Waarom is het toetsen van de nulhypothese essentieel voor de kwantificering van de migratie van korrelcellen?

Het toetsen van de nulhypothese zorgt ervoor dat waargenomen verschillen in de migratieafstand of snelheid van granulaire cellen statistisch significant zijn, wat bijdraagt aan een robuuste validatie van targets en het aantal fout-positieven in de vroege ontdekkingsfase vermindert.

Hoe draagt de isolatie van onafhankelijke variabelen bij kleuring bij aan discovery-workflows?

Door het effect van fluorescentiemarkering op de migratie van korrelcellen te isoleren, kunnen teams waargenomen veranderingen specifiek toeschrijven aan experimentele manipulaties, wat de mechanistische inzichten en de betrouwbaarheid van de workflow versterkt.

Wat maken kwantitatieve metingen van de migratieafstand mogelijk in R&D?

Kwantitatieve metingen van de migratieafstand en -snelheid bieden objectieve eindpunten voor het vergelijken van experimentele condities, wat datagedreven beslissingen mogelijk maakt bij compound screening en target engagement-studies.

Waarom zijn replicatie-eisen belangrijk voor cross-functionele beeldvormingsstudies?

Replicatie zorgt ervoor dat migratiefenotypen consistent zijn over experimenten en operators heen, wat de integratie van gegevens tussen teams vergemakkelijkt en het bedrijfsvijde vertrouwen in de assay-resultaten ondersteunt.

Welke statistische analyse-mogelijkheden zijn vereist vóór het uitvoeren van migratie-assays?

Teams hebben behoefte aan robuuste instrumenten voor het bijhouden, exporteren en analyseren van celmigratiedata, inclusief software voor de statistische vergelijking van migratiemetrieken om een betrouwbare interpretatie en besluitvorming te waarborgen.

Ex Vivo Imaging of Postnatal Cerebellar Granule Cell Migration Using Confocal Macroscopy

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neurowetenschap

0 weergaven • 3:59 min • June 17th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Begin with a cerebellar slice obtained from a postnatal rat pup brain in a multi-well plate containing media.

Remove the media and incubate the slice in a cytoplasmic fluorescent dye solution to label the granule cells (GCs).

Transfer the slice onto a transwell insert membrane and remove any excess dye.

Remove the insert and fill the well with media. Then, replace the insert and add media to cover the tissue.

Incubate to allow the tissue to attach to the insert membrane.

Transfer the plate to an incubator attached to a confocal macroscope and place a glass cover over the plate.

Set the culture conditions, incubate the tissue further, then begin imaging.

Upon laser illumination, the labeled GCs fluoresce.

Capture time-lapse images to visualize the radial migration of the GCs through the molecular layer of the cerebellum.

Using imaging software, analyze the migratory distance of the GCs.

After slicing the specimen, use a truncated white bulb pipette to transfer them with some HBSS to a six-well plate. Load up to three slices in each well. Next, after emptying the media in each loaded well, add five milliliters of loading solution containing 10 micromolar of the fluorescent dye. To protect the samples from light, cover the plate with foil. Then put the plate on a mutator set to 35 RPM. Let the plate incubate for 10 minutes at room temperature to let the dye label the cells.

Now, transfer the slices as before to the membrane of a transwell insert that has three micron pores. Then aspirate the loading medium, leaving just the slices. Now, remove the insert and slices to fill the well with 1.9 milliliters of DMEM. Then put the insert back and add another 100 microliters of DMEM to cover the tissues.

Incubate this preparation for two hours, after which granule cells will be visible. Transfer the plate without the lid to an environmental chamber with constant gas flow on a confocal macroscope. Then, place a glass cover on the plate insert of the confocal macroscope. For time lapse experiments, let the cells incubate in the chamber for two additional hours before proceeding.

To visualize the granule cells migrating in the tissue slices, illuminate the preparation with 488 nanometer light and use a 2X dry objective. Detect fluorescence emissions from 500 to 530 nanometers. Using ImageJ, for each image of the time lapse movie, perform a Z stack projection using the standard deviation mode.

Gerelateerde video's

0 Bekeken

Laatst bijgewerkt: 22 augustus 2026

Ex Vivo Imaging of Postnatal Cerebellar Granule Cell Migration Using Confocal Macroscopy

Overzicht

Belangrijkste Onderdelen van de Studie

Wetenschappelijk gebied

Achtergrond

Doel van de studie

Gebruikte methoden

Belangrijkste resultaten

Conclusies

Veelgestelde vragen

Relevantie voor de Industrie

Strategische toepassingen in biofarmaceutisch R&D

Vroege ontdekking & targetvalidatie

Screening & Assayontwikkeling

Translationeel & Preklinisch Onderzoek

Integratie van Pipeline & Workflow

Operationele & Bedrijfsimpact

Overwegingen voor implementatie

Veelgestelde vragen over Biopharma

Time-lapse Confocal Imaging van Migreren Neuronen in Organotypische Slice Cultuur van Embryonale Muishersenen Met behulp van In Utero Elektroporatie

Primaire cultuur van neuronen geïsoleerd van embryonale muis cerebellum

Gebruik van in vivo postnatale elektroporatie om cerebellaire korrelneuronmorfologie en synapsontwikkeling te bestuderen

Time-lapse imaging van neuroblast migratie in Acute Schijfjes van de volwassen muis voorhersenen

Visualizing the Synaptogenesis of Cerebellar Granule Neurons at Different Developmental Stages

In vivo Postnatale Elektroporatie en time-lapse imaging van neuroblast Migratie in Muis Acute Brain Slices

Genetische Manipulatie van Cerebellaire Korrel Neuronen In Vitro En In Vivo Om te studeren Neuronale morfologie en Migratie

In Vivo Dynamiek van retinale Microgliale Activering Tijdens Neurodegeneratie: Confocal oftalmoscopisch Imaging en Cell Morphometry in Mouse Glaucoom

Ex vivo beeldvorming van postnatale cerebellaire Korrel Cell Migration met behulp van confocale Macroscopie

Ex Vivo Cultuur van Chick Cerebellaire Slices en Ruimtelijk Gerichte Elektroporatie van Korrel cel precursoren