Waarom is cyclooxygenase-2 remming belangrijk voor macrofagenfagocytose?

Remming van cyclooxygenase-2 behoudt de intracellulaire cAMP-spiegels door prostaglandinesynthese te blokkeren, wat het fagocytisch vermogen van macrofagen verbetert, zoals aangetoond door een toename van de fluorescentie van een pH-gevoelige kleurstof in met het medicijn behandelde cellen.

Hoe maakt een pH-gevoelige fluorescerende kleurstof kwantitatieve meting van fagocytose mogelijk?

De kleurstof fluoresceert bij de vorming van het fagolysosoom wanneer fagocomen die schimmels bevatten fuseren met zure lysosomen, waardoor de fluorescentie-intensiteit kan worden gebruikt om de internalisatie van schimmels door macrofagen te kwantificeren.

Welke rol speelt de minimale remmende concentratie bij het ontwerp van een medicamenteuze behandeling?

Door de minimale remmende concentratie van aspirine of ibuprofen te gebruiken, wordt voorkomen dat er schimmeldodende activiteit optreedt, waardoor het immunomodulerende effect op de fagocytose door macrofagen kan worden geïsoleerd zonder directe remming van de schimmalgroei.

Waarom is replicatie belangrijk bij macrophage fagocytose-assays?

Replicatie over wells en experimenten garandeert de reproduceerbaarheid van fluorescentiemetingen, wat een betrouwbare vergelijking ondersteunt tussen met medicijnen behandelde en onbehandelde macrofaagpopulaties voor cross-functionele besluitvorming.

Welke statistische analyse is vereist om de effecten van geneesmiddelen op fagocytose te valideren?

Gegevens over de fluorescentie-intensiteit moeten worden geanalyseerd met behulp van passende statistische tests om significante verschillen tussen behandelde en onbehandelde groepen vast te stellen, waarmee de effectiviteit van geneesmiddelen bij het verbeteren van de fagocytische functie van macrofagen wordt bevestigd.

The Effect of Aspirin and Ibuprofen on the Phagocytic Ability of Macrophages

JoVE Encyclopedia of Experiments

Immunologie

0 weergaven • 3:06 min • December 23rd, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Begin with a fungal suspension of Cryptococcus. Add a solution of fungal-derived bioparticles conjugated with a pH-sensitive fluorescent dye to stain the Cryptococcus cells.

Wash to remove the unbound dye. Transfer the stained fungal suspension into a multi-well plate with adhered macrophages — or phagocytic immune cells.

Introduce the minimum inhibitory concentration of a drug, such as aspirin or ibuprofen, and incubate to facilitate the drug uptake.

The drug molecules interact with cyclooxygenase-2 — a prostaglandin-synthesizing enzyme, inhibiting its activity.

This prevents the conversion of arachidonic acid to prostaglandin, preserving intracellular cAMP levels and enhancing the macrophage phagocytic ability, facilitating the internalization of fungi.

The fungi-containing phagosome fuses with the lysosome — an acidic organelle, forming a phagolysosome with an acidic pH and allowing the dye to fluoresce.

Drug-treated cells exhibit a higher fluorescence than untreated cells, suggesting the drug’s efficacy in enhancing the phagocytic ability of macrophages.

Begin with a culture of the murine macrophage cell line, grown in complete RPMI 1640 medium, as described in the text protocol.

Additionally, prepare a culture of Cryptococcus neoformans resuspended in PBS to the desired concentration, as mentioned in the text protocol.

To stain the cryptococcal cells with the phagocytosis stain, dispense 999 microliters of the cells into a microcentrifuge tube. Add 1 microliter of the stain to the tube. Incubate the cells for 1 hour at room temperature, in the dark, with slow agitation.

After incubation, wash the cells by first centrifugation. Then, discard the supernatant. Resuspend the cells with PBS and repeat the washing step two additional times.

Dispense 100 microliters of the Cryptococcus neoformans cell suspension into the wells of the 96-well plate containing the cultured macrophages.

Gerelateerde video's

0 Bekeken

Laatst bijgewerkt: 22 augustus 2026

The Effect of Aspirin and Ibuprofen on the Phagocytic Ability of Macrophages

Overzicht

Belangrijkste studiecomponenten

Wetenschappelijk vakgebied

Achtergrond

Doel van de studie

Gebruikte methoden

Belangrijkste Resultaten

Conclusies

Veelgestelde vragen

Industriële Relevantie voor Directie

Strategische Toepassingen in Biofarmaceutische R&D

Vroege ontdekking & targetvalidatie

Screening & Assayontwikkeling

Translationeel & Preklinisch Onderzoek

Integratie van Pipeline & Workflow

Operationele & Bedrijfsimpact

Overwegingen bij de implementatie

Biopharma Veelgestelde Vragen

Beoordeling van antilichaam gebaseerde Drugs gevolgen voor lymfkliertest beenmerg en peritoneale Macrophage activering

Aanvullend gebruik van microscopische technieken en fluorescentie lezen in het bestuderen van interacties Cryptococcus-amoeba

Alveolaire macrofaag fagocytose en bacteriën mijnen in muizen

An Assay to Study the Regulation of Macrophage Phagocytosis by Mesenchymal Stem Cells

Evaluatie anti-schimmel activiteit van geïsoleerde alveolaire macrofagen door confocale microscopie

High Throughput Fluorometrische Techniek voor Evaluatie van Macrophage Fagocytose en actine polymerisatie

Het beoordelen van het netvlies Microgliale fagocytosefunctietesten

Synthese en karakterisering van een Aspirine-fumaraat Prodrug dat NFKB Activity and Breast Kanker stamcellen Remt

Experimentele analyse van apoptotic Thymocyte overspoeling door macrofagen

Meten van fagocytose van Aspergillus fumigatus conidia door menselijke leukocyten met behulp van Flowcytometrie