFGF%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Human melanoma progression in skin reconstructs: biological significance of bFGF.</a> Am J Pathol. 156, 193-200 (2000).</li>
<li>Yu, H., McDaid, R., Lee, J., Li, L., Kumar, S. M., Elder, D. E., Van Belle, P., Gimotty, P., Guerra, M., Hammond, R., Nathanson, K. L., Dalla Palma, M., Herlyn, M., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+BRAF+mutation+and+p53+inactivation+during+transformation+of+a+subpopulation+of+primary+human+melanocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">The role of BRAF mutation and p53 inactivation during transformation of a subpopulation of primary human melanocytes.</a> Am J Pathol. 174, 2367-2377 (2009).</li>
<li>Lee, J. T., Li, L., Brafford, P. A., van den Eijnden, M., Halloran, M. B., Sproesser, K., Haass, N. K., Smalley, K. S., Tsai, J., Bollag, G., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PLX4032%2C+a+potent+inhibitor+of+the+B-Raf+V600E+oncogene%2C+selectively+inhibits+V600E-positive+melanomas%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">PLX4032, a potent inhibitor of the B-Raf V600E oncogene, selectively inhibits V600E-positive melanomas.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 23, 820-827 (2010).</li>
<li>Tsai, J., Lee, J. T., Wang, W., Zhang, J., Cho, H., Mamo, S., Bremer, R., Gillette, S., Kong, J., Haass, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery+of+a+selective+inhibitor+of+oncogenic+B-Raf+kinase+with+potent+antimelanoma+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Discovery of a selective inhibitor of oncogenic B-Raf kinase with potent antimelanoma activity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, 3041-3046 (2008).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

We hebben beschreven het genereren van 3D-skin reconstrueert met normale menselijke melanocyten, dermale stamcellen en melanoom cellen. Wanneer ze groeien in monolaag cultuur, melanocytaire cellen die aanwezig zijn een vergelijkbare morfologie (afgeplat, spindel of meer dendritische-vormig), ongeacht hun herkomst van de klinische fase. In contrast, 3D-skin reconstrueert recapituleren stadium-specifieke eigenschappen van melanoom cellen. Normale menselijke melanocyten verblijf te houden in de kelder membranen tussen de epidermale en de dermale lagen als afzonderlijke cellen. RGP primaire melanoom cellen groeien als kleine clusters langs de basaalmembraan terwijl meer agressieve VGP melanoom cellen groeien zo groot clusters doorbreken van het basaal membraan in de dermis. Uitgezaaide melanoom cellen groeien in alle richtingen en binnen te dringen diep in de dermis als enkele cellen of clusters. Kwantitatieve analyses kunnen worden uitgevoerd op dit model door het meten van de diepte van invasie en de mate van proliferatie. Naast de karakterisering van normale en maligne melanocytaire cellen, met behulp van het model dat we kunnen direct leiden tot de differentiatie van stamcellen in de huid gerijpt melanocyten, die de thuisbasis van de basale laag van de opperhuid en de bonafide communicatie met keratinocyten tot stand door de opregulatie van E-cadherine ( 6). Met behulp van virale vectoren, zijn we in staat om ofwel te activeren of functie van een gen te inactiveren voor een beter begrip van de dynamiek en de functionele betekenis van genen die tot expressie door elk celtype in de huid reconstrueert, die belooft te worden een efficiënt model om niet alleen de transformatie mechanismen van melanocyten studie , maar ook de progressie van melanoom (8). Waarneming op lange termijn van de cel fenotypes is mogelijk geworden door de enten van de huid reconstrueert aan immunodeficiënte dieren. Zo&#39;n menselijke huid-mouse chimera is een excellent onderzoek hulpmiddel om melanomagenesis en melanoom metastase te bestuderen. Skin reconstrueert kan ook een nuttig platform voor drugs beoordeling. Veel geneesmiddelen die kankercellen uit te roeien in 2D kweekomstandigheden hebben vaak weinig effect in de experimentele en klinische toepassingen. Zoals te zien in de in vivo tumor, melanoom cellen in 3D culturen zijn vaak resistent tegen de geneesmiddelen die cellen in 2D culturen reageren, wat suggereert dat de micro-omgeving signaalwegen moduleert in melanoom. Voor een succesvolle drug discovery, de 3D-huid te reconstrueren model is een ideaal instrument om de preklinische effecten van stoffen in vivo (9,10) te voorspellen. Samengevat, de huid te reconstrueren modellen overbruggen van de kloof tussen de in vitro en in vivo studies. Ze zullen leiden tot een beter begrip van welke genen betrokken zijn bij de transformatie en de manier waarop stamcellen bijdragen aan die transformatie.

<table border="1"><tbody><tr><th> Naam van het serum </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th></tr><tr><td> 10x EMEM </td><td> Bio Whittaker </td><td> 12-684F </td></tr><tr><td> L-glutamine </td><td> Gibco </td><td> 25030-081 </td></tr><tr><td> Foetaal runderserum </td><td> Hyclone </td><td> SH-30.071,02 </td></tr><tr><td> Bovine Pees zuurgeëxtraheerde Collageen </td><td> Organogenese </td><td> 200/50 </td></tr><tr><td> Tissue Culture 6-well laden met Inserts </td><td> Organogenese </td><td> 9285 </td></tr><tr><td> Keratinocyten serumvrij medium </td><td> Gibco </td><td> 17005042 </td></tr><tr><td> Gedialyseerd Fetal Calf Serum </td><td> Hyclone </td><td> SH-30.079,03 </td></tr><tr><td> recombinant humane stamcellen Factor </td><td> Fitzgerald Industries </td><td> RDI-307-255X </td></tr><tr><td> Basic FGF </td><td> Fitzgerald Industries </td><td> 30R-AF015 </td></tr><tr><td> Endotheline-3, de menselijke </td><td> Amerikaanse Peptide Co </td><td> 88-5-10 </td></tr><tr><td> Calcium Chloride </td><td> Sigma </td><td> C-7902 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> JRH Biosciences </td><td> 56430-10L </td></tr><tr><td> F12 (HAM&#39;s) </td><td> Gibco </td><td> 11765-54 </td></tr><tr><td> Hydrocortison </td><td> Sigma </td><td> H-0888 </td></tr><tr><td> Insuline, transferrine, Ethanolamine, Selenium (VV) </td><td> BioWhittaker </td><td> 17839Z </td></tr><tr><td> O-Phosphorylethanolamine </td><td> Sigma </td><td> P0503 </td></tr><tr><td> Adenine </td><td> Sigma </td><td> A9795 </td></tr><tr><td> Progesteron </td><td> Sigma </td><td> P-8783 </td></tr><tr><td> Triiodothyronine </td><td> Sigma </td><td> T-5516 </td></tr><tr><td> Pasgeboren kalf serum </td><td> Hyclone </td><td> SH3011802 </td></tr><tr><td> 10% buffer formaline </td><td> Surgipath </td><td> 00600 </td></tr><tr><td> Optimale snijden temperatuur het vriespunt media (LGO) </td><td> Sakura </td><td> 4583 </td></tr><tr><td> Multi cassettes </td><td> Surgipath </td><td> 02293-BX </td></tr><tr><td> TBS biopsie papers </td><td> Triangle Biomedische Wetenschappen </td><td> BP-B </td></tr><tr><td> TBS biopsie papers </td><td> Triangle Biomedische Wetenschappen </td><td> BP-B </td></tr><tr><td> Wegwerp Base Matrijzen </td><td> Visser </td><td> 15 tot 182-501C </td></tr><tr><td> Compound benzoin tinctuur </td><td> Professionele Disposables, Inc, </td><td> S42450 </td></tr><tr><td> Alcohol Prep Swabs </td><td> CVS apotheek </td><td></td></tr><tr><td> Silk Black Gevlochten 5-0 </td><td> Ethicon </td><td> 682G </td></tr><tr><td> Gaas sponzen (steriele) </td><td> CVS apotheek </td><td></td></tr><tr><td> Pincet </td><td> Roboz </td><td> RS5070 </td></tr><tr><td> Iris schaar </td><td> Roboz </td><td> RS5913 </td></tr><tr><td> Chirurgische messen </td><td> Veer </td><td> 2976 </td></tr><tr><td> EZ anesthesie </td><td> Euthanex Corp </td><td></td></tr><tr><td> SCID haarloze outbred muis </td><td> Charles River </td><td></td></tr></tbody></table>

de driedimensionale menselijke huid reconstrueer model: een instrument om de normale huid en melanoomprogressie study

The Three-Dimensional Human Skin Reconstruct Model: a Tool to Study Normal  Skin and Melanoma Progression

De meeste in-vitro studies in experimentele huid biologie hebben gedaan in twee-dimensionale (2D) monoculturen, terwijl het vergaren van bewijs suggereert dat cellen zich anders gedragen wanneer ze worden gekweekt in een 3D-extra-cellulaire matrix en ook interactie met andere cellen (1-5) . Muismodellen zijn in grote lijnen gebruikt om weefsel morfogenese in vivo studie. Maar muis en de menselijke huid hebben significante verschillen in cellulaire architectuur en fysiologie, waardoor het moeilijk is om de muis studies te extrapoleren naar mensen. Aangezien de melanocyten in de huid van muizen zijn meestal gelokaliseerd in haarzakjes, ze hebben verschillende biologische eigenschappen van die van de mens, die vooral op te zoeken op de basale laag van de opperhuid. De recente ontwikkeling van 3D-menselijke huid te reconstrueren modellen heeft het gebied tot cel-matrix en cel-cel interacties tussen verschillende celtypen te onderzoeken ingeschakeld. Het reconstrueert bestaan ​​uit een &quot;dermis&quot; met fibroblasten ingebed in een matrix van collageen I, een &quot;epidermis&quot;, die bestaat uit gelaagd, gedifferentieerde keratinocyten en een functionele basale membraan, die opperhuid scheidt van dermis. Collageen zorgt steigers, voedingsstoffen, en de mogelijkheden voor cel-cel interactie. De 3D-skin modellen die melanocytaire cellen recapituleren natuurlijke kenmerken van melanocyten homeostase en melanoomprogressie in de menselijke huid. Net als in vivo, worden melanocyten in gereconstrueerde huid gelokaliseerd in de basale membraan afgewisseld met basale laag keratinocyten. Melanoom cellen vertonen dezelfde kenmerken als gevolg van de oorspronkelijke tumor stadium (RGP, VGP en gemetastaseerd melanoom cellen) in vivo. Onlangs hebben dermale stamcellen zijn geïdentificeerd in het humane dermis (6). Deze multi-potente stamcellen kunnen migreren naar de opperhuid en differentiëren naar melanocyten.

In dit rapport beschrijven we de drie-dimensionale huid te reconstrueren model dat de menselijke huid nabootst in de architectuur en compositie. Melanocyt fysiologie, melanoomprogressie en het lot van dermale stamcellen zijn onderzocht met behulp van de huid te reconstrueren model. Het model is ook bruikbaar als een preklinische hulpmiddel voor drugs beoordeling.

De driedimensionale menselijke huid Reconstrueer model: een instrument om de normale huid en melanoomprogressie Study

De meeste in vitro studies in de experimentele huidbiologie zijn uitgevoerd in tweedimensionale (2D) monocultures, terwijl toenemend bewijs suggereert dat cellen ...

Het algemene doel van deze procedure is het genereren van een 3D-reconstructie van menselijke huid voor studies naar de biologie van melanocyten, melanomen en huidstamcellen. Dit wordt bereikt door eerst een insert van weefselkweekplaten te coaten met geneutraliseerd rundercollageen. De tweede stap is het maken van het cellulaire dermale compartiment uit fibroblasten en collageen.Maak vervolgens het epidermale compartiment van keratinocyten gemengd met melanocyten of melanoomcellen. De laatste stap van de procedure is het oogsten van een huidreconstruct op dag 18 en het transplanteren van een huidreconstruct op een muis. Uiteindelijk tonen immunohistochemische en immunofluorescente analyses van het transplantaat de architectuur van normale huid met melanocyten, de migratie en differentiatie van normale stamcellen en stadiumspecifieke melanoomfenotypen.We hebben 20 jaar geleden het huidreconstructiemodel ontwikkeld omdat we vroeg in ons onderzoek ontdekten dat normale melanocyten of melanomcellen die in een kweekschaal worden gecultiveerd, heel anders reageren dan cellen in een weefselcontext. Daarom is het huidreconstructiemodel voor ons ideaal om te observeren hoe cellen zich van het ene compartiment in de huid naar een andere plek bewegen. Bereid het eerder voorbereide acellulaire laagcollageenmengsel op ijs en voeg vervolgens één milliliter van de stroolgele oplossing toe aan elke insert van een zes.Incubeer de weidjes met weefselkweekplaat gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur om de gel te laten stollen. Gedurende deze tijd moet de oplossing van kleur veranderen van geel naar roze terwijl de gel stolt. Los human fibroblasten uit hun kweekfles met 0,25% trypsin EDTA; trypsiniseer gedurende vijf minuten. Voeg DMEM met 10% FBS toe om het trypsinisatieproces te neutraliseren.Verzamel de losgekoppelde cellen door centrifugatie gedurende vijf minuten bij 200 G bij kamertemperatuur, en resuspendeer de cellen vervolgens op 4,5 × 10⁵ cellen per 1,5 milliliter DMEM aangevuld met 10% FBS. Vul vervolgens een buis van 50 milliliter met het eerder bereide mengsel van collageen voor de cellaag en plaats de buis op ijs.Voeg 1,5 milliliters van de fibroblastsuspensie toe aan de buis en meng goed. Voeg drie milliliters van de strogeelgekleurde cellulaire laagoplossing toe aan elke met een acellulaire laag gecoate insert. Incubeer vervolgens het weefkweekplateau gedurende 45 minuten bij 37 degrees Celsius in een weefkweekincubator met 5% carbon dioxide tijdens de incubatieperiode.De kleur van de oplossing van de cellulaire laag moet ook veranderen van geel naar roze. Nadat de bovenste gellagen is gestold, voegt u twee milliliters DMEM met 10%FBS toe aan de binnenkant van de insert in de weefselkweekplaat, en 10 milliliters aan de buitenkant van de insert. Incubeer de weefselkweekplaten gedurende vier dagen.Controleer op de vierde dag of de gel is gekrompen; aspireer op deze vierde incubatiedag het medium van zowel de binnen- als de buitenkant van elke insert. Voeg twee milliliters wasmedium toe aan de binnenkant en 10 milliliters aan de buitenkant van de inserts om het reguliere serum weg te wassen. Incubeer de trays vervolgens gedurende één uur bij 37 °C voor de vorming van de epidermis.Trypsiniseer eerst de humane keratinocyten. Gebruik na vijf minuten een soja-trypsine-inhibitor om de trypsine te neutraliseren, nadat de losgekoppelde cellen vijf minuten lang zijn gecentrifugeerd bij 200 G. Resuspendeer het celpellet vervolgens in medium tot een concentratie van 4,17 × 10⁶ cellen per milliliter.Reconstitueer medium één nadat de keratinocyten zijn geoogst. Behandel de humane melanocyten één tot twee minuten met trypsine op ijs. Neutraliseer vervolgens de trypsine met soja-trypsine-inhibitor.Centrifuge de cellen vervolgens onder dezelfde omstandigheden als voorheen en resuspendeer het melanocytpellet in skin-medium tot een concentratie van 8,3 × 10⁵ cellen per milliliter. Reconstitueer ook medium één. Verwijder daarna het wasmedium van zowel de binnen- als de buitenkant van elke insert van een weefselkweekplaat met een geprepareerde dermale laag.Vervang het wasmedium door 1,5 milliliters huidreconstructiemedium aan de binnenzijde en 10 milliliters aan de buitenzijde van elk insert toe te voegen. Meng vervolgens 600 microliters van de keratinocytencelsuspensie met 600 microliters van de melanocytsuspensie. Doseer 200 microliters van de gemengde celsuspensie.Voeg het druppelgewijs toe aan de binnenzijde van elk insert. Incubeer de weefselkweekplaat gedurende twee dagen bij 37 °C. Aspireer na incubatie van de cellen het skin reconstruct medium 1 van zowel de binnenzijde als de buitenzijde van elk insert, en voeg vervolgens twee milliliter skin reconstruct medium 2 toe aan de binnenzijde en 10 milliliter aan de buitenzijde van het insert.Incubeer de reconstructen vervolgens nog twee dagen bij 37 °C. Aspireer na de tweede incubatieperiode van twee dagen het huidreconstructiemedium 2 van zowel de binnen- als de buitenkant van elk inzetstuk. Voeg nu 7,5 ml huidreconstructiemedium 3 toe aan alleen de buitenkant van de inzetstukken.Plaats de reconstructen terug in de incubator en ververs het medium. Vervang het reconstructiemedium om de dag tot dag 18. Aspireer op dag 18 van de incubatie het medium van de binnen- en buitenkant van de inserts uit een kweekplaat met geladen huidreconstructen.Verwijder de inzetten met een pincet uit het tray. Snijd het construct, inclusief het polycarbonaatfilter, uit door met een scalpelmes een cirkel vlak langs de rand te trekken. Plaats het reconstruct in het filter vervolgens op een hard oppervlak en snijd deze met het mes doormidden.Plaats één helft van de reconstructie op een zwart TBS-biopsiepapier en plaats het papier vervolgens in een histologiecassette. Week de gehele cassette gedurende meer dan vier uur in 10% formaline. Plaats de cassette daarna in 70% ethanol en bewaar deze bij vier graden Celsius totdat u klaar bent om de reconstructie te verwerken voor paraffine-inbedding.Plaats de andere helft van het recontructx in 50% sucrose bij vier graden Celsius gedurende één tot twee uur. Vervang vervolgens de sucrose door twee molar sucrose en bewaar dit nogmaals één tot twee uur bij vier graden Celsius. Vul een basisvorm voor de helft met optimal cutting temperature, vriesmedium of OCT.Voorkom de vorming van luchtbellen. Pak de rand van het reconstruct met een pincet vast en haal het reconstruct uit de sucrose. Plaats het op Kim wipes totdat de sucrose is geabsorbeerd.Breng het reconstruct met een pincet en een spatel over in het bootje bovenop de OCT. Bedek de bovenkant van het reconstruct met meer OCT totdat het bootje volledig vol is. Vermijd hierbij opnieuw de vorming van luchtbellen.Plaats het bootje gelijkmatig op verbrijzeld droogijs om de OCT volledig te laten bevriezen. Wikkel vervolgens de basisvorm en het folie in en bewaar dit bij -70 °C tot u klaar bent om het met een cryostaat te snijden. Ter voorbereiding op het transplanteren van een huidreconstructie bij een muis, vult u een container met vloeibare stikstof en voegt u 5 mL DMEM toe aan een buis van 50 mL.Vul een bekerglas met 600 milliliters kraanwater en plaats het bekerglas op een warmteplaat om het te verwarmen. Selecteer vervolgens een vrouwelijke skid hairless outbred muis van ongeveer zes weken oud. Anestheseer de muis vervolgens met isofluorine.Gebruik een neuskegel om de anesthesie gedurende de gehele procedure in stand te houden. Breng steriel oogsmeermiddel aan en zorg voor warmteondersteuning om hypothermie te voorkomen. Reinig vervolgens de huid van de muis met een samengestelde benzoin-tinctuur en alcoholprep-gaasjes.Markeer een lijn op de rug van de muis om dezelfde positie aan te houden voor de latere hechting. Maak met irisschaar en pincet een rond wondbed op de rug van de muis en bedek het wondbed vervolgens met steriele gazen sponsjes. Plaats de ronde huid van de muis in de 50 milliliter tube met DMEM.Dompel de buis onder in een container met vloeibare stikstof totdat het medium en het weefsel volledig bevroren zijn. Ontdooi de buis vervolgens in een bekerglas met warm water totdat deze volledig is ontdooid. Herhaal deze vries-dooi-procedure drie keer.Gebruik een chirurgisch scalpel om een huidreconstructie van een insert te scheiden. Verwijder het membraan zeer voorzichtig en breng de huidreconstructie vervolgens over naar de bovenkant van het wondbed van de muis. Plaats nu de muishuid bovenop de huidreconstructie.Zorg ervoor dat de eerste hechting bovenop de eerder gemarkeerde markering staat en de tweede aan de onderkant. Gebruik vervolgens twee extra hechtingen aan de zijkanten van de huidreconstructie om de muidenhuid te fixeren. Reinig de muidenhuid na het transplanteren en plaats de muis vervolgens in een nieuwe kooi.Op dag 18 bestaat de epidermis van de huidreconstructen uit gestratificeerde keratinocytenlagen, waarbij de ongedifferentieerde basale laag en de opeenvolgend gedifferentieerde lagen verticaal georiënteerd zijn. De doorsnede van de reconstructen wordt gekleurd met de melanocytaire marker.S 100, zoals aangegeven door de zwarte pijlen, laat zien dat melanocyten zijn uitgelijnd in de basale laag van de epidermis en communiceren met meerdere keratinocyten via dendritische uitlopers. Het dermale compartiment bevat fibroblasten ingebed in een matrix van collageen type one; afgezet collageen four geeft het basaalmembraan aan, dat de epidermis scheidt van de dermis. De volgende figuren illustreren hoe meerdere lagen keratinocyten in de epidermis zich ontwikkelen.Wanneer dermale stamcellen die zijn gelabeld met een GFP-lentivirale vector samen met fibroblasten worden ingebed in een collageen type I-matrix, migreren zij naar de epidermis en differentiëren zij op dag vijf tot melanocyten. Na het uitzaaien van keratinocyten beginnen individuele cellen uit de sferen te migreren.Let op dat de epidermis nog steeds uit een enkele laag bestaat. Op dag acht bereiken enkele cellen de interface tussen de epidermis en de dermis.Op dag 10 zijn GFP-positieve cellen strak uitgelijnd op de positie van het basaalmembraan, zoals hier te zien is. Gemigreerde GFP-positieve cellen in de epidermis brengen de melanocytaire marker HMB 45 tot expressie. Wanneer verschillende stadia van melanoomcellijnen worden opgenomen in huidreconstructen, weerspiegelt het gedrag van de cellen hun in vivo kenmerken.In deze figuur zijn normale melanocyten en melanomcellen te zien die zijn gekweekt in 2D-culturen. De locatie en de groeisnelheid van normale melanocyten worden in huidreconstructen strikt gecontroleerd zoals hier te zien is; in de radiale groeifase prolifereren primaire melanomen hoofdzakelijk in de epidermis, terwijl melanomen in de verticale groeifase invasief groeien in de dermis, zoals in deze figuur wordt getoond. Tot slot is hier de manier te zien waarop metastatische melanomen agressief diep in de dermis invallen.Onze studies naar normale huid vormen de basis voor een betere kennis van de ontwikkeling en progressie van melanomen.

the-three-dimensional-human-skin-reconstruct-model-tool-to-study

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

This video describes the detailed protocol for generating in vitro 3D organotypic skin reconstructs to study melanoma progression. This skin model mimics both the architecture and multicellular complexity of organs in vivo.

Generation of Organotypic Full Skin Reconstructs: A Procedure to Establish 3D Skin Model Using Human Skin Samples

Carcinogenese is een proces waarbij interacties tussen kankercellen en kanker micromilieu. Om de moleculaire gebeurtenissen ontleden, moet men verschillende celpopulaties in verschillende stadia sluiten tijdens kankerontwikkeling. Met behulp van een muismodel voor basaalcelcarcinoom, een protocol voor mobiele analyses beschrijven we tijdens carcinogenese.

Cel Bevolking Analyses Tijdens Skin Carcinogenesis

Het doel van dit protocol is om een driedimensionaal huidequivalent van volledige dikte op te bouwen, dat lijkt op natuurlijke huid. Met een speciaal geconstrueerd geautomatiseerd wondapparaat kunnen nauwkeurige en reproduceerbare wonden worden gegenereerd onder behoud van steriliteit.

Genereren van een drie-dimensionale volledige dikte huidequivalent en Automated Verwonden

We presenteren een protocol om cellen afgeleide matrices rijk aan extracellulaire matrix eiwitten te verkrijgen, met behulp van macromoleculaire Crowders (MMC). Bovendien presenteren we een protocol dat MMC in 3D organotypische co-kweek huid generatie, die kweektijd vermindert behoud looptijd construct omvat.

Verbetering van 2D- en 3D-Skin<em&gt; In Vitro</em&gt; Modellen Met behulp van macromoleculaire Crowding

Hier presenteren we een protocol voor het genereren van een sferoïde huidmodel voor 3D organotypic melanoom die zowel de architectuur recapituleert en meercellige complexiteit van een orgel/tumor in vivo maar tegelijkertijd herbergt systematische experimentele interventie.

Een 3D Organotypic melanoom sferoïde huidmodel

Dit protocol beschrijft een eenvoudige methode om driedimensionale gereconstitueerde menselijke epidermis op een reproduceerbare en robuuste manier te cultiveren. Bovendien kenmerkt het de structuur-functierelatie van het epidermale barrièremodel. De biologische reacties van de gereconstitueerde menselijke epidermis op pro-inflammatoire stimuli worden ook gepresenteerd.

Het cultiveren van een driedimensionale gereconstrueerde menselijke epidermis op grote schaal

Het doel van dit protocol is om de generatie- en volumetrische analyse van gevasculariseerde menselijke huidequivalenten te beschrijven met behulp van toegankelijke en eenvoudige technieken voor langetermijncultuur. Voor zover mogelijk wordt de reden voor stappen beschreven om onderzoekers in staat te stellen zich aan te passen op basis van hun onderzoeksbehoeften.

Generatie van zelfgeassembleerde vasculariseerde menselijke huidequivalenten

Het huidige protocol beschrijft hoe de menselijke huid kan worden geënt op niet-obese diabetische (NOD) -scid interleukine-2 gammaketen receptor (NSG) muizen. Een gedetailleerde beschrijving van de voorbereiding van de menselijke huid voor transplantatie, de voorbereiding van muizen voor transplantatie, transplantatie van de menselijke huid van gespleten dikte en de herstelprocedure na de transplantatie zijn opgenomen in het rapport.

Xenograft huidmodel om menselijke immuunresponsen in vivo te manipuleren

Hier presenteren we goedkope en eenvoudige procedures om verschillende 3D-huidmodellen te introduceren voor routineonderzoek in een celkweeklaboratorium. Onderzoekers kunnen modellen maken die zijn afgestemd op hun behoeften zonder afhankelijk te zijn van in de handel verkrijgbare modellen.

Opbouw van huidmodellen voor tal van toepassingen - van tweedimensionale (2D) monocultuur tot driedimensionale (3D) multicultuur

Planar en drie-dimensionale printen van geleidende metallic inkten wordt beschreven. Onze aanpak biedt nieuwe mogelijkheden voor het vervaardigen van gedrukte elektronische, opto-elektronische en biomedische apparaten in ongewone lay-outs op de microschaal.

Vlakke en Three-Dimensional Printing van geleidende inkten

Leer een 3D-huidreconstructiemodel genereren voor melanocyt- en melanoombiologie met fibroblasten, keratinocyten en collageen. Deze methode ondersteunt preklinisch geneesmiddelonderzoek.

De driedimensionale menselijke huid Reconstrueer model: een instrument om de normale huid en melanoomprogressie Study

Meer video's verkennen