Waarom is het toetsen van de nulhypothese belangrijk voor adhesie-assays van NET-kankercellen?

Toetsing van de nulhypothese waarborgt dat de waargenomen adhesie van kankercellen aan NETs statistisch significant is en niet het gevolg is van toevallige associatie, wat bijdraagt aan een robuuste targetvalidatie in de vroege ontdekkingsfase.

Hoe past de isolatie van onafhankelijke variabelen in de workflow voor NET-adhesie?

Door variabelen zoals de aanwezigheid van NETs of het type kankercel te isoleren, kunnen teams adhesieve interacties specifiek toeschrijven aan NETs, wat de mechanistische paden in de ontdekkingspijplijn verduidelijkt.

Wat maken kwantitatieve fluorescentiemetingen mogelijk in NET-assays?

Kwantitatieve fluorescentie-uitlezingen bieden objectieve metrieken voor het vergelijken van de adhesie van kankercellen onder verschillende condities, wat een betrouwbare beoordeling van kandidaat-modulatoren of pathway-interventies mogelijk maakt.

Waarom zijn replicatie-eisen cruciaal voor studies naar de interactie tussen NET-kankercellen?

Replicatie waarborgt dat waargenomen adhesieve interacties reproduceerbaar zijn en geen artefacten, wat crossfunctionele samenwerking en vertrouwen in de resultaten van de assay voor downstream-beslissingen faciliteert.

Welke statistische analysemogelijkheden zijn vereist voordat NET-adhesie-assays worden uitgevoerd?

Teams moeten statistische methoden toepassen om adhesiesnelheden te vergelijken en de significantie te valideren, om ervoor te zorgen dat de assayresultaten kunnen bijdragen aan de verdere ontwikkeling van de portfolio en het mechanistisch reduceren van risico's.

Fluorescence Microscopy of Neutrophil Extracellular Traps or NETs: A Technique to Observe Adhesive Interaction Between Cancer Cells and NETs

JoVE Encyclopedia of Experiments

Kankeronderzoek

0 weergaven • 3:15 min • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Under pathological conditions like cancer, activated neutrophils release neutrophil extracellular traps or NETs - a mesh of extracellular DNA with associated enzymes and antimicrobial proteins - that entrap circulating cancer cells.

To visualize the adhesive interaction between NETs and tumor cells in vitro, begin by culturing low-density neutrophils, a neutrophil subtype, in a polymer-coated culture dish that promotes cell attachment. Incubate for a few hours to stimulate the neutrophils to form web-like NETs.

Add a suspension of red fluorescein-labeled cancer cells to the neutrophil culture. Incubate the cancer cells with NETs for a brief period to facilitate cancer cell-NET interaction. The NET-DNA acts as a chemotactic factor that attracts cancer cells and promotes their adhesion to NETs.

Remove the spent medium. Gently wash the culture with a suitable fresh medium to remove any unattached tumor cells from the culture well.

Now, add a membrane-impermeable green fluorescent nuclear stain to color the extracellular NETs selectively. Observe the culture under a fluorescence microscope. Neutrophil extracellular traps appear as green string-like structures that form a mesh to which red tumor cells are attached.

Resuspend the isolated low-density neutrophils at a 5 times 10 to the sixth cells per milliliter of RPMI 1640 medium supplemented with FBS concentration and seed 1 milliliter of neutrophils per well on a 6-well poly-L-lysine coated plate. After 2 hours at 37 degrees Celsius and 5% carbon dioxide, stain the cells in each well with an appropriate fluorescent membrane-impermeable nuclear and chromosomal dye according to the manufacturer's instructions and immediately observe the morphology of the NETs by fluorescence microscopy.

To assess tumor cell adhesion to the NETs, resuspend gastric tumor cells stained with a contrasting fluorescent dye at a 1 times 10 to the sixth per milliliter of RPMI 1640 supplemented with 0.1% bovine serum albumin concentration and add 1 milliliter of tumor cells to each well of the low-density neutrophil cultures. After 5 minutes at 37 degrees Celsius, remove the supernatant from each well and gently wash the cells two times with 2 milliliters of pre-warmed RPMI 1640 medium supplemented with BSA per wash.

Gerelateerde video's

0 Bekeken

Laatst bijgewerkt: 22 augustus 2026

Fluorescence Microscopy of Neutrophil Extracellular Traps or NETs: A Technique to Observe Adhesive Interaction Between Cancer Cells and NETs

Overzicht

Belangrijkste studiecomponenten

Wetenschappelijk vakgebied

Achtergrond

Doel van de studie

Gebruikte methoden

Belangrijkste resultaten

Conclusies

Veelgestelde vragen

Industriële relevantie voor management

Strategische toepassingen in BioPharma R&D

Vroege Ontdekking & Targetvalidatie

Screening & assayontwikkeling

Translationeel & Preklinisch Onderzoek

Integratie van pipeline en workflow

Operationele & Bedrijfsimpact

Overwegingen bij de implementatie

Biopharma Veelgestelde Vragen

Human Neutrophil Flow Kamer adhesietest

Isolatie en karakterisering van neutrofielen met Anti-Tumor Properties

Overdracht van gemanipuleerde tumor-geassocieerde neutrofielen in tumor-dragende muizen om hun angiogene potentiaal in vivo te bestuderen

Neutrofielen Extracellulaire Traps: Hoe te genereren en te visualiseren

Time-lapse Fluorescence Microscopy of Neutrophil Extracellular Traps or NETs: A Technique to Analyze Post-adhesion Interaction between Cancer Cells and NETs

Induction and Visualization of Neutrophil Extracellular Traps in Pre-Labeled Neutrophils

In Vitro Adhesion Assay to Detect the Adherence of Cancer Cells to Neutrophil Extracellular Traps

Vereenvoudigde Human Neutrophil Extracellular traps (NET) Isolatie en Handling

Visualiseren van extracellulaire Traps Macrophage met behulp van de Confocal Microscopie

Neutrofiele extracellulaire Traps gegenereerd door lage dichtheid neutrofielen verkregen peritoneale Lavage vloeistof bemiddelen Tumor celgroei en bijlage