A Method for Generating Oligodendrocyte-Conditioned Medium
JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurowetenschap
0 weergaven • 2:01 min • July 8th, 2025
Take a polymer-coated petri dish.
Add oligodendrocyte lineage, or OL cells to a suitable culture medium and incubate.
The positive charge on the polymer coating attracts the negatively charged cell membrane, enhancing cell attachment to the dish. The growth factors and nutrients in the medium facilitate cell expansion.
Replace the medium with a nutrient-poor medium and incubate.
Low nutrient levels induce mild stress in the cells, causing them to secrete proteins, lipids, and other molecules, including growth factors and cytokines, into the extracellular space.
Collect the medium in a tube.
Filter sterilize the medium to remove cellular debris and insoluble components.
The filtrate containing the soluble bioactive molecules secreted by OL cells is called oligodendrocyte-conditioned medium or OCM.
Store the OCM at lower temperatures until further use to prevent the degradation of proteins and other molecules, thereby preserving the effectiveness of the OCM.
Plate two or three pre-coated 100-millimeter Petri dishes with 10 milliliters of the cell suspension.
Incubate in a humidified incubator at 37 degrees Celsius under 5% carbon dioxide.
In a laminar flow hood under sterile conditions, renew the culture medium with 10 milliliters of warm Mbb 27 low medium.
Incubate for 2 days in a humidified incubator at 37 degrees Celsius under 5% carbon dioxide.
To harvest the OCM, collect the supernatant containing oligodendrocyte-secreted factors. Filter-sterilize the OCM using a 0.22-micron filter.
Overzicht
In dit artikel wordt een methode beschreven voor het isoleren van oligodendrocyte-geconditioneerd medium (OCM) uit cellen van de oligodendrocytenlijn. Dit proces verbetert de celadhesie en stimuleert de secretie van bioactieve moleculen die essentieel zijn voor diverse onderzoeksapplicaties.
Belangrijkste Componenten van de Studie
Wetenschappelijk vakgebied
- Neurowetenschappen
- Celbiologie
- Neurobiologie
Achtergrond
- Oligodendrocyten spelen een cruciale rol in het centrale zenuwstelsel.
- OCM bevat factoren die de neuronale gezondheid en functie kunnen beïnvloeden.
- Inzicht in de secretie van deze factoren is belangrijk voor neurobiologisch onderzoek.
- De beschreven methode maakt het mogelijk om deze factoren op een gecontroleerde manier te verzamelen.
Doel van het onderzoek
- Om de bioactieve moleculen die door cellen uit de oligodendrocytenlijn worden uitgescheiden, te isoleren en te karakteriseren.
- Om een betrouwbare methode te bieden voor het verkrijgen van OCM voor verder onderzoek.
- Om het begrip van de functie van oligodendrocyten in het zenuwstelsel te vergroten.
Gebruikte methoden
- Gebruik van polymeergecoate petrischalen om de celadhesie te verbeteren.
- Incubatie van OL-cellen in een geschikt kweekmedium.
- Inductie van milde stress via een nutriëntenarm medium om secretie te stimuleren.
- Filtratie van het medium om steriel OCM te verkrijgen.
Belangrijkste resultaten
- Succesvolle verzameling van OCM met oplosbare bioactieve moleculen.
- Demonstratie van de effectiviteit van de methode bij het verbeteren van celhechting en secretie.
- OCM is effectief geconserveerd voor toekomstig gebruik.
- Resultaten wijzen op de potentiële toepassingen van OCM in neurobiologische studies.
Conclusies
- De methode biedt een betrouwbare manier om OCM te verkrijgen uit OL-cellen.
- OCM kan worden gebruikt om de effecten van door oligodendrocyten uitgescheiden factoren te bestuderen.
- Dit onderzoek draagt bij aan het begrip van de biologie van oligodendrocyten en de implicaties hiervan voor de neurowetenschappen.
Veelgestelde vragen
Industriële Relevantie voor Directie
Oligodendrocyten-geconditioneerd medium (OCM) biedt een gedefinieerde bron van gliale bioactieve moleculen voor het bestuderen van neuron-glia-interacties in modellen voor neurodegeneratieve ziekten. Deze methode maakt de reproduceerbare generatie mogelijk van een complex secretoom dat kan worden gebruikt om de interactie met therapeutische targets en pathway-modulatie in de vroege ontdekkingsfase te beoordelen. OCM ondersteunt mechanistisch de-risking door de functie van oligodendrocyten te koppelen aan neuronale fenotypes in een schaalbaar in vitro-formaat.
Strategische Toepassingen in Biofarmaceutische R&D
Vroege Ontdekking & Targetvalidatie
- Wetenschappelijke waarde: Maakt onderzoek mogelijk naar door oligodendrocyten uitgescheiden factoren die de neuronale overleving, differentiatie en synaptische functie beïnvloeden.
- Operationele waarde: Biedt een gestandaardiseerd, uit cellen afgeleid geconditioneerd medium voor consistente assays voor de modulatie van doelpaden.
Screening & Assay-ontwikkeling
- Wetenschappelijke waarde: Bereidt een bioactief medium voor co-cultuursystemen voor om verbindingen te screenen die oligodendrocyte-afhankelijke neuronale fenotypes herstellen of verergeren.
- Operationele waarde: Ondersteunt de standaardisatie van assays door middel van filtergesteriliseerd, bewaarbaar OCM met een gedefinieerde bioactieve inhoud.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Wetenschappelijke waarde: Faciliteert ziekte-relevante modellering van gliale-neuronale interacties bij aandoeningen zoals multiple sclerosis en leukodystrofieën.
- Operationele waarde: Maakt longitudinale beoordeling mogelijk van doelwit-gemedieerde effecten op de neuronale connectiviteit en elektrofysiologie.
Pipeline- & workflowintegratie
De generatie van OCM past binnen het continuüm van ontdekking, van targetvalidatie via fenotypische screening tot preklinische bevestiging van het mechanisme, in het bijzonder bij therapeutische strategieën voor glia-modulatie.
- Ontdekkingsbiologie: Ondersteunt hypothesetoetsing van gliale signaleringspaden bij neuronale gezondheid en ziekte.
- Screening: Levert een reproduceerbare, bioactieve matrix voor de screening van verbindingen in neuronen-glia co-culture formaten.
- Analytiek: Maakt kwantitatieve read-outs mogelijk, zoals neurietenuitgroei, expressie van synaptische markers en calciumflux als afhankelijke variabelen.
- Translationeel onderzoek: Verbindt oligodendrocytefunctie met preklinische resultaten via profilering van gesecreteerde factoren en padanalyse.
- Bedrijfbrede herbruikbaarheid: Vestigt een hernieuwbaar, schaalbaar platform voor de productie van gliaal geconditioneerd medium voor meerdere projecten.
Operationele & Bedrijfsimpact
- Wetenschappelijke waarde: Verhoogt het voorspellende vertrouwen door fysiologisch relevante gliale-neuronale interacties te modelleren.
- Operationele waarde: Waarborgt reproduceerbaarheid via gestandaardiseerde stress-geïnduceerde secretie en steriele filtratie.
- Strategische waarde: Verbetert go/no-go-beslissingen door het risico te verminderen voor targets die afhankelijk zijn van gliale ondersteuningsmechanismen.
- Impact op portfolio: Maakt risico-gecorrigeerde prioritering mogelijk van therapeutica gericht op oligodendrocytenfunctie of neuron-glia-signalering.
Overwegingen voor Implementatie
- Vereist expertise in gliale celkweek en steriele techniek.
- Is afhankelijk van polymeergecoate oppervlakken en serumarme media voor stressinductie.
- Vereist toegang tot 0,22-micron filtratie en koude opslag voor de stabiliteit van OCM.
- Batch-to-batch variabiliteit in secretieprofielen over oligodendrocyte-lijnpreparaten moet in rekening worden gebracht.
- Beperkt door het transiënte karakter van stress-geïnduceerde secretie en donor-/bronvariabiliteit in primaire cellen.
Biopharma Veelgestelde Vragen
A Novel Cultuur Model for Human Pluripotent Stem Cell Voortplanting op gelatine in Placenta-geconditioneerde Media
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Het verzamelen van serum en Feeder-vrij muis embryonale stamcellen geconditioneerd medium voor een Cell-free Approach
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Een cel-gebaseerde Assay te onderzoeken niet-spier Myosin II Contractility via de gevouwen-gastrulatie signalering traject in Drosophila S2R + cellen
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Afleiding van Verrijkt oligodendrocyt Culturen en oligodendrocyt / Neuron Myelinating co-culturen van Post-natale Murine Tissues
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Progenitor afgeleide oligodendrocyt Cultuur System van menselijke foetale hersenen
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Obtaining a Mixed Oligodendrocyte and Astrocyte Culture From Adult Mouse Neural Stem Cells
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Differentiating Human Embryonic Stem Cells into Oligodendrocytes
Gerelateerde video's
0 Bekeken
A Co-culture Method to Model Neuron-Oligodendrocyte Interactions
Gerelateerde video's
0 Bekeken
An In Vitro Transduction-Induced Myelination Assay for Oligodendrocyte Precursor Cells
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Isolating and Culturing Oligodendrocyte Precursor Cells from Mouse Pup Brain Cortex
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Laatst bijgewerkt: 22 augustus 2026