Name: Mouse Eye Enucleatie voor Remote High-throughput Fenotypering (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: Leer de enucleatietechniek van het muizenoog voor high-throughput fenotypering. Deze methode toont anatomische oriëntatiepunten en weefselfixatie voor nauwkeurige analyse in neurobiologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Onderzoek naar blindheid te voorkomen; Bartly J. Mondino MD, directeur van het Jules Stein Eye Institute, UCLA, en Ramiro Ramirez-Solis, Jacqui Wit, en Jeanne Estabel aan het Sanger Institute, Wellcome Trust Genome Campus. Dit onderzoek voldoet aan de Arvo verklaring voor het gebruik van dieren in Oogheelkundige en Visual Research.

1. Stompe dissectie: Enucleatie van de muis oog in gefixeerde monsters <ol><li> Uit elkaar trekken van de oogleden om de blootstelling en de toegang tot de achterste wereld (oogbol) oppervlak te verbeteren. </li><li> Plaats een gebogen dressing pincet achter (onder) de hele wereld in de baan (oogkas). De Mahajan Sharptip dressing pincet is een aangepaste instrument met spitse tips om deze stap te vergemakkelijken (zie materialen en reagentia tabel). </li><li> Sluit de pincet en pak de orbitale bindweefsel en de oogzenuw achter de wereldbol terwijl ze voorzichtig om te voorkomen dat het knijpen in de hele wereld. </li><li> Voorzichtig omhoog te trekken het pincet en plukken de oogbol van de baan. De witte draad-achtig weefsel is de oogzenuw. </li><li> Plaats het oog in PBS. Met een 30-gauge naald een enkele steekwond onmiddellijk achter de limbus door de naald 1-2 mm in de oogbol. Dit maakt fixatieven, zoals glutaaraldehyde, die anderszins niet het oogweefsel dringen direct enter het oog. Creatie van deze steekwond niet nodig indien een fixeermiddel, zoals paraformaldehyd of alcohol, kan diffunderen in oogweefsels plaats. </li><li> Plaats de hele oog onmiddellijk in fixatief voor onderdompeling fixatie. </li></ol> 2. Sharp Dissectie: Enucleatie van de muis oog volgende perfusiefixatie <ol><li> Gebruik een gebogen colibri pincet om het ooglid te houden uit de buurt van de hele wereld. </li><li> Orient gebogen Westcott dissectie schaar parallel aan de hele wereld, waarbij het de bedoeling in de richting van de achterkant van de baan. </li><li> Snijd de vaste bindweefsel dat de hele wereld rond van de inferieure, mediale, superieur, en zijkanten. </li><li> Plaats de gebogen pincet achter de wereldbol, pakt u het bindweefsel, zonder te drukken op de hele wereld, en naar voren trekken voor het oog ophelderen. Sinds de orbitale bindweefsel is stijf van perfusiefixatie kunnen aanvullende snijden van orbitale weefsels noodzakelijk om deze volledig los van de globe. </li></ol> 3. Fixatie en verpakking Verzenden van vaste weefsels moeten volgen van uw instelling en postdiensten eisen met inbegrip van passende etiketten en verpakkingen. Het volgende protocol is een voorbeeld van de scheepvaart een niet-infectieuze biologische monster bij kamertemperatuur. Hiervoor zijn 3 lagen van de verpakking, maar geen klasse A / B biologische stof of vloeibare stikstof labels. <ol><li> Plaats het oog in een 5 mL glazen scintillatieflesje met ten minste 3 ml fixeermiddel of post-buffer als fixeermiddel fixatie kort. Vermeld het trackingnummer op het deksel van de flacon en sluit deze af met Parafilm. </li><li> Plaats scintillatieflesjes in een biologisch monster goedgekeurde verzenddoos. In ons instituut, bijvoorbeeld goedgekeurd containers moeten drie lagen: een gesloten houder waarin het monster wordt een absorberende tussenlaag en een beschermende buitenlaag. </li><li> Plaats de container in een bubble-wrap pakket en vervolgens in een appdwaalden laboratorium container samen met de juiste documentatie. </li></ol> 4. Representatieve resultaten Histologisch onderzoek van de ogen kan worden uitgevoerd door een verscheidenheid aan werkwijzen, waaronder hematoxyline en eosine kleuring, enzymatische detectie expressie, transmissie-elektronenmicroscopie en immunohistochemie. Na fixatie onderdompeling in 4% paraformaldehyde, werd weefsel ingebed in paraffine en in coupes op een microtoom. In high-throughput fenotypering analyseren we pupil-oogzenuw secties sample alle weefseltypen in het oog (figuur 1). Secties van weefsel werden onderzocht voor lacZ expressie (Figuur 2), transmissie-elektronenmicroscopie van celorganellen (figuur 3), en expressie van specifieke moleculen met antilichamen (Figuur 4). In onze fenotype screening methode was niet belangrijk oriëntatie van het oog te houden ten opzichte van de nasale (mediale ooghoek) en temporele (lateral canthus) kanten. Er zijn minstens twee opties als eye oriëntatie nodig. Na enucleatie, hebben we toegepast licht brandijzer op de tijdelijke hoornvlies op de drie uur positie met een handheld cauterisatie-apparaat. Het letsel is duidelijk op de histologie en niet verdwalen tijdens de verwerking als histologische inkten. Het nadeel is dat brandijzer schade toebrengt aan het hoornvlies, die een kritische weefsel voor onderzoek zijn. De andere optie is een ervaren anatoom die kan identificeren van de oculaire spier inserties. Onder een stereomicroscoop, identificatie van de lagere en hogere obliquus insteekmarkeringen de lagere en hogere en aspect van de wereld. 3 Met beide oriëntaties werkwijze, is het belangrijk om het monster te houden terwijl een rechter of linker oog. Samen zullen deze voorafgaande kan Exact Globe oriëntatie op het snijden. <img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig1.jpg" alt="Figuur 1" /> Figuur 1. Muis oog histologische beelden afte<html> r remote acquisitie. Mouse ogen werden verwijderd door scherpe dissectie na perfusie fixatie met 4% paraformaldehyde. A. Leerling-oogzenuw gedeelte gekleurd met hematoxyline en eosine toont behoud van alle weefsels substructuren. ON, oogzenuw. (Groen schaal bar = 500 micron) B. Een hogere vergroting beeld van het normale netvlies toont haar gelaagde structuur: RGC, retinale ganglioncellen, IPL, innerlijke plexiform laag; INL, binnenste nucleaire laag; OPL, buitenste plexiform laag; ONL, buitenste nucleaire laag (fotoreceptorcel) (pijl); IS, fotoreceptor innerlijke segmenten (pijlpunt), OS, fotoreceptor buitenste segmenten, RPE, retinale pigment epitheel, C, choroidea. (Groen schaal bar = 50 micron) C. Vergeleken met de normale retina, dit exemplaar dunner door fotoreceptor degeneratie. De ONL, IS en OS zijn volledig afwezig (pijl). (Groen schaal bar = 50 micron) &quot;Alt =&quot; Figuur 2 &quot;/&gt; Figuur 2. LacZ expressie in transgene muizen. Ogen werden verwijderd door stompe dissectie en ondergedompeld in 1 mg / ml X-gal oplossing (5 mM K3Fe (CN) 6, 5 mM K4Fe (CN) 6, 2 mM MgCl2, 0,02% NP40 en 0,1% natriumdeoxycholaat) nacht bij 37 ° C. Ogen werden gefixeerd in 2% formaldehyde/0.2% glutaaraldehyde gedurende 30 minuten en doorgesneden op een microtoom. X-gal product (blauw) labels: A. ciliaire epitheel, B. hoornvliesepitheel en C. de retinale ganglion cel (RGC) laag in het netvlies. INL, binnenste nucleaire laag; ONL, buitenste nucleaire laag. <img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig3.jpg" alt="Figuur 3" /> Figuur 3. Transmissie elektronenmicroscopie van retinale pigment epitheel (RPE). Na stompe dissectie en de oprichting van een steekwond, ogen waren onderdompeling gefixeerd in 2,5% paraformaldehyde / 2,5% glutaaraldehyde in 0,1 M natriumfosfaatbuffer. Ogen waren Secondarily gefixeerd in 1% osmium textroxide geleidelijk gedehydrateerd en ingebed in Spurr hars is. Weefsel werd doorsneden bij 90 nm en geplaatst op koperen roosters slot bedekt met Formvar en afgebeeld met een transmissie-elektronenmicroscoop. De microfoto toont, fotoreceptor buitenste segmenten van de neurosensorische retina, melanosomen (M) in het retinale pigment epitheel en Bruch&#39;s membraan. <img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig4.jpg" alt="Figuur 4" /> Figuur 4. Immunohistochemische labeling van superoxide dismutase-3 (groen) in de muis glasvocht. Ogen werden verwijderd door stompe dissectie en fixatie onderging onderdompeling in 4% paraformaldehyde. Ze werden ingebed in paraffine en in coupes met een microtoom. Weefselcoupes werden geïncubeerd met konijn polyklonaal SOD3 antiserum 1:50 verdund. SOD3 expressie werd gedetecteerd met een geit anti-konijn IgG (H + L)-Alexa Fluor 488 geconjugeerd secundair antilichaam. Labeling van SOD3 getoond in green.

<ol><li>Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+models+of+retinal+degeneration+and+targets+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy.</a> Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).</li>
<li>Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+Mouse+Eye+Phenomics+System%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Laboratories%2C+Mouse+Genetics+Meeting%22%5BJournal%5D)">A high-throughput Mouse Eye Phenomics System.</a> Cold Spring Harbor Laboratories, Mouse Genetics Meeting. , (2010).</li>
<li>Smith, R. S., John, S. W. M., Nishina, P. M., Sundberg, J. P. In Research Methods For Mutant Mice. , CRC Press. Boca Raton, FL. (2002).</li>
<li>Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+degeneration+mutants+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal degeneration mutants in the mouse.</a> Vision Res. 42, 517-525 (2002).</li>
<li>Anderson, M. G., Smith, R. S., Hawes, N. L., Zabaleta, A., Chang, B., Wiggs, J. L., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+genes+encoding+melanosomal+proteins+cause+pigmentary+glaucoma+in+DBA%2F2J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations in genes encoding melanosomal proteins cause pigmentary glaucoma in DBA/2J mice.</a> Nat. Genet. 30, 81-85 (2002).</li>
<li>Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+fundus+photography+and+angiography%3A+a+catalogue+of+normal+and+mutant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis%22%5BJournal%5D)">Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes.</a> Mol. Vis. 5, 22-22 (1999).</li>
<li>Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+resources+for+vision+research%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Mouse model resources for vision research.</a> J. Ophthalmol. 2011, 391384-391384 (2011).</li>
<li>Pinto, L. H., Vitaterna, M. H., Siepka, S. M., Shimomura, K., Lumayag, S., Baker, M., Fenner, D., Mullins, R. F., Sheffield, V. C., Stone, E. M., Heffron, E., Takahashi, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Results+from+screening+over+9000+mutation-bearing+mice+for+defects+in+the+electroretinogram+and+appearance+of+the+fundus%5BTitle%5D)+AND+%22Vision.+Res%22%5BJournal%5D)">Results from screening over 9000 mutation-bearing mice for defects in the electroretinogram and appearance of the fundus.</a> Vision. Res. 44, 3335-3345 (2004).</li>
<li>Heckenlively, J. R., Winston, J. V., Roderick, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+for+mouse+retinal+degenerations.+I.+Correlation+of+indirect+ophthalmoscopy%2C+electroretinograms%2C+and+histology%5BTitle%5D)+AND+%22Doc.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Screening for mouse retinal degenerations. I. Correlation of indirect ophthalmoscopy, electroretinograms, and histology.</a> Doc. Ophthalmol. 71, 229-239 (1989).</li>
<li>Tsang, S. H., Gouras, P., Yamashita, C. K., Kjeldbye, H., Fisher, J., Farber, D. B., Goff, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+degeneration+in+mice+lacking+the+gamma+subunit+of+the+rod+cGMP+phosphodiesterase%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Retinal degeneration in mice lacking the gamma subunit of the rod cGMP phosphodiesterase.</a> Science. 272, 1026-1029 (1996).</li>
<li>Tsang, S. H., Woodruff, M. L., Jun, L., Mahajan, V., Yamashita, C. K., Pedersen, R., Lin, C. S., Goff, S. P., Rosenberg, T., Larsen, M., Farber, D. B., Nusinowitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+carrying+the+H258N+mutation+in+the+gene+encoding+the+beta-subunit+of+phosphodiesterase-6+%28PDE6B%29+provide+a+model+for+human+congenital+stationary+night+blindness%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mutat%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice carrying the H258N mutation in the gene encoding the beta-subunit of phosphodiesterase-6 (PDE6B) provide a model for human congenital stationary night blindness.</a> Hum. Mutat. 28, 243-254 (2007).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De meeste transgene muizen bestaan ​​in laboratoria die niet onderzoekt de ogen. Onze video-techniek illustreert een eenvoudige, gestandaardiseerde methode voor het op afstand chirurgische vaardigheid transfer naar weefsel overname optimaliseren van laboratoria met weinig ervaring met de ogen. Deze techniek helpt video overwinnen belangrijke valkuil in high-throughput fenotypering, die het gebruik van een beperkt aantal locaties deskundige door niet-gestandaardiseerde weefselverzameltoestel en bevestigingsmethoden die b...

<table border="1"><tbody><tr><th> Naam </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogusnummer </th><th> Reacties </th></tr><tr><td> Gebogen Dressing pincet </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1408 </td><td></td></tr><tr><td> Mahajan Sharptip dressing pincet </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1406 (REF SP7-64520) </td><td></td></tr><tr><td> Gebogen Westcott Schaar </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E3321 WH </td><td></td></tr><tr><td> 15 ° BD Beaver Microchirurgische Blade </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 374881 </td><td></td></tr><tr><td> 0,22 Fine-Castroviejo Hechten Forceps </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1805 </td><td></td></tr><tr><td> 0,12 Colibri pincet </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> 2/132 </td><td></td></tr><tr><td> 30-gauge naald </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 305128 </td><td></td></tr><tr><td> Biohazard Mailer </td><td> Visser </td><td> 03-523-4 </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> Visser </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> Glazen scintillatieflesjes </td><td> Wheaton </td><td> 4500413033 </td><td></td></tr><tr><td> PBS, pH 7,4 </td><td> Invitrogen </td><td> 70011-044 </td><td></td></tr><tr><td> 16% Paraformaldehyde </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 15700 </td><td></td></tr><tr><td> 2,5% paraformaldehyde / 2,5% glutaaraldehyde in 0,1 M natriumfosfaatbuffer </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 15700 &amp; 16300 </td><td> Gemengd in het laboratorium </td></tr><tr><td> 50% Glutaraldehyde </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 16300 </td><td></td></tr><tr><td> 0,25% Formvar </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 15810 </td><td></td></tr><tr><td> Politieagentper slot Grid </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> M2010-CR </td><td></td></tr><tr><td> 4% osmiumtetroxide </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 19140 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-SOD3 antilichaam </td><td> Abcam </td><td> Ab21974 </td><td></td></tr><tr><td> Geit anti-konijn Alexa Fluor 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11070 </td><td></td></tr><tr><td> Het inbedden van hars Spurr&#39;s </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 14300 </td><td></td></tr></tbody></table>

mouse eye enucleatie voor remote high-throughput fenotypering

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

De muis is een belangrijke eye genetisch model voor de studie van menselijke translationele oogziektes. Blinding ziekten bij de mens, zoals maculadegeneratie, fotoreceptor degeneratie, cataract, glaucoom, retinoblastoom, en diabetische retinopathie zijn samengevat in transgene muizen. Een-vijf meeste transgene en knock-out muizen zijn van laboratoria die aan niet-oogheelkundige aandoeningen te bestuderen, maar genetische conservering tussen orgaansystemen suggereert dat veel van dezelfde genen kunnen ook een rol spelen bij ontwikkeling en oculaire ziekte. Vandaar dat deze muizen vormen een belangrijke bron voor het ontdekken van nieuwe genotype-fenotype correlaties in het oog. Omdat deze muizen zijn verspreid over de hele wereld, is moeilijk te verwerven, onderhouden en fenotype ze op een efficiënte en kosteneffectieve manier. Zo zijn de meeste high-throughput oogheelkundige fenotypering schermen beperkt tot enkele locaties die nodig on-site, oogheelkundige expertise om de ogen te onderzoeken in levende muizen. 6-9 Een alternatieve benadering die door ons laboratorium is een werkwijze voor remote weefsel acquisitie die gebruikt kunnen worden in kleine of grote schaal onderzoek van transgene muizen ogen. Gestandaardiseerde procedures voor video-gebaseerde chirurgische vaardigheden overdracht, weefsel fixatie, en de scheepvaart ervoor dat er geen lab op hele ogen te verzamelen van gemuteerde dieren en stuur ze voor de moleculaire en morfologische fenotypering. In deze video artikel zullen we technieken om ophelderen en zowel losgemaakte en perfusie vaste muis ogen dragen voor het op afstand fenotypering analyses.

De dissectie techniek illustreert enucleatie van de muis oog voor weefsel fixatie te fenotypering presteren in high-throughput-schermen.

Mouse Eye Enucleatie voor Remote High-throughput Fenotypering

Het muizenoog is een belangrijk genetisch model voor de translationele studie van humane oogziekten. Blindmakende ziekten bij mensen, zoals maculaire ...

Deze video illustreert het oog van de muis en de enucleatie, oftewel het verwijderen van de oogbol uit de oogkas. De oogbol wordt begrensd door de rand van het onderste ooglid. Hier is de mediale of nasale canthus.Achteraan bevindt zich de temporale of laterale canthus. Bovenaan is de bovenste ooglidrand zichtbaar. Hier is een chirurgisch preparaat.De naald wijst naar het heldere hoornvlies. We kunnen een klein stukje van de lens zien die voorbij de iris steekt. De iris bevindt zich hier in het bruin en bedekt de lens.Het belangrijkste chirurgische referentiepunt is deze witte lijn, of de limbus; de punctiewond wordt vlak daarachter gemaakt. De achterste helft van de oogbol bevindt zich achter de limbus en we wijzen hier naar een spieraanhechting. U kunt de spier hier tegen de oogbol zien liggen, en vervolgens het bindweefsel dat de orbit vult en de glanda Harder bevat.En tot slot is dit de witte, lange strook van de oogzenuw na een botte dissectie. Gebruik een gebogen pincet, aangepast met een scherpe punt, om de oogleden uit elkaar te trekken. Dit helpt doorgaans om het oog naar buiten en weg te drukken.Gebruik de pincet voorzichtig om in de oogkas en achter de oogbol te gaan, knijp deze zachtjes achter de oogbol samen zonder deze plat te drukken en trek naar voren. U zou het bindweefsel moeten hebben gegrepen en niet de oogbol. Als u de oogbol naar de zijkant draait, kunt u het orbitale weefsel samen met de witte oogzenuw zien.Dit is een tweede dissectie om opnieuw te laten zien dat u bij de canthus naar binnen gaat, de pincet achter de oogbol duwt, het bindweefsel pakt en dit naar voren trekt zonder op de oogbol zelf te drukken. Opnieuw ziet u het bindweefsel in de lange witte strip van de oogzenuw. Om een punctiewond te maken, grijpt u de oogbol vast bij een spieraanhechting en steekt u een naald achter de limbus, direct naast de plek waar u het oog vasthoudt om het te stabiliseren.Hierdoor kan het fixatief het oog binnendringen. Als u de punctie ver verwijderd maakt van de plek waar u het oog vasthoudt, zal de oogbol zeer onstabiel zijn en zal het moeilijk zijn om die wond te maken zonder het oog samen te drukken of overmatige druk uit te oefenen. U kunt ook al het bindweefsel direct achter de oogbol zelf vastpakken.Sommige fixatievloeistoffen vereisen geen punctiewond. In het algemeen plaatsen we het oog in een scintillation vial van 5 cc met ten minste 3 cc fixatievloeistof om er zeker van te zijn dat het oog volledig is ondergedompeld. Voor via perfusie gefixeerde dieren is een nauwkeurige dissectie noodzakelijk.We gebruiken een gebogen calibri-pincet en een gebogen wescott-schaar. Pak het onderste ooglid vast met het calibri-pincet. Plaats de schaar tegen het orbitale bot en begin met het doorsnijden van het bindweefsel.We maken gebruik van de kromming weg van de oogbol en vermijden het inkllemmen bij het bepalen van de grootte. Elk deel van het oog is bruikbaar langs de gehele rand van het onderste ooglid, van de ene canthus naar de andere. Op een bepaald punt zal het grootste deel van het bindweefsel zijn verwijderd, waarna u de schaar achter de oogbol kunt schuiven en deze weg kunt trekken.Hier is nogmaals een voorbeeld waarbij de schaar in de oogkas wordt ingebracht, maar tegen het oogkashout in plaats van tegen de oogbol, om het bindweefsel weg te knippen. Hiermee wordt de oogbol, die als een basketbal in een mandje ligt, begin vrij te maken. Gebruik de pincet om de oogleden weg te trekken en maak voorzichtig korte inkepingen rondom de oogbol.Hierbij vatten we het bindweefsel of een spieraanhechting vast met de Collibra en maken we de oogbol volledig los van het orbitale bindweefsel. Nadat de oogbollen adequaat zijn gefixeerd, brengen we, indien ze getransporteerd moeten worden, wat parafilm aan rond het bewaarflesje.De verpakking moet in overeenstemming zijn met de regelgeving van uw universiteit en de overheid. Gewoonlijk plaatsen we deze in een container met wat watten om eventueel vrijkomend vocht op te vangen; deze container moet zeer goed worden afgesloten. Deze verzendcontainer wordt vervolgens in een zak met noppenfolie geplaatst.Dit wordt samen met de bijbehorende documentatie in een verzendpakket voor vloeistoffen uit het laboratorium geplaatst.

mouse-eye-enucleation-for-remote-high-throughput-phenotyping

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Dit protocol beschrijft een eenvoudige en goedkope manier om de activiteit van cis-regulatorische elementen (dat wil zeggen, enhancer / promotor) te kwantificeren in levende muis netvlies via explantatie elektroporatie. DNA-voorbereiding, retinale dissectie, elektroporatie, retinale Explantatie cultuur, en post-fixatie analyse en kwantificering worden beschreven.

Kwantificeren van de activiteit van Cis-Regulatorische elementen in de muis Retina door Explantatie Elektroporatie

Source: Jagodzinska, J., et. al.,  Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo. J. Vis. Exp. (2017)  In this video, we demonstrate the use of spectral-domain optical coherence tomography (SD-OCT) to image retinal layers and assess structural changes in a genetically modified mouse model with optic neuropathy.

In Vivo Imaging of the Mouse Retina Using Optical Coherence Tomography

Het verwijderen van de ogen, ook wel enucleatie, een bruikbare strategie om aspecten van de visuele, cross-modale en ontwikkelingsplasticiteit bestuderen langs de zoogdieren visuele systeem is omdat het leidt tot onomkeerbare gedeeltelijke (monoculair) of volledige (binoculair) verlies van gezichtsvermogen. Hier beschrijven we een zeer reproduceerbare en duidelijke aanpak om te presteren in vivo enucleatie.

Een zeer reproduceerbare en eenvoudige methode om te presteren In Vivo Oculaire Enucleatie in de muis na opening van de ogen

In dit artikel beschrijven we de principes voor het ontwerpen en uitvoeren van een multi-kleurig lijn-traceringsexperiment met behulp van R26R-Confetti muizen. We bieden een specifiek protocol voor het volgen van hoornvliesepitheelcellen die kunnen worden aangepast voor andere weefsels van belang.

Een methode voor Lineage Tracing van hoornvliescellen De Multi-kleur Fluorescent Reporter Muizen

Hier tonen we een nieuwe benadering voor het gebruik van hoge resolutie spectrale domein optische coherentie tomografie (HR-SD-OCT) helpen levering van gen-therapie-agenten in de subretinal ruimte, beoordelen van haar areal dekking en karakteriseren fotoreceptor vitaliteit.

Met resolutie muis optische coherentie tomografie steun intraoculaire injectie in het netvlies gentherapie onderzoek

Hier gepresenteerd is een multiphoton microscopisch platform voor live muis oculaire oppervlakte beeldvorming. Fluorescerende transgene muis maakt de visualisatie van celkernen, celmembranen, zenuwvezels en haarvaten binnen het oculaire oppervlak mogelijk. Niet-lineaire tweede harmonische generatie signalen afgeleid van collageen structuren bieden label-vrije beeldvorming voor stromal architecturen.

Een custom multiphoton microscopie platform voor live beeldvorming van muis hoornvlies en conjunctiva

In vivo beeldvorming is een krachtig hulpmiddel voor de studie van biologie in gezondheid en ziekte. Dit protocol beschrijft transpupillaire beeldvorming van het netvlies van de muis met een standaard microscoop met twee fotonen. Het demonstreert ook verschillende in vivoimaging-methoden om fluorescerend meerdere cellulaire cohorten van het netvlies te labelen.

Transpupillaire twee-fotonen in vivo beeldvorming van het netvlies van de muis

Dit protocol, dat oorspronkelijk werd gerapporteerd door Fernandez-Godino et al. in 20161, beschrijft een methode om RPE-cellen van muizen efficiënt te isoleren en te cultiseren, die binnen een week een functionele en gepolariseerde RPE-monolaag vormen op Transwell-platen. De procedure duurt ongeveer 3 uur.

Efficiënte dissectie en cultuur van primaire muis retinale pigment epitheelcellen

Dit artikel presenteert een protocol voor oculaire microdissectie bij knaagdieren. Het proces omvat de enucleatie van de oogbol samen met het nictitating membraan (d.w.z. het derde ooglid). Dit wordt dan gevolgd door de scheiding van de achterste en voorste oogschelpen.

Microdissectie van het knaagdieroog

Het netvlies vertoont een complexe ruimtelijke organisatie over zijn laminaire structuur. Moderne ruimtelijke transcriptomics en sequencingtechnieken vereisen weefselcoupes &lt; 20 μm dik, waardoor hun toepasbaarheid voor retinaal onderzoek wordt beperkt. Deze vers ingevroren cryosectiemethode produceert dunne delen van het netvlies van de muis met behoud van vlakke ruimtelijke relaties, waardoor uitgebreide moleculaire kartering over laminae mogelijk is.

En gezicht Cryosectie van het netvlies van de muis voor hoogdimensionale ruimtelijke moleculaire analyse

Dit artikel demonstreert een methode om microglia-motiliteit en contact met postsynaptische puncta in het netvlies te visualiseren en te kwantificeren met behulp van spinning disk confocale microscopie.

Live beeldvorming en karakterisering van microglia-dynamica en interacties met synapsen in een zieke muisnetvlies

Leer de enucleatietechniek van het muizenoog voor high-throughput fenotypering. Deze methode toont anatomische oriëntatiepunten en weefselfixatie voor nauwkeurige analyse in neurobiologisch onderzoek.

Mouse Eye Enucleatie voor Remote High-throughput Fenotypering

Meer video's verkennen