Name: Live cell imaging van Bacillus subtilis En Streptococcus pneumoniae Met Automatisch Time-lapse Microscopie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Leer hoe je levende bacteriële cellen visualiseert tijdens groei en deling met geautomatiseerde fluorescentie-tijdsverloopmicroscopie. Deze methode maakt het bestuderen van eiwitdynamica en celgedrag in Bacillus subtilis en Streptococcus pneumoniae mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Werk in de groep van JWV wordt ondersteund door een EU-Marie Curie Fellowship reïntegratie, een Sysmo2 Grant (NWO-ALW/ERASysBio), een Horizon subsidie ​​(ZonMW) en door een VENI-beurs (NWO-ALW). De groep van OPK wordt ondersteund door een aantal STW subsidies (NWO), een SYSMO1 (IGdeJ) en SYSMO2 te verlenen, een ESF EUROCORES SynBio-subsidie ​​(SynMod) en door het Kluyver Centrum voor Genomics van industriële fermentatie en het Top Institute for Food and Nutrition.

<ol><li>Veening, J. W., Smits, W. K., Kuipers, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bistability%2C+epigenetics%2C+and+bet-hedging+in+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bistability, epigenetics, and bet-hedging in bacteria.</a> Annu. Rev Microbiol. 62, 193-193 (2008).</li>
<li>Dubnau, D., Losick, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bistability+in+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bistability in bacteria.</a> Mol Microbiol. 61, 564-564 (2006).</li>
<li>Locke, J. C., Elowitz, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+movies+to+analyse+gene+circuit+dynamics+in+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Using movies to analyse gene circuit dynamics in single cells.</a> Nat. Rev. Microbiol. 7 (5), 383-383 (2009).</li>
<li>Veening, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bet-hedging+and+epigenetic+inheritance+in+bacterial+cell+development%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Bet-hedging and epigenetic inheritance in bacterial cell development.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105 (11), 4393-4393 (2008).</li>
<li>de Jong, I. G., Veening, J. W., Kuipers, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterochronic+phosphorelay+gene+expression+as+a+source+of+heterogeneity+in+Bacillus+subtilis+spore+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Heterochronic phosphorelay gene expression as a source of heterogeneity in Bacillus subtilis spore formation.</a> J. Bacteriol. 192 (8), 2053-2053 (2010).</li>
<li>Veening, J. W., Murray, H., Errington, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mechanism+for+cell+cycle+regulation+of+sporulation+initiation+in+Bacillus+subtilis%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">A mechanism for cell cycle regulation of sporulation initiation in Bacillus subtilis.</a> Genes Dev. 23 (16), 1959-1959 (2009).</li>
<li>Eberhardt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+localization+of+choline-utilization+proteins+in+Streptococcus+pneumoniae+using+novel+fluorescent+reporter+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Cellular localization of choline-utilization proteins in Streptococcus pneumoniae using novel fluorescent reporter systems.</a> Mol Microbiol. 74 (2), 395-395 (2009).</li>
<li>Vasantha, N., Freese, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzyme+changes+during+Bacillus+subtilis+sporulation+caused+by+deprivation+of+guanine+nucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Enzyme changes during Bacillus subtilis sporulation caused by deprivation of guanine nucleotides.</a> J Bacteriol. 144 (3), 1119-1119 (1980).</li>
<li>Stewart, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+and+death+in+an+organism+that+reproduces+by+morphologically+symmetric+division%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS.+Biol%22%5BJournal%5D)">Aging and death in an organism that reproduces by morphologically symmetric division.</a> PLoS. Biol. 3, 45-45 (2005).</li>
<li>Rosenfeld, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+regulation+at+the+single-cell+level%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gene regulation at the single-cell level.</a> Science. 307 (5717), 1962-1962 (2005).</li>
<li>Guberman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PSICIC%3A+noise+and+asymmetry+in+bacterial+division+revealed+by+computational+image+analysis+at+sub-pixel+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS.+Comput.+Biol%22%5BJournal%5D)">PSICIC: noise and asymmetry in bacterial division revealed by computational image analysis at sub-pixel resolution.</a> PLoS. Comput. Biol. 4 (11), 1000233-1000233 (2008).</li>
<li>Montero, L. lopis P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+organization+of+the+flow+of+genetic+information+in+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Spatial organization of the flow of genetic information in bacteria.</a> Nature. 466, 77-77 (2010).</li>
<li>Avery, O. T., Macleod, C. M., McCarty, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+chemical+nature+of+the+substance+inducing+transformation+of+pneumococcal+types%3A+Induction+of+transformation+by+a+desoxyribonucleic+acid+fraction+isolated+from+pneumococcus+type+III%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Studies on the chemical nature of the substance inducing transformation of pneumococcal types: Induction of transformation by a desoxyribonucleic acid fraction isolated from pneumococcus type III.</a> J Exp. Med. 79, 137-137 (1944).</li>
<li>Hoskins, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+of+the+bacterium+Streptococcus+pneumoniae+strain+R6%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Genome of the bacterium Streptococcus pneumoniae strain R6.</a> J Bacteriol. 183, 5709-5709 (2001).</li>
<li>Martin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+recA+gene+of+Streptococcus+pneumoniae+is+part+of+a+competence-induced+operon+and+controls+lysogenic+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The recA gene of Streptococcus pneumoniae is part of a competence-induced operon and controls lysogenic induction.</a> Mol Microbiol. 15, 367-367 (1995).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

In tegenstelling tot veel andere enkele cel technieken kan de time-lapse fluorescentie microscopie hier beschreven methode worden gebruikt om de geschiedenis van een specifieke cel met verwijzing naar zijn voorouders, zijn gedrag, en verdeeldheid gebeurtenissen volgen. In combinatie met fluorescent gelabelde doelgroep promotors of eiwitten, kunnen specifieke ontwikkelingsstoornissen pad activering worden gevolgd in de tijd en eiwit lokalisatie, alsook eiwitten dynamiek kan worden gecontroleerd tijdens bacteriële ontwikkeling. Zoals hierboven is aangegeven, kunnen studies concentreren op verschillende bacteriesoorten worden uitgevoerd door het aanpassen van de groeiomstandigheden op basis van de eisen voor een specifieke bacterie. De enige beperkingen die we tegenkwamen zijn gerelateerd aan de groeiomstandigheden en de steekproefomvang. Als gevolg van een gesloten omgeving kan medium voorwaarden niet worden gewijzigd tijdens het experiment. Bovendien kan een maximum van vier stammen per experiment efficiënt worden gecontroleerd. Uitgaande van een paar kritische stappen, de single cell analyse hier beschreven methode kan eenvoudig worden toegepast met behulp van een geautomatiseerd microscoop. In het volgende zal een overzicht van deze kritische stappen worden gegeven. Gedetailleerde informatie is te vinden in de hoofdtekst Algemene voorbereiding:. Het is verstandig om de autofocus instellingen die nodig zijn voor een specifieke bacterie voorafgaand aan het experiment te controleren. Ook moet bij benadering optimale instellingen voor de visualisatie van fluorescentie bepaald worden op voorhand, indien mogelijk. Naar aanleiding een voorbereide time-lijn helpt om al het materiaal klaar voor gebruik in de tijd (pre-opwarming van de microscoop kamer, het programmeren van de microscoop instellingen, het voorbereiden van de glijbaan een uur voordat de cellen in de gewenste groeifase, zie figuur 1) . groei van B. subtilis in TLM en CDM: TLM en CDM zijn chemisch welbepaalde hongersnood media waarin B. subtilis groeit slechts langzaam. De time-periode waarin de cellen worden gekweekt in de media zou moeten worden verlengd afhankelijk van de specifieke stam. De langzame groei voorkomt dat cellen zich opstapelen op elkaar voorbereiding van de microscoop monster:. Luchtbellen tussen het gen frame, het glas glijbaan en het dekglas moeten worden voorkomen uitgebreide drogen van de agarose-based medium te voorkomen. Hetzelfde geldt voor de middellange / dekglas interface. Het is cruciaal om de cellen te laten droog genoeg, om te zwemmen en / of meerdere laag groei te voorkomen Time-lapse fluorescentie microscopie:. Pre-opwarming van de glijbaan en de milieu-kamer is cruciaal om grote autofocus problemen te voorkomen. De cellen moeten worden gekozen in het midden van een agar pad, omdat deze hebben de hoogste kans om in het veld en focus blijven tijdens het experiment (mits het monster was goed genoeg gedroogd). Een maximum van 10 plaatsen per experimenten werkt nog steeds naar behoren. Nadat u de eerste cel van belang alleen de software gebruiken om scherp te stellen (zie tekst voor details). Controleer of de cellen nog steeds in focus tijdens de eerste uren van het experiment in 30 min. intervallen Analyse:. Het is belangrijk om te controleren voorafgaand aan de uitgebreide analyse procedures of de achtergrond van het medium gelijkaardige waarden heeft in de fluorescentie kanalen. Kleine stofdeeltjes, middelgrote onderdelen, vuile lenzen of kleine groepjes agarose kan bijdragen aan lokaal verhoogde fluorescentie, waardoor de film moeilijk of onmogelijk te Trouble shooting analyseren:. Als de cellen groeien op de top van elkaar, dit zou kunnen aangeven dat er hetzij de dekglaasje was bevestigd te vroeg of dat het medium is niet geschikt voor de groei van microcolony monolagen. Als de cellen van belang continu vroegtijdig sterven, terwijl andere cellen op de dia verdelen gelukkig, wilt u misschien controleren of u de UV-filter in stelling te brengen. Het kan ook helpen om de blootstelling tijd of de lichtintensiteit tijdens lange experimenten te verlagen.

<table border="1"><tbody><tr><th> Naam van het serum </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th><th> Commentaar (optioneel) </th></tr><tr><td> Gene Frame </td><td> ABgene </td><td> AB-0578 </td><td> 1,7 x 2,8 cm </td></tr><tr><td> hoge resolutie laagsmeltende agarose </td><td> Sigma </td><td> A4718 </td><td></td></tr><tr><td> grote dekglas </td><td> verscheidene </td><td></td><td> 24 x 50 mm </td></tr><tr><td> indien gewenst, membraan kleurstof, bijv. FM 5-95 </td><td> Invitrogen </td><td> T23360 </td><td> andere membraan kleurstoffen zijn ook beschikbaar: <a href="http://probes.invitrogen.com/media/pis/mp34653.pdf">http://probes.invitrogen.com/media/pis/mp34653.pdf</a> </td></tr><tr><td> Time-lapse microscoop met milieu-kamer </td><td> verscheidene </td><td></td><td> Bekijk de details van onze apparaat in de betrokken rubrieken </td></tr></tbody></table>

live cell imaging van bacillus subtilis en streptococcus pneumoniae met automatisch time-lapse microscopie

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Gedurende de laatste paar jaar steeds meer wetenschappers ervan bewust dat de gemiddelde gegevens van microbiële populatie gebaseerde experimenten niet representatief zijn voor het gedrag, status of fenotype van enkele cellen. Als gevolg van dit nieuwe inzicht is het aantal enkele cel studies stijgt continu (voor recente beoordelingen te bekijken 1,2,3). Echter, veel van de interne toegepaste cel-technieken niet toe dat het toezicht op de ontwikkeling en het gedrag van een specifieke enkele cel in de tijd (bijv. flowcytometrie of standaard microscopie). Hier bieden wij een gedetailleerde beschrijving van een microscopie methode die wordt gebruikt in een aantal recente studies 4, 5, 6, 7, waardoor het volgen en opnemen (fluorescentie van) individuele bacteriële cellen van Bacillus subtilis en Streptococcus pneumoniae door groei en deling voor vele generaties. De resulterende films kunnen worden gebruikt om de fylogenetische lijn bomen construeren door traceren van de geschiedenis van een enkele cel in een populatie die is ontstaan ​​uit een gemeenschappelijke voorouder. Deze time-lapse fluorescentie microscopie methode kan niet alleen worden gebruikt om de groei, deling en differentiatie van individuele cellen te onderzoeken, maar ook om het effect van cel geschiedenis en afkomst analyseert op specifieke cellulaire gedrag. Bovendien is time-lapse microscopie bij uitstek geschikt om genexpressie dynamiek en eiwit lokalisatie te onderzoeken tijdens de bacteriële cel-cyclus. De methode wordt uitgelegd hoe u de bacteriële cellen te bereiden en de bouw van de microscoop dia naar de uitgroei van enkele cellen in staat stellen in een microcolony. Kortom, enkele cellen gespot op een semi-vaste ondergrond, bestaande uit de groei medium aangevuld met agarose waarop ze groeien en delen onder een fluorescentie microscoop in een temperatuur gecontroleerde klimaatkamer. Beelden worden vastgelegd met specifieke intervallen en worden later geanalyseerd met behulp van de open source software ImageJ.

Dit protocol biedt een stap-voor-stap procedure te controleren enkele cel gedrag van verschillende bacteriën in de tijd met behulp van geautomatiseerde fluorescentie time-lapse microscopie. Verder hebben we geven richtlijnen hoe de microscopie beelden te analyseren.

Live cell imaging van Bacillus subtilis En Streptococcus pneumoniae Met Automatisch Time-lapse Microscopie

Gedurende de afgelopen jaren zijn wetenschappers zich er steeds meer van bewust geworden dat gemiddelde gegevens verkregen uit experimenten op basis van microbiële populaties niet...

Het algemene doel van deze procedure is het in beeld brengen van levende cellen tijdens groei en deling met behulp van fluorescentiemicroscopie, zodat het effect van celgeschiedenis en afstamming op de cellulaire ontwikkeling van bacteriën kan worden bestudeerd. Dit wordt bereikt door de cellen eerst over te brengen van een vloeibaar medium met relatief hoge nutriëntenconcentraties naar een vloeibaar uithongeringsmedium. Vervolgens wordt een microscopisch objectglas gebruikt waarop de bacteriële cellen uitgroeien tot een microkolonie.De monolaag wordt klaargemaakt. Vervolgens wordt een time-lapse fluorescentiemicroscopie-film opgenomen. Tot slot wordt de film verwerkt en worden de gegevens geanalyseerd.Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die de ontwikkeling van een enkele bacteriële cel laten zien via time-lapse fluorescentiemicroscopie. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande technieken, zoals flowcytometrie en standaardmicroscopie, is dat het mogelijk maakt om de proteïnedynamiek, het cellulaire gedrag en de ontwikkeling van individuele cellen in de tijd te monitoren; de procedure zal worden gedemonstreerd door een PhD-student uit mijn lab. Om B. subtilis voor te bereiden, inoculeert u cellen uit stocks van -80 °C in 10 milliliter time-lapse microscopie- of TLM-medium in steriele schudkolven, indien nodig aangevuld met antibiotica. Kweek de cellen gedurende de nacht bij 30 °C en 225 RPM in een steriele schudkolf. De volgende ochtend zaait u de cellen 1:10 in voorverwarmd, chemisch gedefinieerd medium of CDM zonder antibiotica. Kweek de B. subtilis cellen tot de mid-exponentiële fase, wat ongeveer vier uur duurt. Meet de absorbantie van de cultuur bij 600 nanometer en verdun de cellen tot een geschatte A600 van 0,035.Gebruik CDM. Deze OD zorgt ervoor dat individuele cellen met een geschikte onderlinge afstand op het microscoopglas worden gespot voor time-lapse microscopie. Eén uur voordat de cellen de mid-exponentiële groeifase bereiken.Bereid de microscoopdia voor door twee glazen objectglazen te reinigen met 70% ethanol en water. Verwijder een van de plastic kappen van een gene frame, waarbij u er zorgvuldig op let dat de plastic kap aan de andere zijde van het frame niet losraakt. Bevestig het gene frame in het midden van een van de glazen objectglazen door het eerst aan één zijde vast te plakken en vervolgens de rest met een vingernagel op zijn plaats te geleiden.Gebruik een magnetron om 150 milligram high resolution low melting agarose op te lossen in 10 milliliter CDM; zorg ervoor dat de agarose volledig is opgelost om achtergrondfluorescentie te voorkomen. Pipetteer 500 microliter van de warme agarose CDM in het midden van het genframe, waarbij u er zeker van bent dat het gehele gebied, inclusief de randen, volledig is bedekt.Werk snel om overmatige uitdroging van de agar te voorkomen. Plaats de tweede glazen plaat op het met Agar CDM gevulde genframe en probeer luchtbellen te vermijden. Plaats de sandwich in een horizontale positie bij vier graden Celsius gedurende 45 minuten om de agar voldoende te laten stollen.Zodra de agar zorgvuldig is gestold, schuift u het bovenste glas eraf. Gebruik een scheermesje om agarstrips van ongeveer vijf millimeter breed uit te snijden waarop de bacteriën zullen groeien. Per objectglas kunnen maximaal drie strips worden gebruikt, gescheiden door ruimtes van ongeveer vier millimeter aan weerszijden.Deze ruimtes zorgen voor lucht, wat essentieel is voor de groei van Blu. Verwijder voorzichtig de tweede en laatste plastic afdekking van het genframe om de plakzijde bloot te leggen. Breng enkelcellen in ongeveer 2,5 µL vloeistof aan op het vaste medium, beginnend aan de bovenkant van het agros-kussentje zonder dit aan te raken.Laat het medium met de pipetpunt gelijkmatig verspreiden door het preparaatglas voorzichtig te kantelen. Plaats een schoon microscoopdekglas op het genframe om het dekglas volledig te bevestigen. Druk met een vingernagel licht aan zodra de cellen zijn aangebracht.Het is cruciaal om lang genoeg te wachten tot de vloeistof is opgedroogd, zodat er geen zwevende cellen en groei in meerdere lagen ontstaan. Als de cellen echter te lang drogen, zullen ze problemen hebben bij het uitgroeien tot een micro cholon-monolaag. De tijd die nodig is om de coupes te drogen, is daarom afhankelijk van het experiment en kan niet precies worden vastgesteld.Bijgevolg is het uiteraard noodzakelijk om hier een gevoel voor te krijgen. Om autofocusproblemen tijdens de eerste uren van het time-lapse experiment te voorkomen, dient het objectglas gedurende één uur bij 30 °C te worden voorverwarmd ter voorbereiding op de time-lapse microscopie. Voorwarm de environmental chamber gedurende ten minste twee uur. Selecteer vóór de start van het experiment de juiste objectief, filters en dichroïsche spiegel op basis van uw experimentele opstelling.Plaats bij langdurige experimenten een UV-filter tussen de lichtbron en het monster. Blok bovendien, indien mogelijk, een deel van het excitatielicht met neutrale dichtheidsfilters om de blootstelling te minimaliseren. Programmeer het experiment volgens de specifieke experimentele opstelling.Het is raadzaam om voorafgaand aan het eigenlijke experiment de benodigde hoeveelheid licht voor specifieke constructen, evenals de autofocusinstellingen voor andere time-lapse microscopen of bacteriën, te bepalen. Kortere belichtingstijden en lagere niveaus van excitatielicht zullen bleking en fototoxiciteit minimaliseren. Gebruik scopisch licht voor de autofocusfunctie. Plaats ten slotte de voorbereide slide in de voorverwarmde environmental chamber van de microscoop en monitor de uitgroei van individuele cellen tot een monocuulaag van microkolonies bij 30 °C.Een succesvol time-lapse fluorescentie-experiment resulteert in een monoclaag van microkolonies die volledig binnen het gezichtsveld is gelegen. Aan het einde van het experiment in deze video is het helderveld links te zien en de fluorescentie rechts.Hier is een voorbeeld van een B Subtles microkolonie waarin sommige cellen bovenop elkaar zijn gegroeid, waardoor het moeilijk is om hun geschiedenis nauwkeurig te traceren en hun fluorescentieniveaus correct te meten. Na het bekijken van deze video heeft u een goed inzicht in hoe u succesvol een microscopisch monster voor time-lapse microscopie voorbereidt en hoe u time-lapse fluorescentiemicroscopie uitvoert. Experimenteer met BACE-cellen.

live-cell-imaging-bacillus-subtilis-streptococcus-pneumoniae-using

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Opname Meercellige Gedrag in Myxococcus Xanthus Biofilms met Time-lapse Microcinematography

Dit artikel beschrijft de procedure voor het bereiden van een fluorescentie-gemerkte versie van bacteriofaag lambda, infectie...

Na Cell-lot in<em&gt; E. coli</em&gt; Na Infectie door Phage Lambda

Source: Schlimpert, S. et al. Fluorescence Time-lapse Imaging of the Complete S. venezuelae Life Cycle Using a Microfluidic Device. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates fluorescence time-lapse imaging of the complete life cycle of the bacteria Streptomyces venezuelae using a microfluidic device to visualize germination, hyphal growth, and sporulation in real time.

Fluorescence Time-Lapse Imaging of the Streptomyces venezuelae Life Cycle

Source: Makowski, Ł., et al. Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates time-lapse fluorescence imaging of Bdellovibrio bacteriovorus preying on immobilized E. coli beneath an agarose pad, enabling real-time visualization of intracellular replication and progeny release for studying bacterial predation and host-pathogen interactions.

Live-Cell Time-Lapse Imaging of Bdellovibrio bacteriovorus Predation on E. coli

We beschrijven een super-resolutie beeldvorming methode om de structurele organisatie van de bacteriële FtsZ-ring, een essentieel inrichting voor celdeling sonde. Deze methode is gebaseerd op kwantitatieve analyses van fotogeactiveerde lokalisatie microscopie (PALM) beelden en kan worden toegepast op andere bacteriële cytoskeleteiwitten.

Super-resolution Imaging van de bacteriële Division Machinery

Live cell imaging van alphaherpes virusinfecties maakt analyse van de dynamische gebeurtenissen van gerichte transport en intercellulaire verspreiding. Hier presenteren we methodieken die recombinante virale stammen die fluorescerende fusie-eiwitten tot visualisatie van virale assemblages tijdens infectie van primaire neuronen te faciliteren.

Live cell imaging van Alphaherpes Virus Anterograad Transport en Spread

Inzicht in de functie van essentiële processen bij bacteriën is uitdagend. Fluorescentie microscopie met doelgroepen gerichte kleurstoffen kan belangrijke inzicht verwerven in de cel van de microbiële groei en celcyclus progressie. Hier, wordt Agrobacterium tumefaciens gebruikt als een model bacterie Markeer methoden voor levende cellen imaging voor karakterisering van essentiële processen.

Cel fluorescentie microscopie als waarnemer van essentiële processen tijdens microbiële celgroei bij te wonen

Dit artikel biedt een stapsgewijze handleiding om de eiwit subcellulaire lokalisatie dynamiek te onderzoeken en morfologische veranderingen te monitoren met behulp van hoge-resolutie fluorescentiemicroscopie in Bacillus subtilis en Staphylococcus aureus.

Live-cel fluorescentiemicroscopie om Subcellulaire eiwit lokalisatie en celmorfologie veranderingen in bacteriën te onderzoeken

Beeldvorming van bacteriële cellen is een opkomende systeembiologiebenadering gericht op het definiëren van statische en dynamische processen die de functie van grote macromoleculaire machines dicteren. Hier wordt integratie van kwantitatieve live celbeeldvorming en cryo-elektronentomografie gebruikt om legionella pneumophila type IV secretiesysteemarchitectuur en -functies te bestuderen.

Live Cell Imaging en Cryo-Electron Tomography toepassen op Resolve Spatiotemporal Features of the Legionella pneumophila Dot/Icm Secretion System

Hier gepresenteerd is een protocol dat het toezicht op de volledige levenscyclus van roofzuchtige bacterie Bdellovibrio bacteriovorus met behulp van time-lapse fluorescentie microscopie in combinatie met een agarose pad en cell-imaging gerechten beschrijft.

Live-Cell Beeldvorming van de levenscyclus van bacteriële Predator Bdellovibrio bacteriovorus met behulp van Time-Lapse Fluorescentie Microscopie

In dit manuscript bieden we een uitgebreid protocol voor het beoordelen van de antibioticaoverleving voor Pseudomonas aeruginosa en Staphylococcus aureus, waarbij plasmiden worden getransformeerd in P. aeruginosa en S. aureus om reporterstammen te creëren en fenotypische varianten, zoals persisters, te visualiseren door time-lapse epifluorescentiemicroscopie.

Time-Lapse Epifluorescentiemicroscopie Beeldvorming van Pseudomonas aeruginosa en Staphylococcus aureus Heterogene fenotypes

Leer hoe je levende bacteriële cellen visualiseert tijdens groei en deling met geautomatiseerde fluorescentie-tijdsverloopmicroscopie. Deze methode maakt het bestuderen van eiwitdynamica en celgedrag in Bacillus subtilis en Streptococcus pneumoniae mogelijk.

Live cell imaging van Bacillus subtilis En Streptococcus pneumoniae Met Automatisch Time-lapse Microscopie

Meer video's verkennen