Wat is single-cell sampling?

Single-cell sampling is een techniek die wordt gebruikt om individuele cellen uit een grotere populatie te isoleren voor gedetailleerde analyse.

Waarom is het belangrijk om enkele cellen te isoleren?

Het isoleren van enkele cellen stelt onderzoekers in staat om de heterogeniteit en specifieke kenmerken van individuele cellen binnen een populatie te bestuderen.

Welke apparatuur is er nodig voor deze techniek?

Een microscoop uitgerust met een micromanipulator en een microcapillairtip zijn essentieel voor het isoleren van enkele cellen.

Hoe worden de geïsoleerde cellen opgeslagen?

Geïsoleerde cellen worden meestal op ijs in een opvangbuffer bewaard tot verdere analyse.

Welke soorten analyses kunnen worden uitgevoerd op geïsoleerde cellen?

Geïsoleerde cellen kunnen worden gebruikt voor genomische, proteomische en andere moleculaire analyses om hun eigenschappen en gedragingen te begrijpen.

Single Cell Sampling Using Micromanipulation: A Technique to Isolate Single Cells from Cancer Cell Suspension

JoVE Encyclopedia of Experiments

Cancer Research

0 views • 2:10 min • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Single-cell sampling enables isolating a single live cell from a suspension of cancer cells for downstream analysis.

Begin the isolation with a cancer cell suspension. Transfer the desired volume of this suspension onto a glass slide. Leave the slide undisturbed for a while to reduce particle movement and allow the cells to settle.

Now, transfer the slide under a microscope equipped with a micromanipulator connected to a microcapillary tip. This high-precision instrument facilitates physical interaction with cells in the sample at a microscopic level.

Direct the microcapillary tip close to a single target cell. By applying suction, collect the target cell into the microcapillary. Now, transfer the microcapillary directly into a tube containing the desired collection buffer.

Eject the microcapillary contents to release the captured single cell into the buffer. Store the isolated live single cell on ice until further analysis.

For micromanipulation, transfer the entire 100 microliters of cell suspension onto a glass slide. Then, place the glass slide on a microscope equipped with a micromanipulator and allow the cells to settle for 5 minutes. Then, in 0.2-milliliter PCR tubes, pipet 2 microliters of cell lysis master mix and transfer on ice. Use the micromanipulator to collect a single cell in 1 microliter of 1X phosphate-buffered saline.

Then, transfer the cell directly into 2 microliters of cell lysis master mix. Use a desktop microfuge to quickly spin down the samples at 2000 x g for 3 seconds to collect the liquid at the bottom of the tube.