A. mesenterica samentrekking en ontspanning Studies met behulp van geautomatiseerde Wire Myography

Deze procedure gebruikt zoutgevoelige en zoutbestendige doll-ratten om de reactiviteit van mesenteriale weerstandsslagaders onder fenylephrine-spanning te vergelijken met extracellulair calcium. Dit wordt bereikt door eerst de mesenteriale boog van dieren te isoleren en de weerstandsslagadertakken te dissekeren.Volgende. De eerste van twee roestvrijstalen draden wordt door een kort segment van de gedissekteerde slagader geregen en het vat wordt in de grafiekkamer gemonteerd.

Vervolgens wordt de tweede roestvrijstalen draad door het vaatlumen parallel aan de eerste draad geregen. Vervolgens wordt het gemonteerde vat uitgerekt tot een genormaliseerde interne omtrek. De laatste stap van de procedure is het reactiveren van het vat door het uit te dagen met herhaalde toepassingen van fenylephrine en het te ontspannen met cumulatieve toepassingen van calcium.

Uiteindelijk tonen de resultaten veranderingen in spanning in het vat, die kunnen worden omgezet in een calciumresponscurve en gebruikt om EC 50-waarden te bepalen. Ter vergelijking. We hadden voor het eerst het idee om deze methode te gebruiken toen we ontdekten dat het nev-netwerk van ratten Masonary-batterijen een gpro-koperen calciumsens-receptor tot expressie bracht.

Dat kan op dezelfde manier worden bestudeerd als bittere AIC-receptoren, die worden geactiveerd door een agonist. Over het algemeen kunnen personen die nieuw zijn in deze methode worstelen omdat het endotheel en de gladde spierlagen klein zijn. Vaten zijn gemakkelijk te beschadigen.

Als dit gebeurt, kunnen de mechanische eigenschappen van deze vaten worden aangetast. Om te beginnen, bereidt u het werkgebied en chirurgische instrumenten voor. Plaats een verdoofd dier op zijn rug en veeg het buikgedeelte schoon met alcohol.

Na het uitvoeren van een midline laparotomie, gebruikt u een schaar om ongeveer 85 centimeter darm te verwijderen, inclusief de superieure mesenteriale slagader. Snijd het proximale uiteinde dicht bij de pylori en het distale uiteinde nabij de ileocecale junctie. Plaats het uitgesneden gedeelte in een gecoate petrischaal met fysiologische zoutoplossing of PSS op kamertemperatuur.

Speld het proximale uiteinde van de darm naar rechts vast en speldt vervolgens de rest van de darm in tegenwijzerzin. Vervolgens een segment van de mesenteriale slagader bevattende tak twee en drie en een stuk darm van het proximale uiteinde weg. Identificeer het V-vormige vertakkingspunt van de mesenteriale slagader en dissecteer het van de ader.

Gebruik pincetten om vet- en bindweefsel voorzichtig weg te trekken om direct contact met de slagader te voorkomen. Om het vat te monteren, snijd u twee vatsegmenten van ongeveer twee millimeter lang. De punt van een vier centimeter 40 micrometer roestvrijstalen draad kan worden gebruikt om het lumen van het vat te openen.

Gebruik vervolgens fijne pincetten om de draad in het lumen van elk vat in te brengen. Zorg ervoor dat het endotheel niet wordt beschadigd, vul de myo graft-kamer met PSS bij 37 graden Celsius. Gebruik pincetten om het geregen vaatsegment in de kamer over te brengen.

Vervolgens brengt u het uitgesneden proximale vaatsegment over naar de myo grafiekkamer en trekt u het uiteinde langs de draad om het in het vat te voeren. Vermijd het uitrekken van het vat. Bevestig het bijna uiteinde van de draad tegen de klok in onder de bijna bevestigingsschroef op de rechterhandige kaak verbonden met de micrometer.

Vang het vrije uiteinde van de draad met pincetten en bevestig het met de klok mee onder de verre bevestigingsschroef op de rechterhandige kaak, zorg ervoor dat het vaatsegment langs de draad zich in de opening tussen de kaken bevindt zonder contact te maken met de kaak zelf. Schroef de kaken uit elkaar. Lijn de tweede draad parallel uit met het vat en steek deze in het verre uiteinde van het lumen.

Voer de draad voorzichtig door het lumen van het vaatsegment in één beweging in, gebruik de reeds gemonteerde draad als gids. Houd de draad ongeveer een centimeter van het vat om het tijdens de manoeuvre niet uit te rekken en vermijd contact met het endotheel. Schroef de kaken samen en zorg ervoor dat de tweede montagedraad zich onder de eerste bevindt die op de rechterkant is bevestigd.

Bevestig het bijna uiteinde van de tweede draad met de klok mee onder de bijna bevestigingsschroef van de linkerhandige kaak verbonden met de transducer. Bevestig het verre uiteinde van de draad onder de bevestigingsschroef op de linkerhandige kaak en draai vast om de draad uit te rekken. Laat 30 minuten staan ​​voor equilibratie bij 37 graden Celsius nadat de montage is voltooid.

Na equilibratie wordt de motor gereset vanuit het montagemenu en wordt de normalisatieprocedure gestart, die het vat tot een genormaliseerde interne omtrek uitrekt. Om te beginnen opent u het normalisatiemenu en stelt u de doeltransmurale druk in op 13,3 kilopascal. Stel vervolgens de duur van elk van de normalisatie-stappen in op 60 seconden.

De IC één tot IC 100-verhouding moet gelijk zijn aan 0,9 en de IP-kalibratie moet worden ingesteld op twee sterdelta. Meet de lengte van het gemonteerde mesenteriale vat met behulp van de microscoopooglezingen wanneer de haarlijnen zich boven de verre en neuronen van het vaatsegment bevinden. Na normalisatie worden de vaten heractiveerd door een standaardstart uit te voeren die bestaat uit een reeks stimulaties en wastijdsperioden.

Vervang eerst het myo-kamerdeksel en start beluchting met 95% lucht en 5% kooldioxide. Vul de kamer met verse PSS die 100 micromolair ascorbinezuur bevat. Contracteer het vat met vijf micromolair venkel, rine of PE gedurende vijf minuten en was vier keer met PSS-buffer. Na de laatste wassing vult u de kamer opnieuw met PSS en wacht u drie minuten voordat u de kamer opnieuw vult met PSS en contracteert met PE. Zoals eerder weergegeven, is het vat nu klaar voor het experiment.

Meet de ontspanning van samengetrokken vaten door cumulatief toenemende concentraties calciumchloride toe te voegen. Deze tabel laat zien dat de basal