Waarom is de depletie van T-cellen cruciaal vóór de reconstitutie van alloreactieve T-cellen in GvHD-modellen?

T-celdepletie verwijdert storende alloreactieve populaties, waardoor een nauwkeurige studie mogelijk wordt gemaakt naar gedefinieerde T-cel-subsets die pathogene immuunresponsen aansturen. Deze isolatie ondersteunt de mechanistische duidelijkheid in target-validatiestudies door te garanderen dat de geobserveerde effecten voortkomen uit herintroduceerde alloreactieve T-cellen.

Hoe ondersteunt retrobulbaire intraveneuze injectie de transplantatie van hematopoëtische stamcellen bij bestraalde ontvangers?

Retrobulbaire injectie brengt cellen in de veneuze sinus, wat de systemische distributie en homing naar beenmergniches vergemakkelijkt waar hematopoiese wordt gereconstitueerd. Deze methode garandeert een betrouwbare transplantatie van hematopoëtische stamcellen voorafgaand aan een immunun uitdaging.

Welke kwantitatieve uitkomsten maken de beoordeling van de ernst van GvHD in dit model mogelijk?

Klinische scoring op basis van gewichtsverlies, houding, activiteit, vachttextuur en diarree biedt kwantificeerbare, longitudinale metrieken voor ziekteprogressie. Deze eindpunten ondersteunen dosis-responsanalyse en de evaluatie van therapeutische effectiviteit in preklinische studies.

Waarom zijn replicatie-eisen essentieel voor het valideren van GvHD-modellen bij het zoeken naar nieuwe geneesmiddelen?

Replicatie over verschillende dieren en experimenten garandeert fenotypische consistentie, wat essentieel is voor cross-functionele teams om therapeutische interventies betrouwbaar te vergelijken. Gestandaardiseerde inductie minimaliseert variabiliteit die werkelijke drug-effecten in screeningscampagnes zou kunnen maskeren.

Welke statistische analyse is vereist om de GvHD-uitkomsten te interpreteren voordat kandidaten worden doorgezet?

Analyse van klinische scores, overlevingscurves en histopathologische gegevens met behulp van passende parametrische of non-parametrische toetsen maakt een objectieve vergelijking tussen behandelings- en controlegroepen mogelijk. Dit ondersteunt go/no-go-beslissingen op basis van statistisch significante verbetering van ziektefenotypes.

Induction of Graft Versus Host Disease in Mouse Models via Allogeneic Bone Marrow and Splenic Cell Transplantation

JoVE Encyclopedia of Experiments

Immunologie

0 weergaven • 5:54 min • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Begin with an anesthetized recipient mouse previously irradiated to suppress the host immune system.

Obtain hematopoietic stem cells from a genetically different donor mouse to mimic allogeneic stem cell transplantation.

Remove the donor T cells using magnetic beads.

Inject this T cell-depleted suspension into the retrobulbar space of the recipient mouse.

Transplanted cells enter the bloodstream, migrate to the bone marrow vessels, and use adhesion molecules to enter the niche, initiating hematopoiesis.

Inject splenic T lymphocytes from an allogeneic donor mouse into the recipient's retrobulbar space to induce immune cross-reactivity.

These alloreactive T cells migrate to various tissues.

The T cell surface receptors bind to recipient cell antigens, recognizing them as foreign.

This triggers a cascade of signaling events within the T lymphocytes, leading to their activation.

The activated T cells trigger an inflammatory cascade characterized by the recruitment of additional immune cells that collectively damage the host tissues, leading to the development of graft-versus-host-disease.

One day after total body irradiation of the recipient BALB/c mice, place a CD45.1/Ly5.1 B6.SJL donor mouse in the prone position on a clean working sheath, and use one 13-centimeter curved and serrated tip of a Semken forceps to lift the fur at one Achilles heel.

Using hardened 8.5-centimeters fine scissors with straight tips, incise the skin between the forceps and one heel, elongating the incision cranially to facilitate removal of the skin and fur from the hind limbs. When the skin has been removed from the hind limbs, cut through each hip, ankle, and knee joint.

Store the thigh and shank of every hind limb in a single 92-millimeter Petri dish filled with PBS on ice, and carefully remove as much muscle as possible from each bone, transferring each cleaned femur and tibia into a 50-milliliter tube of sterile RPMI 1640 medium on wet ice.

To isolate the bone marrow, transfer one bone at a time into a new 92-millimeter Petri dish filled with fresh RPMI 1640 medium, and use a scalpel to cut the ends off of each bone. Next, use a 1-milliliter syringe equipped with a 26-gauge needle to flush the bones with one milliliter of fresh medium at a time into a 50-milliliter collection tube containing five milliliters of medium.

When all the bones had been flushed, gently pipette the crumbly bone marrow pieces up and down several times to generate a single-cell suspension. Before filtering the cells through a 40-micrometer mesh screen cell strainer into a new 50-milliliter collection tube, pellet the cells by centrifugation, and resuspend the cells in five milliliters of ammonium chloride potassium lysis buffer for a three-minute incubation at room temperature. At the end of the incubation, stop the reaction with 10 milliliters of PBS and centrifuge the cells again.

Resuspend the pellet in two milliliters of fresh PBS for counting, and set aside a 6 x 10⁶ cell aliquot for downstream flow cytometric analysis. Next, use a commercially available cell purification kit to magnetically deplete the CD90.2-positive T cells from the bone marrow single-cell suspension according to the manufacturer's instructions, and set aside a 1 x 10⁶ cell aliquot of the T cell-depleted eluate for downstream flow cytometric analysis of the cell purity and composition before and after separation.

Then, use a one-milliliter syringe equipped with a 30-gauge needle to inject 5 x 10⁵ T cell-depleted bone marrow cells and 100 microliters of PBS intravenously into the retrobulbar space of the venous sinus of each irradiated recipient animal.

Gerelateerde video's

0 Bekeken

Laatst bijgewerkt: 15 augustus 2026

Induction of Graft Versus Host Disease in Mouse Models via Allogeneic Bone Marrow and Splenic Cell Transplantation

Overzicht

Belangrijkste studiecomponenten

Wetenschappelijk vakgebied

Achtergrond

Doel van de studie

Gebruikte methoden

Belangrijkste resultaten

Conclusies

Veelgestelde vragen

Relevantie voor de Industrie

Strategische toepassingen in biofarmaceutisch R&D

Vroege Ontdekking & Targetvalidatie

Screening & assayontwikkeling

Translationeel & Preklinisch Onderzoek

Integratie van Pijplijn & Workflow

Operationele & Bedrijfsimpact

Overwegingen voor Implementatie

Veelgestelde vragen over Biofarmacie

Inductie van allogeen-specifieke anergie in humane perifere bloed mononucleaire cellen door allogeen stimulatie met Co-stimulerende signaal blokkade

Inductie van Graft-versus-host ziekte en In Vivo T-cel monitoren door gebruik van een MHC-matched muizenmodel

Muismodellen voor Graft Arteriosclerosis

Mouse Model van Allo-immuun geïnduceerde Vascular Afwijzing en Transplant Aderverkalking

A Novel Microchirurgische Model voor Heterotope, En Bloc borstwand, Thymus, en harttransplantatie in Muizen

Inductie van intestinale Graft - versus host klauwzeer en haar Mini-Endoscopische beoordeling in levende muizen

Inductie en scoren van transplantaat-versus-gastheer ziekte in een xenogene Murine model en kwantificering van menselijke T cellen in muizen weefsels met behulp van digitale PCR

Een muis model van vasculaire Heterotopic milt transplantatie voor het bestuderen van milt celbiologie en transplantatie immuniteit

Beenmergtransplantatie Platform om de rol van dendritische cellen in graft-versus-host ziekte te onderzoeken

Een immunologisch model voor heterotopische hart- en hartspierceltransplantatie bij ratten