Waarom is Z-stack acquisitie belangrijk voor de kwantificering van de astrocytenmorfologie?

Z-stack acquisitie maakt een volledige driedimensionale reconstructie van de astrocytenmorfologie mogelijk door seriële optische secties door de volledige celdiepte vast te leggen, wat essentieel is voor een nauwkeurige morfometrische analyse in studies naar targetvalidatie.

Hoe beïnvloedt het optimaliseren van de belichting en gain de signaaldetectie in immunogelabelde astrocyten?

Door de belichtingstijd en gain te optimaliseren, wordt de fluorescentiesignaalintensiteit van DAPI- en Alexa Fluor 555-labels gemaximaliseerd terwijl ruis wordt geminimaliseerd, wat zorgt voor een betrouwbare detectie van cytoplasmatische en nucleaire compartimenten voor een nauwkeurige beeldanalyse.

Welke kwantitatieve resultaten worden gegenereerd uit 3D-beeldvorming van astrocyten?

3D-beeldvorming levert morfometrische metingen op, zoals celvolume, oppervlakte en territoriale bezetting, afgeleid van samengevoegde Z-stack-coupes, waardoor een statistische vergelijking van astrocyten-fenotypes tussen experimentele condities mogelijk wordt.

Waarom is de replicatie van beeldvormingsparameters belangrijk voor crossfunctionele samenwerking?

Replicatie van beeldparameters, waaronder scansnelheid, framegrootte en middeling, waarborgt de consistentie in beeldkwaliteit en de vergelijkbaarheid van gegevens tussen teams voor discovery biology, assay-ontwikkeling en preklinisch onderzoek die werken aan gerelateerde targets.

Welke statistische analysecapaciteiten zijn vereist voordat astrocyten-imaging in screening-workflows wordt geïmplementeerd?

Implementatie vereist de mogelijkheid om uit Z-stacks afgeleide morfometrische eindpunten te kwantificeren en te vergelijken, zoals Sholl-analyse of territoriumoverlap, wat statistische evaluatie mogelijk maakt van door verbindingen geïnduceerde veranderingen in de astrocytenmorfologie voor hitselectie.

Three-dimensional Imaging of Immunolabeled Astrocytes Using Confocal Microscopy

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neurowetenschap

0 weergaven • 3:16 min • June 17th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Take an immunostained mouse brain section with fluorescently labeled astrocytes. The astrocyte's cytoplasm fluoresces red, while the nucleus fluoresces blue.

Place the slide on a confocal microscope's stage under a suitable objective lens.

Using the acquisition software, adjust the focus and select the fluorophores labeling the astrocyte's cytoplasm and the nucleus.

Begin live imaging and optimize imaging parameters to reduce noise in the acquired image.

Under acquisition parameters, select a low-speed scanning mode for capturing a higher-quality two-dimensional image.

Identify the uppermost position of the astrocyte as the starting point for the Z-stack and the lowest position as the endpoint.

Define the number of slices covering the full cell depth.

Merge the slices to generate a three-dimensional image of the astrocyte.

To begin confocal microscopy, place a slide onto the microscope stage and select the 63x objective. After opening the Acquisition software, click on Smart Setup in the Acquisition tab and select the proper fluorophores. Here, DAPI and Alexa Fluor 555 are used.

Next, click on Best signal, followed by Apply. Then click on Set Exposure to allow the computer to determine the optimal exposure parameters.

To optimize the image, open the Channels window and switch the image to Live. Adjust the focus if needed. Then click on 1 AU to optimize the pinhole. Adjust gain for best intensity.

Finally, set the digital gain between 2 and 3. After this optimization, stop the live image and open the Acquisition Mode window. Adjust the frame size by clicking on X by Y, and select 1024 by 1024. Also, choose a slow speed.

Next, open the Averaging tab and select a number greater than or equal to 4. Then click the Snap button and save the captured 2D image. To set up 3D imaging, open the Smart Setup tab and mark the Z-Stack item, which will cause the stack window to open.

Gerelateerde video's

0 Bekeken

Laatst bijgewerkt: 22 augustus 2026

Three-dimensional Imaging of Immunolabeled Astrocytes Using Confocal Microscopy

Overzicht

Belangrijke studiecomponenten

Wetenschappelijk gebied

Achtergrond

Doel van de studie

Gebruikte methoden

Belangrijkste resultaten

Conclusies

Veelgestelde vragen

Industriële Relevantie voor Managers

Strategische toepassingen in biofarmaceutisch R&D

Vroege ontdekking & targetvalidatie

Screening & Assay-ontwikkeling

Translationeel & Preklinisch Onderzoek

Integratie van Pipeline & Workflow

Operationele & Bedrijfsimpact

Overwegingen voor implementatie

Veelgestelde vragen over Biofarmaceutica

Hoge resolutie Confocal beeldvorming van de bloed - hersen barrière: Imaging, 3D reconstructie en kwantificering van Transcytosis

Analyseren van de grootte, de vorm en de directionaliteit van netwerken van gekoppelde astrocyten

Analyse van astrocytengebiedvolume en tegels in dikke vrij zwevende weefselsecties

Immunostaining of Fluorescently Labeled Astrocytes in a Mouse Brain Tissue Section

Visualizing Astrocyte Morphology Using Fluorescent Dye Iontophoresis in a Fixed Mouse Brain Slice

Drie-dimensionale confocale analyse van microglia / macrofagen Markers van Polarisatie in Experimentele Hersenletsel

Protocol voor drie-dimensionale confocale Morfometrische Analyse van Astrocytes

Drie-dimensionale weefsel ontworpen uitgelijnd Astrocyt netwerken vergemakkelijken zenuwstelsel regeneratie te recapituleren Developmental mechanismen

Visualisering van de morfologie van de astrocyten met behulp van Lucifer geel Iontforesis

Onderzoek naar ruimtelijke interactie tussen astrocyten en neuronen in vrijgemaakte hersenen