Mouse Eye Enucleatie voor Remote High-throughput Fenotypering
19 november 2011
De dissectie techniek illustreert enucleatie van de muis oog voor weefsel fixatie te fenotypering presteren in high-throughput-schermen.
Deze video zal het muisoog en de nucleatie of het verwijderen van het oog uit de oogkas illustreren. Het oog is begrensd door de onderste ooglidrand. Hier is de mediale of nasale canthus.
Achteraan is de temporale of laterale canthus. Hierboven is de bovenste ooglidrand. Hier is een chirurgisch specimen.
De naald wijst naar het doorzichtige hoornvlies. We kunnen een klein stukje van de lens zien dat uitsteekt voorbij de iris. De iris is hier in bruin en bedekt de lens.
Het belangrijkste chirurgische kenmerk is deze witte lijn, of de limbus, waarachter we een punctiewond zullen maken. De achterste helft van de oogbol bevindt zich achter de limbus en we wijzen op een spieraanhechting. Je kunt de spier hier tegen de oogbol zien liggen, en dan het bindweefsel dat de baan vult en de Arian-klier omvat.
En tot slot, dit is de witte lange strook van de oogzenuw van een botte dissectie. Gebruik een gebogen dressingtang, aangepast met een scherpe punt, om te beginnen de oogleden uit elkaar te trekken. Dit heeft de neiging om het oog naar buiten en weg te houden.
Gebruik je tang voorzichtig om in de baan en achter het oog te gaan, druk ze zachtjes achter het oog samen zonder het uit te persen en trek naar voren. Je zou het bindweefsel moeten kunnen grijpen en niet het oog. Als je het oog naar de zijkant draait, kun je het orbitale weefsel zien samen met de witte oogzenuw.
Dit is een tweede dissectie om het nogmaals te laten zien, je gaat bij de canthus binnen, duwt de tang achter het oog, grijpt het bindweefsel en trekt het naar voren zonder op het oog zelf te drukken. Opnieuw kun je het bindweefsel zien in de lange witte strook van de oogzenuw. Om een punctiewond te maken, grijpt u het oog bij een spieraanhechting en steekt u een naald achter de limbus in, vlak naast waar u het oog vasthoudt om het te stabiliseren.
Dit zal het fixeermiddel toelaten om het oog binnen te komen. Als je de punctie ver weg maakt van waar je het oog vasthoudt, zal het oog erg onstabiel zijn en zal het moeilijk zijn om die wond te maken zolang je het oog niet samendrukt of onnodige druk uitoefent. Je kunt ook al het bindweefsel grijpen net achter het oog zelf.
Sommige fixeermiddelen vereisen geen punctiewond. In het algemeen plaatsen we het oog in een vijf cc scintillatiebuisje met minimaal drie cc fixeermiddel om ervoor te zorgen dat het oog ondergedompeld is. Voor dieren die met overvloedige fixatie zijn gefixeerd, is een scherpe dissectie noodzakelijk.
We gebruiken een gebogen calibri-tang en gebogen Wescott-schaar. Grijp het onderste ooglid met de calibri-tang. Plaats je schaar tegen het orbitale bot en begin met het snijden van het bindweefsel.
We gebruiken de curve weg van het oog en vermijden het afmetingen. Elk oog werkt de hele weg langs de onderste ooglidrand van de ene canthus naar de andere. Op een bepaald punt zal het meeste bindweefsel worden verwijderd en kun je je schaar achter de oogbol schuiven en er weg trekken.
Hier is weer een voorbeeld, het inbrengen van de schaar in de baan, maar tegen het orbitale bot in plaats van het oog en knippen van bindweefsel. Dit zal het oog beginnen te bevrijden, dat als een basketbal in een mand is. Gebruik de tang om de oogleden weg te trekken en maak zachte korte sneden rond het oog.
Hier grijpen we het bindweefsel of een spieraanhechting met de Collibra en maken we de oogbol los van het orbitale bindweefsel. Nadat de oogbollen geschikt zijn gefixeerd en als ze moeten worden vervoerd, plaatsen we wat parafilm rond de stationfles.
De verpakking moet in overeenstemming zijn met uw universiteits- en overheidsvoorschriften. We plaatsen deze meestal in een container met wat katoen Om eventuele vloeistof op te vangen, deze container moet zeer strak worden afgesloten. Deze verzendcontainer wordt vervolgens in een bubblewrapzak geplaatst.
Dit wordt geplaatst in een vloeibare laboratoriumverpakking, samen met eventuele documentatie.
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Overzicht
Deze video illustreert de techniek van enucleatie van het muizenoog, die cruciaal is voor weefselfixatie in high-throughput fenotyperingsscreens. De procedure omvat het verwijderen van de oogbal uit zijn socket, waarbij anatomische herkenningspunten voor duidelijkheid worden gemarkeerd.
Belangrijkste studiecomponenten
Wetenschapsgebied
- Neurowetenschappen
- Biologie
Achtergrond
- Enucleatie is een cruciale techniek in verschillende biologische studies.
- Begrip van de ooganatomie helpt bij nauwkeurige chirurgische procedures.
- Deze methode is essentieel voor high-throughput screeningtoepassingen.
- Juiste weefselfixatie is noodzakelijk voor nauwkeurige fenotypering.
Doel van de studie
- Om de enucleatietechniek voor educatieve doeleinden te demonstreren.
- Om een visuele gids te bieden voor onderzoekers die soortgelijke procedures uitvoeren.
- Om het begrip van anatomische herkenningspunten tijdens chirurgie te verbeteren.
Gebruikte methoden
- Videodemonstratie van het enucleatieproces.
- Identificatie van belangrijke anatomische kenmerken van het muizenoog.
- Stapsgewijze begeleiding voor het uitvoeren van de procedure.
- Visuele hulpmiddelen ter ondersteuning van leren en toepassing.
Belangrijkste resultaten
- Duidelijke visualisatie van de enucleatietechniek.
- Identificatie van de mediale en laterale canthus.
- Demonstratie van het chirurgische specimen na enucleatie.
- Verbeterd begrip van de procedure voor high-throughput screens.
Conclusies
- De video dient als een effectief educatief hulpmiddel voor onderzoekers.
- Begrip van het enucleatieproces is essentieel voor succesvolle weefselfixatie.
- Juiste techniek kan de resultaten in fenotyperingsstudies verbeteren.
Veelgestelde vragen
Executive Industry Relevance
Remote high-throughput phenotyping of mouse eyes enables distributed genetic resource utilization and accelerates discovery of genotype-phenotype correlations in ophthalmic disease models. Standardized enucleation and tissue transfer protocols reduce geographic and operational barriers, supporting scalable, multi-site preclinical research. This approach enhances portfolio-wide access to rare or geographically dispersed transgenic lines for early-stage target validation and phenotypic screening.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Facilitates systematic collection of ocular tissues from diverse genetic backgrounds for hypothesis-driven studies.
- Enables functional validation of candidate genes implicated in ocular development and disease.
- Supports predictive confidence in linking genetic perturbations to phenotypic outcomes.
Screening & Assay Development
- Provides standardized, fixed tissue samples suitable for downstream molecular and morphological assays.
- Improves reproducibility and comparability across multi-site phenotyping screens.
- Enables scalable preparation of samples for high-throughput screening platforms.
Translational & Preclinical Research
- Aligns mouse phenotyping with translational biomarker discovery for human ophthalmic diseases.
- Supports continuity from genetic discovery to preclinical validation of disease mechanisms.
- Reduces logistical barriers to accessing rare or geographically distributed mouse models.
Pipeline & Workflow Integration
This remote enucleation and tissue transfer protocol integrates into the early discovery and preclinical continuum, bridging genetic model generation with centralized phenotyping and analysis.
- Discovery Biology: Enables hypothesis testing and mechanistic de-risking by providing access to diverse genetic models.
- Screening: Standardizes sample preparation for reproducible, quantitative phenotyping assays.
- Analytics: Supports acquisition of morphological and molecular readouts for comparative analysis.
- Translational Research: Facilitates alignment of mouse phenotypes with human disease biomarkers.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable protocol for distributed tissue acquisition across research networks.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in genotype-phenotype associations and target validation.
- Operational Value: Streamlines logistics, standardizes procedures, and enables multi-site scalability.
- Strategic Value: Enhances go/no-go decision-making by broadening access to phenotypic data from rare models.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of genetic targets and disease models.
Implementation Considerations
- Requires surgical proficiency in mouse eye enucleation and tissue handling.
- Needs access to fixation reagents, validated shipping containers, and compliance with shipping regulations.
- Demands cross-site standardization of collection and documentation protocols.
- Adaptable to both unfixed and perfusion-fixed tissue workflows as supported by the protocol.
- Dependent on institutional and governmental guidelines for biological sample transport.
