Waarom is immunofluorescentiekleuring belangrijk voor targetvalidatie?

Immunofluorescentiekleuring bevestigt de expressie van het doeleiwit in sferoïden van neuroendocriene tumoren van de dunne darm, wat direct bewijs levert voor het onderzoeken van de therapeutische hypothese. Deze visualisatie ondersteunt biologische risicoreductie door de aanwezigheid van het doelwit in een ziekte-relevant 3D-model te valideren voordat er een screening van verbindingen plaatsvindt.

Hoe ondersteunt permeabilisatie met Triton X-100 de toegang van antilichamen in sferoïden?

Permeabilisatie met Triton X-100 in PBS met BSA zorgt ervoor dat antilichamen door het membraan van de sferoïde kunnen dringen en zich kunnen binden aan intracellulaire eiwitten. Deze stap is essentieel voor het detecteren van neuroendocriene markers die zich in de cellen bevinden, wat een accurate validatie van het doelwit in 3D-modellen waarborgt.

Welke kwantitatieve metingen maakt fluorescentiemicroscopie mogelijk voor eiwitexpressie?

Fluorescentiemicroscopie maakt kwantitatieve meting van eiwitlokalisatie en -intensiteit binnen neuroendocriene tumorsferoïden mogelijk. Deze resultaten ondersteunen vergelijkende analyses tussen verschillende condities en helpen bij het beoordelen van target-engagement of biomarkermodulatie in preklinische studies.

Waarom zijn replicatievereisten belangrijk voor immunofluorescentie in sferoïde-modellen?

Replicatie-eisen waarborgen consistente kleuringsresultaten over verschillende batches sferoïden, wat betrouwbare gegevens oplevert voor cross-functionele teams. Gestandaardiseerde protocollen voor fixatie, permeabilisatie en antilichaamincubatie verminderen variabiliteit en verbeteren de reproduceerbaarheid in workflows voor targetvalidatie.

Welke statistische analyse is nodig vóór de implementatie van immunofluorescentie-screening?

Voorafgaand aan de implementatie moeten teams basislijndrempelwaarden voor fluorescentie-intensiteit en variabiliteitsmetrieken vaststellen op basis van controlesferoïden. Dit maakt een statistische vergelijking van veranderingen in eiwitexpressie tijdens behandeling met verbindingen of genetische modulatie mogelijk, wat datagestuurde besluitvorming bij target-validatie ondersteunt.

Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids Using Immunofluorescence

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neurowetenschap

0 weergaven • 2:38 min • April 28th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Take small bowel neuroendocrine tumor spheroids in a tube.

Add a fixative solution to preserve the cells.

To wash, centrifuge, and replace the fixative with buffer.

Centrifuge and discard the supernatant to remove any remaining fixative.

Add a buffer containing detergent and a blocking agent to permeabilize the cellular membranes and prevent non-specific antibody binding.

Wash with buffer to remove excess detergent and blocking agent.

Incubate with primary antibodies, which bind to the target protein specific to the neuroendocrine cell.

Wash with buffer to remove unbound antibodies.

Add fluorophore-tagged secondary antibodies that bind to the primary antibodies.

Rinse with buffer to remove excess antibodies.

Add a mounting medium containing a dye to stain the nucleus.

Transfer the spheroids onto a slide and mount with a cover slip.

Use a Fluorescence microscope to visualize neuroendocrine cells of the spheroid expressing specific proteins.

Fix the organoids by adding 500 microliters of paraformaldehyde and incubating them for 15 minutes. After the incubation, wash the culture twice with 1 milliliter of PBS. Add 500 microliters of PBS with 3% BSA and 0.1% Triton X-100 to permeabilize the culture. Incubate the tube for five minutes, then wash the organoids three times with 1 milliliter of PBS and 3% BSA.

Gerelateerde video's

0 Bekeken

Laatst bijgewerkt: 15 augustus 2026

Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids Using Immunofluorescence

Overzicht

Belangrijkste studiecomponenten

Wetenschappelijk vakgebied

Achtergrond

Doel van de studie

Gebruikte methoden

Belangrijkste resultaten

Conclusies

Veelgestelde vragen

Industriële relevantie voor executives

Strategische toepassingen in biofarmaceutische R&D

Vroege Ontdekking & Targetvalidatie

Screening & assayontwikkeling

Translationeel & Preklinisch Onderzoek

Integratie van Pipeline & Workflow

Operationele en zakelijke impact

Overwegingen bij de implementatie

Veelgestelde vragen over biopharma

Generatie van High-Throughput driedimensionale Tumor spheroïden voor Drug Screening

Fysiologisch patiënt afgeleide 3D-Spheroids voor anti-neoplastische geneesmiddelen screening om kanker stamcellen te targeten

Het vaststellen van 3-dimensionale sferoïden uit van de patiënt afgeleide tumormonsters en het evalueren van hun gevoeligheid voor geneesmiddelen

Human Neuro-endocriene tumor cellijnen als een drie-dimensionaal model voor de studie van de mens Neuro-endocriene Tumor Therapy

Immunofluorescent Staining of Spheroids: A Technique to Analyze Spheroids for Expression of Intra- and Extracellular Antigen Expression

Splitting Spheroids for Sub-culturing and Shipping: A Procedure for Propagating and Transferring Spheroids from Small Bowel Neuroendocrine Tumor

Longitudinale morfologische en fysiologische Monitoring van driedimensionale Tumor spheroïden met behulp van optische coherentie tomografie

Een 3D-Spheroid-model als een fysiologisch systeem voor de differentiatie van kanker-geassocieerde fibroblasten en invasies in vitro studies

Karakterisering van de effecten van migraine remmers op de invasie van 3D-tumor Spheroid door confocale microscopie met hoge resolutie

Oprichting en karakterisering van de neuro-endocriene tumor Spheroids van de kleine darm