Labeling Murine T Helper Lymphocytes using Radiolabeled Monoclonal Antibodies
JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 weergaven • 3:28 min • July 8th, 2025
To radiolabel murine T helper, Th lymphocytes carrying a T cell receptor, TCR, specific for chicken ovalbumin peptide, take a tube containing radiolabeled monoclonal antibodies, mAbs, with the desired radioactive activity.
The mAb comprises a murine mAb specific for the TCR expressed on the murine Th lymphocyte membrane. A chelator conjugates the mAb and a positron-emitting copper isotope, forming a stable complex.
Dilute the radiolabeled mAbs with saline. Next, add the diluted radiolabeled mAbs to a multi-well plate containing a Th lymphocyte suspension. Briefly incubate.
Within the culture, the radiolabeled mAbs bind to the TCRs on the Th lymphocyte membranes. Post-incubation, transfer the cell suspension to a fresh tube.
Centrifuge. Discard the supernatant containing unbound radiolabeled antibodies. Resuspend the Th lymphocytes in medium and transfer into a multi-well plate. Incubate for an extended duration.
The radiolabeled mAb-TCR binding causes adaptor protein recruitment to the cytoplasmic side of the plasma membrane, to which clathrin triskelions bind and form a clathrin-coated pit.
Accessory proteins help pinch off the vesicle from the plasma membrane, facilitating internalization of the radiolabeled mAb-TCR complex into the cytoplasm. Eventually, TCRs are re-expressed on the Th lymphocyte membranes.
The radiolabeled Th lymphocytes are ready for further experiments.
For chicken ovalbumin-specific TH1 cell radiolabeling, first use a dose calibrator to draw 37 megabecquerels of the T cell-specific radioactive antibody of interest, into a syringe without dead volume.
Next, dispense the antibody into a reaction cup, and measure and subtract the remaining amount of reactivity in the syringe from the amount that was drawn. Then, add one milliliter of saline to the cup to generate a 37-megabecquerel-per-milliliter solution.
Next, add two times 10 to the sixth OVA-TH1 cells in 0.5ml of complete medium to each well of a 48-well plate, followed by 20 microliters of the radiolabeled antibody solution. After 30 minutes in a radiation-safe 37-degrees Celsius and 7.5% carbon dioxide cell culture incubator, pool the radiolabeled cells in a 50-milliliter conical tube for two washes in 10 milliliters of 37 degrees Celsius PBS.
Overzicht
Dit artikel beschrijft een methode voor het radiolabelen van murine T-helperlymfocyten die een T-celreceptor tot expressie brengen die specifiek is voor het kippen-ovalbuminepeptide. Het proces maakt gebruik van radiogelabelde monoklonale antilichamen om de internalisatie van het TCR-complex in het cytoplasma van de lymfocyten te faciliteren.
Belangrijkste componenten van de studie
Wetenschappelijk vakgebied
- Neurowetenschappen
- Immunologie
- Celbiologie
Achtergrond
- T-helperlymfocyten spelen een cruciale rol in de immuunrespons.
- Radiomerkerstechnieken zijn essentieel voor het volgen en bestuderen van celinteracties.
- Inzicht in de TCR-dynamiek kan aanwijzingen geven over de immuunfunctie.
- Kippenovalbumine is een modelantigeen dat wordt gebruikt in immunologische studies.
Doel van de studie
- Het ontwikkelen van een betrouwbare methode voor het radiolabelen van T-helperlymfocyten.
- Het onderzoeken van het internalisatieproces van TCR's na binding met radiogemarkeerde antilichamen.
- Het voorbereiden van radiogemarkeerde Th-lymfocyten voor verdere experimentele toepassingen.
Gebruikte methoden
- Voorbereiding van radiogemarkeerde monoklonale antilichamen specifiek voor TCR's.
- Incubatie van Th-lymfocyten met radiogemarkeerde antilichamen.
- Centrifugatie om ongebonden antilichamen te verwijderen.
- Resuspensie van cellen voor verdere experimenten.
Belangrijkste resultaten
- Succesvolle binding van radiogestempelde mAbs aan TCR's op Th-lymfocyten.
- Internalisatie van het mAb-TCR-complex in het cytoplasma.
- Her-expressie van TCR's op de lymfocytenmembranen na internalisatie.
- Voorbereiding van radiogestempelde Th-lymfocyten voor vervolgstudies.
Conclusies
- De methode labelt Th-lymfocyten effectief voor tracking en analyse.
- Inzichten uit deze studie kunnen het begrip van T-celdynamiek verbeteren.
- Deze techniek kan worden toegepast in diverse immunologische onderzoekcontexten.
Veelgestelde vragen
Industriële Relevantie voor Managers
Radiolabelling van muis T-helperlymfocyten met monoklonale antilichamen maakt nauwkeurige, niet-invasieve tracking van de migratie van immuuncellen mogelijk met behulp van PET/CT-beeldvorming. Deze mogelijkheid ondersteunt targetvalidatie in een vroeg stadium en mechanische risicoreductie bij geneesmiddelenonderzoek gericht op immunologie. De aanpak vergroot het voorspellend vertrouwen in immuunmodulatiestrategieën en informeert portfoliobeslissingen in immuno-oncologie en onderzoek naar auto-immuunziekten.
Strategische toepassingen in biofarmaceutische R&D
Vroege Ontdekking & Targetvalidatie
- Maakt directe visualisatie van antigeenspecifieke T-celmigratie in vivo mogelijk voor hypothesetoetsing.
- Ondersteunt functionele validatie van immuuntargets door monitoring van TCR-engagement en internalisatie.
- Faciliteert mechanistische risicoreductie door verduidelijking van de cellulaire respons op antilichaambinding.
- Verbetert het voorspellend vertrouwen voor strategieën tot modulatie van immuunpaden.
Screening & Assayontwikkeling
- Biedt een gestandaardiseerde methode voor het genereren van radiogemarkerde immuuncellen voor downstream-assays.
- Waarborgt reproduceerbaarheid en kwantitatieve beoordeling van antilichaam-celinteracties.
- Maakt de preparatie van gevalideerde celpopulaties mogelijk voor screeningplatforms op basis van imaging.
- Ondersteunt een betrouwbare evaluatie van de effecten van verbindingen op de trafficking van immuuncellen.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Lijnt preklinische imaging-resultaten uit met ziekterelateerde dynamiek van immuuncellen.
- Maakt continuïteit mogelijk van in vitro validatie naar in vivo tracking in diermodellen.
- Ondersteunt de risico-gecorrigeerde voortgang van immuun-targetende kandidaten.
- Levert translationele biomarkergegevens voor de lokalisatie en persistentie van immuuncellen.
Integratie van Pipeline & Workflow
Deze radiomerkeringsmethode is geïntegreerd in het continuüm van ontdekking tot preklinisch onderzoek, ter ondersteuning van zowel vroege mechanistische studies als translationele imaging-workflows.
- Discovery Biology: Faciliteert hypothesegedreven testen van T-celreceptor-targeting en trafficking.
- Screening: Levert reproduceerbare, kwantitatieve celmarkering voor assays op basis van beeldvorming.
- Analytics: Biedt PET/CT-uitlezingen voor het vergelijken van de distributie van immuuncellen onder verschillende condities.
- Translationeel Onderzoek: Slaat een brug tussen in vitro validatie en in vivo immuunceltracking in preklinische modellen.
- Enterprise Hergebruik: Vestigt een herbruikbaar platform voor het radiolabelen van diverse immuuncelpopulaties.
Operationele & Bedrijfsimpact
- Wetenschappelijke waarde: Verhoogt het voorspellende vertrouwen in studies naar immuunceltargeting en trafficking.
- Operationele waarde: Standardiseert radiolabeling- en imaging-workflows voor immuuncelanalyse.
- Strategische waarde: Informeert go/no-go-beslissingen voor immuunmodulerende therapeutica.
- Impact op portfolio: Ondersteunt risicogewogen prioritering van immunologische en immuno-oncologische activa.
Overwegingen voor implementatie
- Vereist expertise in radiochemie en de manipulatie van immuuncellen.
- Toegang tot PET/CT-beeldvorming en infrastructuur voor dosiskalibratie is noodzakelijk.
- Standaardisatie tussen teams is vereist voor reproduceerbare celmarkering en beeldvorming.
- Aanpassingen kunnen nodig zijn voor verschillende immuunceltypen of receptor-targets.
- Stralingsveiligheidsprotocollen en naleving van de regelgeving zijn essentieel.
Biopharma Veelgestelde vragen
Whole-dierlijke Imaging en Flowcytometrische technieken voor analyse van antigeen-specifieke CD8 + T cel reacties na Nanoparticle Vaccinatie
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Geautomatiseerde Radiochemische Synthese van [
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Niet-invasieve PET/MR-beeldvorming in een orthotopisch muismodel van hepatocellulair carcinoom
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Methoden om Beta Cell Death gemedieerd beoordelen door cytotoxische T lymfocyten
Gerelateerde video's
0 Bekeken
An Immunological Technique to Monitor Adjuvant-Mediated Cytotoxic T Lymphocyte Generation
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Validatie van Nanobody en antilichamen gebaseerde
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Inductie van Muriene darmontsteking door adoptieve overdracht van effector CD4
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Isolatie en Activering van Muizen lymfocyten
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Muizen-lymfocyt Labeling door
Gerelateerde video's
0 Bekeken
In Vitro en In Vivo beoordeling van T-, B- en myeloïde cellen onderdrukkende activiteit en humorale reacties van transplantatie ontvangers
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Laatst bijgewerkt: 29 augustus 2026