Waarom is het testen van de nulhypothese belangrijk voor celisolatie op basis van EpCAM?

Het toetsen van de nulhypothese zorgt ervoor dat de waargenomen celvangst statistisch significant is en niet het gevolg is van willekeurige binding, wat bijdraagt aan een robuuste targetvalidatie in oncologische workflows.

Hoe past de isolatie van de onafhankelijke variabele in de workflow voor capture op basis van draden?

Het isoleren van de variabele van EpCAM-expressie maakt een directe beoordeling van de antilichaamspecificiteit en de vangstefficiëntie mogelijk, waardoor de mechanistische bijdragen in de discovery-pipeline worden verduidelijkt.

Wat maken kwantitatieve metingen van de afhankelijke variabele mogelijk in dit protocol?

Kwantitatieve telling van gevangen cellen via fluorescentiemicroscopie maakt een objectieve vergelijking van de vangstefficiëntie mogelijk en ondersteunt de ontwikkeling van downstream-assays.

Waarom zijn replicatie-eisen cruciaal voor cross-functionele celisolatiestudies?

Replicatie waarborgt de reproduceerbaarheid van de celvangst en -vrijgave, wat de betrouwbare uitwisseling van gegevens en samenwerking tussen discovery- en translationele teams faciliteert.

Welke statistische analysecapaciteiten zijn vereist voordat de resultaten van de celopvang worden geïmplementeerd?

Statistische analyse van celgetallen en capture-snelheden is noodzakelijk om de specificiteit te valideren, protocollen te optimaliseren en om go/no-go-beslissingen in de vroege fase van R&D te onderbouwen.

Functionalized Wire-based Target Cell Isolation: An Ex Vivo Technique to Isolate Cancer Cells from Spiked Peripheral Blood

JoVE Encyclopedia of Experiments

Kankeronderzoek

0 weergaven • 4:08 min • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Epithelial cell adhesion molecules, or EpCAMs, are surface transmembrane glycoproteins overexpressed in rapidly proliferating epithelial cells in prostate cancers. To isolate EpCAM-expressing cells, begin with a medical-grade wire bearing a functionalized gold-coated tip. Functionalization layers a polymeric gel containing covalently bound EpCAM-specific antibodies.

Immerse the wire into a peripheral blood suspension containing fluorescently labeled cancer cells. Ensure that the functionalized part remains dipped in the blood suspension. The EpCAMs on the cancer cells recognize and bind to their specific antibodies functionalized on the wire.

Wash with a buffer to remove any unbound cells from the wire surface. Bend the wire and mount it on a buffer-containing glass slide, with the functionalized part immersed in the buffer. Use a fluorescence microscope to check bright fluorescence from cell cytoplasm and nuclei and confirm the presence of captured cells on the wire.

Treat the wire with a release buffer. The proteolytic enzymes in the buffer cleave the polymeric gel, releasing the antibody-cancer cell complexes into the buffer. Centrifuge the wire assembly to collect the released antibody-cell complexes in the pellet. Remove the wire and the enzyme-containing supernatant. Resuspend the target cell-containing pellet in a suitable medium.

In 5 milliliters of peripheral blood, add about 500 to 500,000 cells and then mix by inverting the tube. After removing the wire from the storage compartment, remove the rubber cap that holds the wire and wash the wire in 1x phosphate-buffered saline and mount it in the cap of the tube. Then, incubate the tube on a tilted roller mixer at 5 rotations per minute for 30 minutes at room temperature. After incubation, rinse the wire in a 1x phosphate-buffered saline thrice. Then, store the wire in a 15-milliliter tube containing 1x phosphate-buffered saline in the dark.

Draw a rectangle area on a glass slide using a grease pen and add 500 microliters of 1x phosphate-buffered saline onto it. To immerse the functional part of the wire in 1x phosphate-buffered saline, bend the non-functional part of the wire and place it on the glass slide. To count the number of captured cells, visually inspect both sides of the wire. After inspecting, transfer the wire back in the 15-milliliter tube with 1x phosphate-buffered saline and keep in the dark.

Gerelateerde video's

0 Bekeken

Laatst bijgewerkt: 1 augustus 2026

Functionalized Wire-based Target Cell Isolation: An Ex Vivo Technique to Isolate Cancer Cells from Spiked Peripheral Blood

Overzicht

Belangrijkste studiecomponenten

Wetenschappelijk gebied

Achtergrond

Doel van de studie

Gebruikte methoden

Belangrijkste resultaten

Conclusies

Veelgestelde vragen

Industriële relevantie voor directie

Strategische Toepassingen in Biofarmaceutische R&D

Vroege Ontdekking & Targetvalidatie

Screening & Assayontwikkeling

Translationeel & Preklinisch Onderzoek

Integratie van Pijplijn & Workflow

Operationele & Bedrijfsimpact

Overwegingen voor Implementatie

Veelgestelde vragen over Biofarmacie

Karakterisering van tumorcellen met behulp van een medische draad voor het vastleggen van de circulerende tumorcellen: een 3D aanpak gebaseerd op immunofluorescentie en DNA vis

Een bloed-gebaseerd testen voor de detectie van ROS1 en RET Fusion Transcripts from circulerende RNA zuur met behulp van digitale Polymerase-kettingreactie

Targeting Alfa Synuclein aggregaten in cutane perifere zenuwvezels door Free-floating immunofluorescentie assay

Snelle Isolatie van Viable circulerende tumorcellen van de patiënt Blood Samples

Immunofluorescence Assay: A Method to Identify Tumor Cells Captured on a Medical Wire

Negative Immunomagnetic Selection: A Method to Purify B-cells from Peripheral Blood Mononuclear Cells

Een werkwijze van gerichte Cell Isolation via Glasoppervlak functionalisering

Target cel pre verrijking en hele genoom versterking voor eencellige Downstream karakterisering

Micromanipulatie van circulerende tumor cellen voor downstream moleculaire analyse en gemetastaseerde potentiële beoordeling

Isoleren van menselijke perifere bloedmonucleaire cellen en CD4 + T-cellen van patiënten met het Sézary-syndroom voor transcriptomische profilering