Detection of Orexin and Cannabinoid Receptor Co-localization in Diet-Induced Obese Zebrafish

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neurowetenschap

0 weergaven • 2:31 min • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

In the zebrafish brain, neurons express orexin and cannabinoid receptors that regulate metabolism.

In diet-induced obese, or DIO, zebrafish, these receptors increasingly co-localize to form heteromers, altering downstream signaling and impacting metabolic regulation.

Take cryosections of the brain tissue from both control and DIO zebrafish. Wash the sections with buffer to remove the embedding medium.

Treat with a permeabilization-blocking buffer to permeabilize the cellular membranes and mask non-specific binding sites. Wash to remove excess buffer.

Incubate with a primary antibody cocktail targeting the receptors. Wash to remove unbound antibodies.

Incubate with different fluorophore-labeled secondary antibodies that bind to the primary antibodies. Wash to remove unbound antibodies.

Add a fluorescent DNA-binding dye to label the nucleus. Then, apply a mounting medium and seal the sections with a coverslip.

Using a confocal microscope, detect the antibody fluorescence. Increased co-localization of the antibodies in DIO zebrafish compared to controls indicates higher receptor heteromerization.

First, rinse the sections three times for 5 minutes each with 0.1 molar phosphate buffer. Add the mix of primary antibodies to lutetium PBT, and incubate the sections overnight in a humid box at room temperature. The day after, rinse the sections three times for 5 minutes each with 0.1 molar phosphate buffer. Incubate sections at room temperature for 2 hours in an appropriate mix of secondary antibodies diluted in PBT.

Rinse the sections three times for 5 minutes each with 0.1 molar phosphate buffer. Dissolve 1.5 microliters of DAPI in 3 milliliters of phosphate buffer to prepare the nuclear dye DAPI. Counterstain the sections in the dye, then use mounting medium to coverslip the slides to stabilize the tissue and stain for long-term usage. Fluorescent samples can be stored in the dark at 4 degrees Celsius.

09:10

Smakelijke westerse stijl cafetaria dieet als een betrouwbare methode voor het modelleren van dieet-geïnduceerde obesitas bij knaagdieren

Gerelateerde video's

0 Bekeken

08:02

Visualisatie van oestrogeenreceptoren in colons van muizen met tnbs-geïnduceerde ziekte van Crohn met behulp van immunofluorescentie

Gerelateerde video's

0 Bekeken

06:28

Een chronisch intervaltraining met hoge intensiteit en door voeding geïnduceerd obesitasmodel om de inspanningsinspanning te maximaliseren en fysiologische veranderingen bij ratten te induceren

Gerelateerde video's

0 Bekeken

05:41

Metabole Profiel Analyse van zebravis embryo's

Gerelateerde video's

0 Bekeken

10:53

Microgavage van zebravis Larven

Gerelateerde video's

0 Bekeken

10:52

Een nieuwe methode van de Drug aan Multiple zebravis ( Danio rerio) En de kwantificering van Terugtrekking

Gerelateerde video's

0 Bekeken

12:19

Bouw van een betaalbare en makkelijk te bouwen zebravis Facility

Gerelateerde video's

0 Bekeken

08:35

High Throughput Danio Rerio Energie Uitgaven Assay

Gerelateerde video's

0 Bekeken

08:07

Gelijktijdige detectie van c-Fos Activering van mesolimbic en mesocorticale Dopamine Beloning Sites Na Naive suiker en vet inname bij ratten

Gerelateerde video's

0 Bekeken

08:39

Affiniteit Labeling Detectie van endogene receptoren van zebravis embryo's

Gerelateerde video's

0 Bekeken

Laatst bijgewerkt: 22 augustus 2026