Waarom is het testen van de nulhypothese belangrijk voor assays van de integriteit van de bloed-hersenbarrière?

Het testen van de nulhypothese in assays voor de integriteit van de bloed-hersenbarrière (BBB) waarborgt dat waargenomen verschillen in barrièrefunctie statistisch significant zijn, wat bijdraagt aan een robuuste validatie van targets en het aantal fout-positieven in de vroege fase van CNS-ontdekking vermindert.

Hoe past de isolatie van onafhankelijke variabelen in de workflow van de triple cell co-cultuur?

Het isoleren van variabelen, zoals celtype of mediumsamenstelling binnen het triple co-cultuursysteem, stelt teams in staat om functionele veranderingen toe te schrijven aan specifieke componenten, waardoor de mechanistische bijdragen aan de eigenschappen van de BBB worden verduidelijkt.

Wat maken kwantitatieve permeabiliteitsmetingen mogelijk in dit BBB-model?

Kwantitatieve permeabiliteitsmetingen leveren bruikbare gegevens over het transport van verbindingen door de BBB, waardoor een vergelijkende beoordeling van kandidaat-geneesmiddelen mogelijk wordt en datagestuurde beslissingen over verdere ontwikkeling worden ondersteund.

Waarom zijn replicatie-eisen cruciaal voor cross-functionele BBB-studies?

Replicatie zorgt ervoor dat de resultaten van BBB-modellen reproduceerbaar zijn tussen teams en experimenten, wat betrouwbare gegevensdeling en gezamenlijke besluitvorming in multidisciplinaire CNS-projecten faciliteert.

Welke statistische analysevaardigheden zijn vereist voor de implementatie van het BBB-model?

Een robuuste statistische analyse is nodig om de integriteit van de barrière te valideren, de permeabiliteit te kwantificeren en experimentele condities te vergelijken, zodat gewaarborgd wordt dat het model reproduceerbare en interpreteerbare resultaten oplevert voor R&D-teams.

Developing a Triple Cell Culture Model of the Human Blood-Brain Barrier

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neurowetenschap

0 weergaven • 3:44 min • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Start by adding pericytes to the underside of the well-insert.

Cover the well-insert with a culture plate and incubate.

Pericytes attach to the membrane of the well-insert, forming a single-cell layer or a monolayer.

Take another culture plate.

Add human astrocytes to the well in a suitable medium. Then, incubate the plate.

Astrocytes attach to the bottom of the well and form a monolayer.

Discard the medium and add fresh astrocyte and pericyte medium.

Now, take the culture plate containing the well-insert with the pericyte layer.

Invert the plate and transfer the well-insert to the well containing the astrocyte layer.

Add the human brain endothelial cells to the upper side of the well-insert and incubate.

The endothelial cells attach to the well insert, forming a triple cell culture system that resembles the blood-brain barrier, a crucial interface separating the bloodstream and the brain.

Begin by cultivating HBVP in T75 culture flasks with an activated surface for cell adhesion within a 5% carbon dioxide incubator at 37 degrees Celsius until confluent. Once confluence is reached, aspirate the old parasite medium and wash the cells with 5 milliliters of warm Dulbecco's PBS. Aspirate the Dulbecco's PBS and detach the cells from the flask, using a combination of 4 milliliters of warm trypsin-EDTA solution and 1 milliliter of Dulbecco's PBS.

Incubate the flask for 5 minutes at 37 degrees Celsius in a carbon dioxide incubator. View under a microscope to confirm whether the cells are detached from the flask. Add 5 milliliters of warm parasite medium, containing 2% FBS to the flask, and transfer the detached cells to a 50-milliliter centrifuge tube. Centrifuge the cell suspension for three minutes at 200 g, allowing the cells to form a pellet in the bottom of the tube.

Aspirate the medium from the tube, ensuring the cell pellet remains intact. Resuspend the cell pellet in parasite medium. Calculate the amount of medium, depending on the confluence of the cells and the number of well inserts needed. Take 10 microliters of the resuspended cells. Place them into a cell-counting slide, and count the number of cells.

Determine the cell density and seed 300,000 cells per insert in 1 milliliter of parasite medium onto the luminal side of the well inserts. Cultivate primary human astrocytes using the astrocyte medium, containing 2% FBS, as described in the text manuscript. Determine the cell density and seed 300,000 cells per well onto the bottom of the tissue culture 6-well plates. Cover the plate to prevent evaporation, and incubate overnight.

Gerelateerde video's

0 Bekeken

Laatst bijgewerkt: 15 augustus 2026

Developing a Triple Cell Culture Model of the Human Blood-Brain Barrier

Overzicht

Belangrijkste onderdelen van de studie

Wetenschappelijk gebied

Achtergrond

Doel van de studie

Gebruikte methoden

Belangrijkste resultaten

Conclusies

Veelgestelde vragen

Industriële Relevantie voor Directie

Strategische Toepassingen in Biofarmaceutische R&D

Vroege Ontdekking & Targetvalidatie

Screening & assayontwikkeling

Translationeel & Preklinisch Onderzoek

Integratie van Pipeline & Workflow

Operationele & Bedrijfsimpact

Overwegingen voor Implementatie

Biopharma Veelgestelde Vragen

Genereren van een geïmmortaliseerde Murine Brain microvasculaire endotheliale cellijn als In Vitro Blood Brain Barrier Model

Oprichting van een In Vitro Model van Rat bloed-hersenbarrière (BBB): een focus op BBB Ondoordringbaarheid en receptor-gemedieerd transport

Zuurstof-Glucose beroving en reoxygenatie als een In Vitro Ischemie-reperfusie letsel model voor de studie bloed-hersenbarrière Dysfunction

Verbeterde werkwijze voor de bereiding van een Human-Cell gebaseerde, Contact Model van de bloed-hersenbarrière

Verbeterde methode voor de vaststelling van een In Vitro bloed - hersenbarrière Model gebaseerd op varkens Endothelial hersencellen

Een Model Interface menselijke Blood-Brain barrière kruisingen door ziekteverwekkers of geneesmiddelen en hun interacties met de hersenen bestuderen

Analyseren van de permeability van de bloed-hersenbarrière door microbiële traversal door middel van microvasculaire endotheliale cellen

Generatie van een menselijke iPSC-gebaseerde bloed-hersenbarrière chip

Een drievoudig kweekcelsysteem dat de menselijke bloed-hersenbarrière modelleert

Een drievoudig primair celkweekmodel van de menselijke bloed-hersenbarrière voor het bestuderen van ischemische beroerte in vitro