Wat is TIRF microscopie?

TIRF microscopie is een techniek die de visualisatie van fluorescerend gelabelde structuren nabij een glas-water grensvlak mogelijk maakt, waardoor hoge-resolutie beelden van cellulaire componenten worden verkregen.

Waarom worden menselijke neuroblastomacellen gebruikt in deze studie?

Menselijke neuroblastomacellen worden gebruikt vanwege hun relevantie in neurowetenschappelijk onderzoek, met name bij het bestuderen van synaptische blaasjesdynamica.

Hoe beïnvloedt hoekaanpassing TIRF beeldvorming?

Het aanpassen van de laserhoek is cruciaal om de kritische hoek te overschrijden, wat totale interne reflectie mogelijk maakt en de beeldvorming van fluoroforen nabij het membraan verbetert.

Wat zijn de optimale belichtingstijden voor beeldvorming?

Optimale belichtingstijden voor TIRF beeldvorming liggen tussen de 40 en 80 milliseconden om fotobleken te minimaliseren terwijl duidelijke beelden worden vastgelegd.

Wat zijn de voordelen van het gebruik van TIRF microscopie?

TIRF microscopie biedt hoge ruimtelijke resolutie en contrast, waardoor onderzoekers dynamische processen op celmembraan niveau kunnen bestuderen.

Kan dit protocol worden toegepast op andere celtypen?

Ja, dit TIRF microscopie protocol kan worden aangepast voor gebruik met verschillende celtypen die geschikte fluoroforen tot expressie brengen.

Cell Imaging Using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:51 min • June 17th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Begin with a total internal reflection fluorescence (TIRF) microscope setup with a covered imaging chamber containing a glass coverslip with adhered human neuroblastoma cells in a buffer.

These cells express fluorophores specific to synaptic vesicle membranes.

In epifluorescence mode, select a cell for imaging.

In TIRF mode, through the objective, direct a laser at the sample, appearing as a spot on the cover.

Adjust the angle to exceed the critical angle at the interface between the high-refractive-index glass coverslip and the lower-refractive-index sample, causing total internal reflection (TIR), seen as a thin line.

TIR generates an evanescent wave that excites fluorophores on the nearest membrane.

The fluorescence emitted is collected by the objective and captured by a camera.

Fine-tune for a high-contrast image of the cell membrane near the coverslip.

Optimize acquisition settings to minimize photobleaching and set sampling frequency.

Begin TIRF imaging to visualize fused synaptic vesicles.

In epifluorescence mode, focus on the coverslip, and choose transfected cells placed in the chamber center. Under software control, switch to turf illumination in live mode. To set the turf configuration, check the position of the beam that emerges out of the objective on the sample cover. When the beam is positioned in the center of the objective lens, a spot is visible in the center of the turf sample cover, and the cell is imaged in epifluorescence mode.

To reach the critical angle, move the focused spot in the Y direction using the angle adjustment screw on the turf slider. When the beam converges on the sample plane at an angle larger than the critical angle, the spot disappears and a straight, thin, focused line is evident in the middle of the sample cover. To fine tune the turf angle, use a cell sample.

Related Videos

0 Views

Last updated: 27 June 2026

Cell Imaging Using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

Overzicht

Belangrijke studiecomponenten

Wetenschapsgebied

Achtergrond

Doel van de studie

Gebruikte methoden

Belangrijkste resultaten

Conclusies

Veelgestelde vragen

Oligomerisatie dynamiek van celoppervlak receptoren in levende cellen door totale inwendige reflectie fluorescentiemicroscopie gecombineerd met cijfer-en helderheids analyse

Gelijktijdige interferentiereflectie en totale interne reflectie fluorescentiemicroscopie voor beeldvorming van dynamische microtubuli en bijbehorende eiwitten

Single-Molecule Imaging van Laterale Mobiliteit en Ion Channel Activity in Lipid Bilayers met behulp van Total Internal Reflection Fluorescence (TIRF) Microscopie

Een TIRF Microscopie Techniek voor Real-time, gelijktijdige beeldvorming van de TCR en de bijbehorende signaaleiwitten

Visualisatie van Cortex Organisatie en Dynamiek in Micro-organismen, met behulp van Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

Nanotopology van Celadhesie op variabele-Angle Total Internal Reflection fluorescentie microscopie (VA-TIRFM)

TIRF Microscopy to Visualize Actin and Microtubule Coupling Dynamics

Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy for Visualization of Exocytic Events

Visualiseren van hechting vorming in cellen door middel van geavanceerde draaiende schijf-totale interne reflectie fluorescentie microscopie

Implementatie van interferentie reflectie microscopie voor etiket vrije, High-Speed beeldvorming van microtubuli