Frozen Mouse Brain Tissue Sectioning: A Procedure to Obtain Thin Frozen Tissue Sections from Frozen Murine Brain Tissue
JoVE Encyclopedia of Experiments
Kankeronderzoek
0 weergaven • 2:37 min • April 30th, 2023
To obtain cryosections or thin frozen tissue sections of a mouse brain, first, take a frozen block of mouse brain embedded in a suitable embedding medium.
Transfer the frozen block to a cryostat chamber and allow the block’s temperature to equilibrate with the set temperature of the cryostat for subsequent sectioning procedure.
Then, use embedding medium to mount the frozen tissue block to the base of the cryostat specimen disc.
Place the specimen disc into the specimen head of the cryostat.
Additionally, secure a blade in the blade holder of the cryostat.
Using the external handwheel, adjust the position of the specimen head to align the tissue block with the blade.
Once the tissue block and blade are correctly oriented, move the handwheel to initiate sectioning, trimming off the unwanted region of the tissue block that contains excess embedding medium.
As the frozen tissue block advances towards the fixed blade, it gets cut into slices of desired thickness.
Carefully transfer the sliced frozen tissue sections onto positively charged glass slides. The charged glass slides electrostatically attract the frozen tissue sections, facilitating their adhesion to the slide surface.
Finally, store the sections at low temperatures until further analysis.
To acquire frozen brain tumor tissue sections, first, set the temperature of a cryostat between minus 20 and minus 24 degrees Celsius and place the sample block into to the cryostat chamber for 30 to 60 minutes.
While the sample is equilibrating, clean the chamber and knife holder with 100% ethanol and spray the section brushes with RNase cleaning solution. When the sample is ready, remove the mold and use fresh cutting medium to attach the frozen tissue block to the cryostat specimen disk.
Place the block in the disk holder and align the block with the knife blade. Acquire 10-micrometer sections of the brain using one of the RNase-free brushes to carefully flatten and uncurl the tissue pieces onto the cutting surface.
To mount the brain tissue sections onto slides, smoothly press the positively charged side of a labeled RNase-free PEN glass slide onto the section and place the slide into a storage box inside the chamber. When all the slides have been collected, place the storage box at minus 80 degrees Celsius.
Overzicht
Dit artikel beschrijft de procedure voor het verkrijgen van cryosneden van muizenbreinweefsel. Het beschrijft in detail de noodzakelijke stappen voor het prepareren en snijden van bevroren breinmonsters voor verdere analyse.
Belangrijkste Onderdelen van de Studie
Wetenschappelijk vakgebied
- Neurowetenschappen
- Histologie
- Weefselverwerking
Achtergrond
- Cryosectie is essentieel voor het bestuderen van de morfologie van hersenweefsel.
- Een juiste temperatuurbeheersing is cruciaal tijdens het sectieproces.
- Positief geladen objectglazen verbeteren de weefseladhesie voor analyse.
- RNase-vrije technieken zijn belangrijk voor het behoud van de RNA-integriteit.
Doel van de studie
- Om de methode voor het bereiden van bevroren hersendoorsneden te demonstreren.
- Om weefselmonsters van hoge kwaliteit te garanderen voor vervolgonderzoek.
- Om een protocol te bieden dat RNA-degradatie minimaliseert.
Gebruikte methoden
- Inbedden van bevroren hersenweefsel in een cryostaat.
- Snijden van het weefsel in plakjes van de gewenste dikte.
- Gebruik van positief geladen glazen objectglaasjes voor de overdracht van weefsel.
- Opslaan van coupes bij lage temperaturen voor conservering.
Belangrijkste resultaten
- Succesvolle verkrijging van dunne bevroren hersendoorsneden.
- Effectieve adhesie van weefselsneden aan glazen objectglaasjes.
- Behoud van RNA-integriteit door RNase-vrije protocollen.
Conclusies
- De beschreven methode is effectief voor het bereiden van hersenweefselcoupes.
- Temperatuurbeheersing en schone technieken zijn cruciaal voor het succes.
- Dit protocol kan worden toegepast op verschillende typen hersenweefsels.
Veelgestelde vragen
Relevantie voor de industrie
Het snijden van bevroren weefselcoupes maakt een getrouwe preservering van de architectuur en moleculaire inhoud van muizenbreinweefsel mogelijk voor daaropvolgende ontdekkingsapplicaties. Deze procedure ondersteunt target-validatie en biomarker-ontdekking door de weefselintegriteit en RNA-kwaliteit te behouden, wat essentieel is voor preklinische risicobeperking. Het biedt een gestandaardiseerde, reproduceerbare basis voor ruimtelijke moleculaire assays in neuro-oncologische en CNS-drug discovery-pipelines.
Strategische Toepassingen in Biofarmaceutische R&D
Vroege ontdekking & targetvalidatie
- Wetenschappelijke waarde: Maakt het toetsen van therapeutische hypothesen mogelijk door behoud van weefselmorfologie en moleculaire lokalisatie.
- Operationele waarde: Ondersteunt functionele targetvalidatie door de integriteit van antigenen en nucleïnezuren te behouden voor immunohistochemische assays en in situ hybridisatie-assays.
- Voorspellende waarde: Faciliteert biologische risicoreductie door hoogwaardige coupes te leveren voor target-engagement en pathway-analyse in ziekterelevante modellen.
Screening & Assayontwikkeling
- Wetenschappelijke waarde: Bereidt gevalideerde biologische systemen voor op downstream workflows voor ruimtelijke transcriptomica en proteomische screening.
- Operationele waarde: Garandeert assay-standaardisatie en reproduceerbaarheid door consistente sectiedikte en slide-adhesie.
- Schaalbaarheid: Maakt hergebruik van het platform mogelijk voor meerdere targets en hersenregio's in discovery-campagnes.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Translationele Continuïteit: Handhaaft de relevantie voor de ziekte vanaf de ontdekking tot aan de preklinische validatie door het tumor微milieu en stromale interacties te behouden.
- Risico-gecorrigeerde Vooruitgang: Ondersteunt de afstemming van biomarkers en mechanische risicovermindering voor go/no-go-beslissingen bij de ontwikkeling van therapeutica voor het centraal zenuwstelsel.
- Voorspellend Vertrouwen: Maakt kwantitatieve metingen van afhankelijke variabelen mogelijk voor doelwitmodulatie en readouts van fenotypische screening.
Integratie van Pipeline & Workflow
Deze methode is geïntegreerd in het ontdekkingscontinuüm, van vroege toetsing van target-hypothesen tot lead-identificatie en preklinische validatie, ter ondersteuning van ruimtelijke moleculaire karakterisering in de neuro-oncologie.
- Discovery Biology: Ondersteunt hypothesetoetsing en pathway-verduidelijking door regio-specifieke weefselanalyse mogelijk te maken.
- Screening: Zorgt voor assay-gereedheid via gestandaardiseerde, RNase-vrije sectie- en montageprotocollen.
- Analytics: Levert kwantitatieve resultaten voor metingen van spatiale genexpressie en eiwitlokalisatie.
- Translationeel onderzoek: Verbindt discovery aan preklinische continuïteit via behouden weefselarchitectuur en moleculaire getrouwheid.
- Enterprise Reuse: Dient als een herbruikbare capaciteit voor meerdere projecten waarbij de bereiding van bevroren coupes vereist is.
Operationele impact & impact op de organisatie
- Wetenschappelijke waarde: Voorspellende zekerheid door targetvalidatie en vermindering van mechanistische ambiguïteit in CZS-modellen.
- Operationele waarde: Standaardisatie, reproduceerbaarheid en schaalbaarheid van workflows voor weefselpreparatie.
- Strategische waarde: Betere go/no-go-beslissingen, kapitaalefficiëntie en verminderd biologisch risico in een laat stadium bij neurotherapeutica.
- Impact op portfolio: Risico-gecorrigeerde prioritering en beslissingen over verdere ontwikkeling op basis van ruimtelijk opgeloste data over target-engagement.
Overwegingen voor de implementatie
- Vereist expertise in het bedienen van een cryostaat en het hanteren van weefsel voor een optimale sectiekwaliteit.
- Afhankelijk van cryostaat-instrumentatie, RNase-vrije reagentia en een infrastructuur van positief geladen objectglazen.
- Vereist standaardisatie tussen teams voor snijdikte, temperatuurbeheersing en opslagprotocollen.
- Overwegingen voor aanpassing omvatten weefseltype, inbeddingsmedium en sectiedikte voor verschillende hersenregio's.
- Praktische beperkingen omvatten de fragiliteit van de secties en de noodzaak van onmiddellijke opslag bij een lage temperatuur om degradatie te voorkomen.
Veelgestelde vragen over Biofarmacie
Cryosectioning aaneengesloten Regio's van een enkele muis skeletspieren voor Gene Expression en histologische Analyses
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Sequentiële immunofluorescentie en immunohistochemie op Gecryode zebravis-embryo's
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Ruimtelijke en temporele controle van muizen melanoom initiatie van mutant melanocyt stamcellen
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Dun snijden van Slice voorbereidingen voor immunohistochemie
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Flash Invriezen en Cryosectioning E12.5 hersenen van muizen
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Voorbereiding van de muis hersenweefsel voor Immunoelectron Microscopie
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Snap Freezing of Muscle Tissue for Sectioning: A Protocol to Obtain Ultrathin Sections of Rapidly Frozen Murine Muscle Tissue
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Cryopreservation of Murine Brain by Snap Freezing: A Technique to Rapidly Freeze Whole Mouse Brain Specimen for Histological Analysis
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Cryopreserved Tissue Section Fixation and Staining: A Procedure to Process Frozen Brain Tissue Sections for Laser Microdissection
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Processing of a Mouse Brain for Downstream Analysis
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Laatst bijgewerkt: 29 augustus 2026