Isolating Immune Cells from Mouse Choroid Plexuses
JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurowetenschap
0 weergaven • 4:13 min • July 8th, 2025
Position a mouse's brain dorsal side up.
Under a microscope, separate the cerebral hemispheres. Pull away the cortex and then the hippocampus to expose the lateral ventricles and the third ventricle.
Collect two lateral choroid plexuses. These are immune-cell-rich brain structures that line the lateral ventricles like a long veil.
Collect the third ventricle choroid plexus, which is a short structure with a granular surface.
Detach the cerebellum to expose the fourth ventricle.
Collect the fourth ventricle choroid plexus, which is a long globular structure with a granular surface.
Place all the choroid plexuses in a tube with buffered saline to maintain tissue integrity.
Add a digestive enzyme solution and incubate with agitation.
The enzyme breaks down the extracellular matrix and loosens the cells.
Add a suitable buffer to inactivate the enzyme.
Centrifuge to settle the cells. Discard the supernatant and resuspend the cells in a fresh buffer for further analysis.
To begin, position the brain dissected from a C57 black 6 mouse dorsal side up in a Petri dish, and place the dish below the objectives of the binocular loupes. While maintaining the brain in place using forceps, insert the two ends of another pair of forceps down through the midline between the hemispheres.
Using the forceps, pull the cortex with the callosum and hippocampus away from the septum, exposing the lateral ventricle and a part of the third ventricle. Identify the lateral choroid plexus as a long veil lining the lateral ventricle and flaring at both ends. Then, using two ends of thin forceps, collect the lateral choroid plexus. Be careful to collect the triangular posterior part hidden by the posterior fold of the hippocampus.
Next, pull the cortex with the corpus callosum and hippocampus of the contralateral hemisphere, away from the septum to expose the entire third ventricle and the opposite lateral ventricle. Using fine forceps, collect the third choroid plexus identified as a short structure with a granular surface aspect. Then, collect the other lateral choroid plexus.
Next, insert the two ends of the forceps down between the cerebellum and midbrain and detach the cerebellum from the pons and medulla to expose the fourth ventricle. Then, identify the fourth choroid plexus as a long, globular structure with a granular surface aspect that lines the fourth ventricle from the lateral right end to the left end between the cerebellum and medulla. Using fine forceps, collect the fourth choroid plexus.
After incubating all collected choroid plexuses with collagenase IV, gently pipette up and down around 10 times to finalize the dissociation. Then, fill the tube to 1.5 milliliters with MACS buffer to stop the collagenase IV activity. Next, centrifuge the cells and discard the supernatant before washing the cells with 1.5 milliliters of MACS buffer. After adding the appropriate compensation beads and antibody solutions, incubate the samples on ice for 30 to 45 minutes, protecting them from light exposure. Then, fill the tubes with 1.5 milliliters of MACS buffer.
Overzicht
Dit artikel beschrijft een methode voor het isoleren van plexus choroideus-weefsels uit muizenhersenen, met specifieke aandacht voor de laterale ventrikels en het vierde ventrikel. De procedure omvat dissectie, enzymatische behandeling en resuspensie van cellen voor verdere analyse.
Belangrijkste studiecomponenten
Wetenschapsgebied
- Neurowetenschappen
- Celbiologie
- Technieken voor weefselisolatie
Achtergrond
- De plexus choroideus is een cruciale structuur in de hersenen die hersenvocht produceert.
- Het speelt een rol bij de immuunrespons en het handhaven van de homeostase in de hersenen.
- Inzicht in de cellulaire samenstelling ervan is essentieel voor neurowetenschappelijk onderzoek.
- Isolatietechnieken zijn noodzakelijk voor het in vitro bestuderen van de plexus choroideus.
Doel van de studie
- Het bieden van een gedetailleerd protocol voor het isoleren van plexus choroideus-weefsels uit muizenhersenen.
- Het faciliteren van verdere analyse van de cellulaire componenten van de plexus choroideus.
- Het verbeteren van het begrip van de rol van de plexus choroideus bij de hersenfunctie.
Gebruikte methoden
- Dissectie van de muizenhersenen om de laterale ventrikels en het vierde ventrikel bloot te leggen.
- Verzamelen van plexus choroideus-weefsels met behulp van fijne pincetten.
- Incubatie met collagenase IV om cellen te dissociëren.
- Centrifugatie en resuspensie van cellen voor analyse.
Belangrijkste resultaten
- Succesvolle isolatie van weefsels uit de laterale en vierde plexus choroidea.
- Effectieve dissociatie van cellen voor daaropvolgende analyse.
- Behoud van de integriteit van de plexus choroidea tijdens de procedure.
- Het protocol maakt verdere immunologische en cellulaire studies mogelijk.
Conclusies
- De beschreven methode biedt een betrouwbare aanpak voor het isoleren van weefsels van de plexus choroidea.
- Dit protocol kan worden gebruikt voor diverse vervolganalyses binnen de neurowetenschappen.
- Verdere studies kunnen ons begrip van de rol van de plexus choroidea bij de gezondheid van de hersenen vergroten.
Veelgestelde vragen
Industriële Relevantie voor Leidinggevenden
Het isoleren van immuuncellen uit de plexus choroideus van muizen maakt een nauwkeurige analyse mogelijk van neuro-immuuninteracties die relevant zijn voor ziekte-modellen van het CZS. Deze mogelijkheid ondersteunt de vroege validatie van targets en het mechanistisch verminderen van risico's bij de ontdekking van geneesmiddelen voor neuro-inflammatoire en neurodegeneratieve aandoeningen. De methode vormt de basis voor reproduceerbare, kwantitatieve analyse van immuuncellen in ziekterelevante hersencompartimenten.
Strategische toepassingen in biofarmaceutisch R&D
Vroege Ontdekking & Targetvalidatie
- Maakt directe beoordeling van immuuncelpopulaties in CNS-interfaces mogelijk.
- Ondersteunt mechanistische studies naar neuro-immune pathways die betrokken zijn bij hersenaandoeningen.
- Faciliteert functionele targetvalidatie in ziekterelevante weefselmicro-omgevingen.
- Biedt een platform voor hypothese-gestuurd onderzoek naar strategieën voor immuunmodulatie.
Screening & assayontwikkeling
- Genereert gevalideerde single-cell suspensies voor downstream immunofenotyperingsassays.
- Standaardiseert de weefselverwerking om reproduceerbaarheid tussen experimenten te waarborgen.
- Maakt kwantitatieve analyse van immuuncel-subsets mogelijk voor compound screening.
- Ondersteunt de ontwikkeling van robuuste, schaalbare immuuncelassays uit CNS-weefsels.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Lijnt de isolatie van immuuncellen uit met ziekterelevante CNS-modellen voor translationele studies.
- Maakt continuïteit mogelijk van ontdekking tot preklinische validatie van immuunmodulatie.
- Ondersteunt de risico-gecorrigeerde voortgang van neuro-immuuntargets op basis van in situ celdata.
- Biedt mechanistische inzichten om de ontwikkeling van biomarkers bij neuro-inflammatie te informeren.
Integratie van Pijplijn & Workflow
Dit protocol voor de isolatie van immuuncellen bevindt zich op het snijvlak van vroege ontdekking en preklinisch onderzoek, waardoor mechanistische studies en assay-ontwikkeling voor programma's gericht op het centrale zenuwstelsel mogelijk worden gemaakt.
- Discovery Biology: Ondersteunt hypothesetoetsing van de rollen van immuuncellen bij CNS-pathologie.
- Screening: Levert reproduceerbare celpreparaten voor kwantitatieve immunologische assays.
- Analytics: Maakt meting van de immuuncelsamenstelling en activatietoestanden mogelijk.
- Translationeel Onderzoek: Slaat een brug tussen ontdekkingsbevindingen en preklinische validatie in ziekterelevante systemen.
- Enterprise Reuse: Vestigt een gestandaardiseerde workflow voor de isolatie van CNS-immuuncellen over verschillende programma's heen.
Operationele & Bedrijfsimpact
- Wetenschappelijke waarde: Verhoogt het voorspellende vertrouwen bij de validatie van neuro-immune targets.
- Operationele waarde: Levert gestandaardiseerde, reproduceerbare celisolatie voor vergelijkbaarheid tussen verschillende studies.
- Strategische waarde: Vermindert mechanistische ambiguïteit en ondersteunt geïnformeerde go/no-go-beslissingen.
- Impact op portfolio: Maakt risico-gecorrigeerde prioritering van neuro-immune targets en pathways mogelijk.
Overwegingen bij de implementatie
- Vereist expertise in de dissectie van de muizenhersenen en de hantering van weefsel.
- Toegang tot microscopie, reagentia voor enzymatische digestie en infrastructuur voor flowcytometrie is noodzakelijk.
- Strenge standaardisatie tussen teams is vereist voor reproduceerbaarheid.
- Aanpassing voor verschillende muizenstammen of ziekte-modellen kan noodzakelijk zijn.
- De celopbrengst en levensvatbaarheid zijn afhankelijk van de nauwkeurige uitvoering van de dissectie- en digestiestappen.
Veelgestelde vragen over Biofarmacie
Karakterisering van Immune cellen in menselijke adipeus weefsel met behulp van Stroom Cytometry
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Isoleren En Immunokleuring Lymfocyten en dendritische cellen uit Patches Murine Peyer
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Isolatie van corticale Microglia met Conserven immunofenotype en functionaliteit van Muriene Pasgeborenen
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Isolatie van Primary Muriene Brain microvasculaire endotheelcellen
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Isolatie en cultuur van knaagdier Microglia ter bevordering van een dynamische vertakt morfologie in serumvrij Medium
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Snelle en specifieke Immunomagnetic isolatie van de primaire oligodendrocyten muis
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Isoleren van weefsels van het centrale zenuwstelsel en bijbehorende hersenvliezen voor de downstream-analyse van immuuncellen
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Isolatie en karakterisering van de immuuncellen van micro-ontleedde muischoroïde plexussen
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Microdissectie en Whole Mount Scanning Elektronenmicroscopie Visualisatie van muis choroïde plexus
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Gelijktijdige isolatie van de belangrijkste celtypen van het centrale zenuwstelsel van volwassen auto-immuun encefalomyelitis-muizen
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Laatst bijgewerkt: 29 augustus 2026