Name: High-throughput versuikering test voor Lignocellulose Materialen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 39 s
Description: Leer een high-throughput methode voor het meten van het versuikeringspotentieel van plantaardige biomassa. Deze aanpak combineert voorbehandeling, enzymhydrolyse en automatische kwantificering van vrijgekomen suikers.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs willen graag een Viksø-Nielsen (Novozymes) bedanken voor de gave van de cellulolytische enzymen. Dit werk werd gefinancierd door KP7 VERNIEUWING en door BBSRC projecten BB/G016178 en BB/G016194.

1. De voorbereiding van de monsters Wij werken normaal gesproken met komt voort uit zowel kruidachtige of houtige gewassen. In het geval van kruidachtige materialen die we groeien de planten naar volwassenheid, en na het zaad ontwikkeling die we verzamelen droge stengels zodra senescence is voltooid. De stengels zijn gehakt in 4 mm segmenten en geplaatst in 2 ml flesjes met drie frezen ballen. In het geval van houtachtige materialen, worden de monsters grond om grof zaagsel met een cursus hout-bestand en vervolgens geplaatst in een kogelmolen voor verdere verwerking. De monsters worden in een rack binnen het slijpen / opmaak station (figuur 1). Dit station maalt sequentieel, mixen, en weegt elk monster. Het aantal herhalingen nodig per monster wordt vastgesteld door het testen van de gemalen materiaal in een reeks van inleidende experimenten waarbij de intrinsieke variabiliteit voor een bepaalde deeltjesgrootte wordt bepaald. De 2 ml flacons worden doorboord aan de onderkant en de materialen worden verstrekt door trilling van de flacon over de geselecteerde goed. De trillende arm wordt bestuurd door een terugkoppeling van de balans waardoor de nauwkeurige dosering van het poeder. De robot verdeelt 4 mg / putje in een standaard analyse en 4 herhalingen nodig zijn in de meeste gevallen. Dit maakt 20 plant samples / plaat te worden geanalyseerd. 2. Voorbehandeling Nadat de monsters zijn opgemaakt, zijn de 96-well platen verwerkt door een geautomatiseerd liquid handling systeem (figuur 2). Hier een milde voorbehandeling wordt uitgevoerd op de plantmateriaal door het toevoegen van 350 pi van zure of basische oplossingen en het verwarmen van de plaat op een aangepaste blok. Om te voorkomen dat de verdamping tijdens de analyse, worden de platen met 96 putjes afgesloten met een siliconen mat. De temperatuur en tijd van de voorbehandeling kan worden aangepast aan het materiaal dat wordt onderzocht. De maximum temperatuur is echter 100 ° C. Een alternatieve procedure voor het testen van hardere voorbehandelingen is om de materialen off-line voorbehandelen en de pretreatmet uit het proces te elimineren. 3. Hydrolyse <ol><li> Nadat de materialen zijn voorbehandeld, de robot verwijdert automatisch de voorbehandeling oplossing, en wast, al de putten, vijf keer met 850 pi 25 mM acetaatbuffer. De spoelingen worden uitgevoerd door het toevoegen van buffer om de voorbehandeling oplossing, en vervolgens het verwijderen van 50% van het totale volume na aftrek van de vaste stoffen in het monster te regelen. De hoogte van de aspiratie is vastgesteld op de helft van de vloeibare massa om te voorkomen dat aspiratie vaste stoffen uit de bodem van de put, er is verwaarloosbaar verlies van vaste stoffen met behulp van deze aanpak. Na deze wast de pH-waarde in de put is 4,5 en het materiaal is klaar voor enzymatische hydrolyse. </li><li> Een enzym mengsel dat een oplossing van cellulasen en hemicellulasen wordt toegevoegd door de robot. In elke goed, is 850 ul van enzymmengsel afgegeven en de plaat wordt verplaatst naar een 50 ° C schudden incubator. De standaard hydrolyse wordt uitgevoerd voor acht uur, maar dit keer kan worden aangepast aan het doel van het experiment. De standaard enzym gebruikt voor het laden van grassen is 7 FPU / g van het materiaal. </li></ol> 4. Detectie van reducerende suikers Bepaling van reducerende suikers vrijgelaten na hydrolyse werd uitgevoerd met behulp van een aangepaste 3-methyl-2-benzothiazolinone hydrozone (MTBH) methode 3. MBTH werd geselecteerd als de meest geschikte methode, want het was het makkelijkst te automatiseren en het minst gevoelig voor interferentie van verbindingen zoals eiwitten. We pasten deze zeer gevoelige methode voor het gebruik op de robot-platform, zodat het kon nauwkeurig kwantificeren suikers bij de concentraties aanwezig in de biomassa hydrolysaten, met een uiteindelijk volume van 250 ui die geschikt is voor een standaard optische 96 wells plaat. Al de onderstaande stappen worden automatisch uitgevoerd en drie onafhankelijke bepalingen van de reducerende suikers werden uitgevoerd voor elke versuikering reactie. <ol><li> 30 pi van het hydrolysaat werd genomen uit de diepe well plaat en gemengd met 45 pi van 25 mM natriumacetaat buffer in een skirted PCR-96 wells plaat. </li><li> 25 pi van NaOH 1 N en 50 ul van een oplossing die 0,43 mg / ml MBTH en 0,14 mg / ml DTT werden toegevoegd. </li><li> Na het mengen werd de PCR-plaat verwarmd bij 60 ° C gedurende 20 min in een thermocycler of soortgelijk apparaat dat exact dezelfde hoeveelheid warmte levert aan alle 96 wells. </li><li> De resulterende reactie werd overgebracht naar een optische plaat. </li><li> Voeg 100 pi van oxiderende reagens (0,2% FeNH4 (SO4) 2, 0,2% sulfaminezuur en 0,1% HCl). Meng goed en laat ontwikkelen voor minstens 1 uur </li><li> Elke plaat moet ook bevatten standaard reacties van 50 nmol, 100 en 150 nmol nmol glucose. De optische platen worden afgelezen bij 620 nm. </li></ol> 5. Representatieve resultaten: Voorbeelden van verschillende types van analyses zijn weergegeven in figuur 3 en 4. Alle resultaten werden verkregen met behulp van het geautomatiseerde platform. Figuur 3 representeert de toename van de reducerende suikers uitgebracht door 8 uur incubatie van de grond populier met toenemende hoeveelheden van cellulolytische enzymen. Figuur 4 toont het effect van zure en alkalische voorbehandeling op populier monsters. De NaOH voorbehandeling is efficiënter dat de verdunde H2SO4 voorbehandeling bij het faciliteren van het vrijkomen van suikers tijdens de hydrolyse. De hoeveelheid suikers gemeten na hydrolyse neemt af wanneer de voorbehandeling wordt uitgevoerd met behulp van NaOH concentraties hoger dan 1M. <img src="/files/ftp_upload/3240/3240fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Robotic station voor het slijpen en 96 goed opmaak van biomassa <img src="/files/ftp_upload/3240/3240fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Liquid handling station voor de High Throughput versuikering analyse <img src="/files/ftp_upload/3240/3240fig3.jpg" alt="Figuur 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3. Effect van verschillende enzym belasting over de vrijlating van reducerende suiker equivalenten van populier monsters <img src="/files/ftp_upload/3240/3240fig4.jpg" alt="Figuur 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 4"> Figuur 4. Effect van verschillende voorbehandelingen op de versuikering van populieren monsters. A. Suikers vrijgelaten na pretreament met verschillende percentages van H2SO4 bij 90 ° C gedurende 30 minuten. Suikers B. vrijgelaten na NaOH voorbehandelingen bij dezelfde temperatuur en tijd dan het zuur voorbehandeling .

<ol><li>Carpita, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+Biogenesis+of+the+Cell+Walls+of+Grasses%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Plant+Physiol+Plant+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Structure and Biogenesis of the Cell Walls of Grasses.</a> Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol. 47, 445-476 (1996).</li>
<li>Gomez, L. D., Steele-King, C. G., McQueen-Mason, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustainable+liquid+biofuels+from+biomass%3A+the+writing%27s+on+the+walls%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytol%22%5BJournal%5D)">Sustainable liquid biofuels from biomass: the writing's on the walls.</a> New Phytol. 178, 473-485 (2008).</li>
<li>Anthon, G. E., Barrett, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+reducing+sugars+with+3-methyl-2-benzothiazolinonehydrazone%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Determination of reducing sugars with 3-methyl-2-benzothiazolinonehydrazone.</a> Anal Biochem. 305, 287-289 (2002).</li>
<li>Gomez, L. D., Whitehead, C., Barakate, A., Halpin, C., McQueen-Mason, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+saccharification+assay+for+determination+of+digestibility+in+plant+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Biofuels%22%5BJournal%5D)">Automated saccharification assay for determination of digestibility in plant materials.</a> Biotechnol Biofuels. 3, 23-23 (2010).</li>
</ol>

Variaties van het standaardversuikeringsprotocol kunnen in hetzelfde platform worden gebruikt voor het bepalen van de activiteit van cellulolytische enzymen (bijv. door variatie van de gebruikte enzymconcentraties in een plaat, alsook door papier als substraat te gebruiken); het vergelijken van de efficiëntie van verschillende enzymmengsels op een specifiek materiaal; het tijdverloop van de versuikering; etc.
Een standaard saccharificatieprotocol om het saccharificatiepotentieel in verschillende plantmaterialen te vergelijken, omvat een hydrolyse van acht uur (Figuren 3 en 4). Voor de meeste geanalyseerde plantmaterialen zijn vier replica's vereist. Onder deze omstandigheden kan het platform 80 monsters/dag verwerken. Deze analyse wordt gebruikt om grote populaties gerst, maïs en brachypodium te screenen om de variabiliteit in het saccharificatiepotentieel en de genen die betrokken zijn bij de bepaling ervan vast te stellen4.

<table border="1"><tbody><tr><th> Naam van het serum </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th></tr><tr><td> Slijpen &amp; wegen robot </td><td> Labman Automatisering </td><td></td></tr><tr><td> 2 ml micro tube met doppen </td><td> Sarstedt Ltd </td><td> 72.694 </td></tr><tr><td> 5 mm RVS kralen </td><td> Qiagen Ltd </td><td> 69989 </td></tr><tr><td> 1,2 ml Abgene vierkante goed opslag platen </td><td> Fisher Scientific Ltd </td><td> TUL-050-050C </td></tr><tr><td> Whatman cap mat voor 96 vierkante putjes </td><td> Fisher Scientific Ltd </td><td> 7704-0104 </td></tr><tr><td> Vloeistof hanling robot </td><td> Tecan Group Ltd </td><td> Freedom Evo 200 </td></tr><tr><td> Zwavelzuur </td><td> Fisher Scientific Ltd </td><td> S/9231/PB17 </td></tr><tr><td> Natriumhydroxide </td><td> Fisher Scientific Ltd </td><td> BPE359-500 </td></tr><tr><td> Natriumacetaat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S8750-500G </td></tr><tr><td> Azijnzuur </td><td> Fisher Scientific Ltd </td><td> A/0420/PB17 </td></tr><tr><td> Novozyme 188 </td><td> Novozyme </td><td> DCN00214 </td></tr><tr><td> Celluclast 1.5L </td><td> Novozyme </td><td> CCN03122 </td></tr><tr><td> 96 goed PCR volledige rok platen </td><td> Sarstedt Ltd </td><td> 72.1980.202 </td></tr><tr><td> D-Glucose </td><td> Fisher Scientific Ltd </td><td> G/0450/53 </td></tr><tr><td> 3-methyl-2-benzothiazolinone hydrazon hydrochloride hydrateren </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 129739-25G </td></tr><tr><td> DL-dithiothreitol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D9163-1G </td></tr><tr><td> Corning microplaat 96 goed vlakke bodem </td><td> Fisher Scientific Ltd </td><td> TKT-521-050H </td></tr><tr><td> Ammonium ijzer (III) sulfaat dodecahydraat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F1668-250G </td></tr><tr><td> Sulfaminezuur </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 242.772-500G </td></tr><tr><td> Zoutzuur </td><td> Fisher Scientific Ltd </td><td> 12462-0026 </td></tr></tbody></table>

high-throughput versuikering test voor lignocellulose materialen

High-throughput Saccharification Assay for Lignocellulosic Materials

Polysacchariden die make-up plant lignocellulose biomassa kan worden onderverdeeld in een reeks van suikers die vervolgens kan worden gebruikt in de oprichting van een bioraffinage te produceren. Deze grondstoffen zou een nieuwe industriële platform, dat zowel duurzaam en klimaatneutraal, om de huidige afhankelijkheid van fossiele brandstoffen te vervangen. De weerspannigheid aan deconstructie waargenomen in lignocellulose materiaal wordt geproduceerd door een aantal intrinsieke eigenschappen van plantaardige celwanden. Kristallijne cellulose is ingebed in een matrix Polysacchariden zoals xylans en arabinoxylanen, en de hele structuur wordt ingekapseld door de fenolische polymeer lignine, dat is ook moeilijk te verteren 1. Om de verteerbaarheid van plantaardige materialen die we nodig hebben om de belangrijkste knelpunten voor de versuikering van de celwanden en ook het scherm mutant en populaties broedvogels te ontdekken aan de variabiliteit te evalueren in versuikering 2 te verbeteren. Deze taken vereisen een hoge doorvoer benadering en hier presenteren we een analytisch platform dat versuikering analyse kan uitvoeren in een 96-well plaat formaat. Dit platform is ontwikkeld om de screening van lignocellulose de verteerbaarheid van grote populaties uit uiteenlopende plantensoorten mogelijk te maken. We hebben teruggeschroefd de reactie volumes voor zachte voorbehandeling, partiële enzymatische hydrolyse en suiker vastberadenheid, zodat grote aantallen snel worden beoordeeld in een geautomatiseerd systeem. Deze geautomatiseerde platform werkt met milligram hoeveelheden biomassa, het uitvoeren van een kogelmolen onder gecontroleerde omstandigheden om de plant materialen terug te brengen tot een gestandaardiseerde deeltjesgrootte in een reproduceerbare manier. Nadat de monsters zijn grond, de geautomatiseerde opmaak robot uitdeelt gespecificeerd en opgenomen hoeveelheden materiaal in de overeenkomstige putten van 96 diepe put plaat (figuur 1). Normaal gesproken, we afzien van hetzelfde materiaal in vier putten te hebben vier replica voor analyse. Zodra de platen zijn gevuld met het plantmateriaal in de gewenste lay-out, worden ze handmatig verplaatst naar een liquid handling station (figuur 2). In dit station worden de monsters onderworpen aan een milde voorbehandeling met ofwel verdund zuur of alkalische en geïncubeerd bij temperaturen tot 90 ° C. De voorbehandeling oplossing wordt vervolgens verwijderd en de monsters worden gespoeld met buffer om hen terug te gaan naar een geschikte pH voor hydrolyse. De monsters worden vervolgens geïncubeerd met een enzym mengsel voor een variabele lengte van de tijd bij 50 ° C. Een deel wordt overgenomen uit het hydrolysaat en de reducerende suikers worden automatisch bepaald door de MBTH colorimetrische methode.

Een eenvoudige, snelle methode voor het bepalen van de versuikering potentieel van grote aantallen van plantaardige biomassa monsters is beschreven. De geautomatiseerde platform voor deze analyse heeft betrekking op de voorbereiding van de plantaardige biomassa voor analyse in platen met 96 putjes en de daaropvolgende prestaties van de voorbehandeling, hydrolyse en kwantificering van de vrijgekomen suikers.

High-throughput versuikering test voor Lignocellulose Materialen

Polysachariden die plantenlignocellulose-biomassa vormen, kunnen worden afgebroken om een reeks suikers te produceren die vervolgens kunnen worden gebruikt bij het vaststellen van ...

Hoi, ik ben Kara Ted, ik ben Leo. Ga we. En ik ben Simon McQueen Mason.De verteerbaarheid van plantenbiomassa is momenteel een onderwerp van grote belangstelling. Dit komt doordat er veel suikers zijn gebonden in de polysachariden van de plantencelwanden die deze biomassa vormen; als we deze suikers in een bruikbare vorm kunnen vrijmaken, kunnen we deze fermenteren om allerlei producten te produceren, zoals brandstoffen en chemicaliën. Helaas zijn deze materialen uiterst moeilijk te verteren, en het verkrijgen van een beter inzicht in wat die verteerbaarheid reguleert, is een kwestie van dringende noodzaak.Om plantmateriaal te kunnen gebruiken voor de productie van vernieuwingsgroepen, moeten we in staat zijn om het saccharificatiepotentieel in deze planten te meten. Hier aan de Universiteit van York screenen we daarom grote populaties plantmateriaal om hun saccharificatiepotentieel te bepalen. Saccharificatie is het proces waarbij complexe koolhydraten worden afgebroken tot hun monosacharidecomponenten om waardevolle chemicaliën te produceren via verschillende industriële processen.Om het potentieel voor saccharificatie te meten, reproduceren we industriële processen op microschaal, waarbij we biomassa onderwerpen aan een voorbehandeling en enzymatische hydrolyse om de vrijgekomen suikers te bepalen. Hiermee worden interessante variëteiten binnen genotypen geïdentificeerd. Het high-throughput systeem werkt in een IG zes-wells plaatformaat.Er worden milde hydrolyseomstandigheden gebruikt om subtiele verschillen tussen genotypen bloot te leggen, en de methode is bovendien flexibel genoeg om verschillende substraatmaterialen te ondersteunen en verschillende enzymen te evalueren. De door ons gebruikte methode omvat het verwerken van plantmateriaal tot een poeder, dat vervolgens wordt voorbehandeld met een verdund zuur of een base bij 90 °C gedurende 20 minuten. Vervolgens wordt een enzymatische digestie uitgevoerd met een commerciële cellulase-mix bij 50 °C gedurende acht uur.Ten slotte wordt een MBTH-methode gebruikt om de afgifte van reducerende suikers te bepalen. Het plantmateriaal wordt geoogst als droge stengels, die worden gesneden in segmenten van vier millimeter. Deze worden samen met drie metalen kogels van vijf millimeter in vials van twee milliliter geplaatst.De vials zijn individueel gelabeld met barcodes, die worden gescand om de traceerbaarheid van de monsters te waarborgen. De monsters worden in de robots voor malen en formatteren geladen. De monsters worden automatisch gemalen en gemengd om het dispenseren van de biomassa in een 96-wells plaat mogelijk te maken.De vials worden doorboord, waarna de vial in de robotarm wordt herpositioneerd zodat deze in een trechter staat die trilt om het poeder te doseren. De trilling van de trechter wordt geregeld door een balans om de gewenste hoeveelheid massa per well te bereiken. De biomassa wordt gedoseerd in 10 kolommen van de platen, waarbij twee kolommen worden vrijgehouden voor standaarden.Door vier herhalingen per monster uit te voeren, laden we 20 monsters per plaat. Het hydrolysaat van deze plaat wordt in drievoud overgebracht naar PCR-platen, wat resulteert in drie optische platen. Op deze manier verkrijgen we drie bepalingen van reducerende suikers per putje biomassa.Zodra ze zijn geformatteerd, worden de platen afgedicht met een siliconenmat om verdamping te voorkomen. Wanneer ze klaar zijn, worden ze overgebracht naar de robot voor vloeistofbehandeling. Bij de robot voor vloeistofbehandeling worden de voorbehandeling, enzymatische hydrolyse en de bepaling van de vrijgekomen suikers automatisch uitgevoerd.De tafel van twee meter is voorzien van houders voor de verschillende benodigde reagentia, evenals opbergruimte voor het plasticware. Er zijn incubatoren aanwezig voor de voorbehandeling en hydrolyse, alsof thermocyclers voor de suikerbepaling. De voorbehandeling wordt uitgevoerd in de deep well plate.Door verdunde zure of alkalische oplossingen toe te voegen aan het biomassapoeder. De platen worden overgebracht naar het warmteblok en geïncubeerd bij 90 °C gedurende 20 minuten. Wanneer deze incubatie is voltooid, wordt de voorbehandeling verwijderd door vijfmaal te spoelen met 500 µL acetaatbuffer.Zodra de voorbehandeling is weggespoeld, wordt een enzymcocktail toegevoegd. Dit is een standaardmengsel. Het bevat cellulose, een novozyme 1, 8 8 in een verhouding van vier op één bij een concentratie van 7 FPU per putje.De platen worden acht uur lang geïncubeerd bij 50 °C onder schudden. Er worden 75 µL van het resulterende hydrolysaat overgebracht naar een PCR-plaat. In kolommen 11 en 12 van de PCR-platen worden de glucosestandaarden toegevoegd.Vervolgens worden 25 µL 1 M natriumhydroxide aan alle wells toegevoegd. Ten slotte worden 50 µL MBTH-reagens in de PCR-plaat gepipetteerd. De deep well plate wordt bewaard nadat de overdracht van het hydrolysaat naar de derde PCR-plaat is voltooid.Terwijl de PCR-platen naar de thermocyclers worden verplaatst voor incubatie bij 60 °C gedurende 15 minuten. De laatste stap van het proces is de overdracht van het reactiemengsel naar optische platen voor de kleurontwikkeling. Na incubatie worden de PCR-platen uit de thermocycler gehaald.Honderd µL oxiderend reagens wordt toegevoegd aan het overgebrachte reactiemengsel. Om de kleurontwikkeling te vergemakkelijken, wordt het proces voor vloeistofbehandeling vier keer in 24 uur uitgevoerd, waarbij de voorbehandelingsspoeling en de toevoeging van het enzym ongeveer twee uur duren. De enzymatische hydrolyse duurt acht uur en de suikerbepaling duurt nog eens twee uur.Terwijl de eerste plaat acht uur lang incubeert, begint de volgende plaat aan het proces. Met deze toewijzing van robotbronnen wordt een doorvoer van 80 monsters per dag behaald om de hoeveelheid vrijgekomen reducerende suikers te bepalen. De optische platen worden uitgelezen bij 620 nanometers.De verkregen resultaten worden geanalyseerd om de vrijgekomen suikers te kwantificeren als nanomoles per milligram per uur reactie. Bedankt voor het kijken, en ik hoop dat dit uw onderzoek naar biobrandstoffen inspireert.

high-throughput-saccharification-assay-for-lignocellulosic-materials

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Plantaardige biomassa is een belangrijke koolstof-neutrale hernieuwbare grondstof die gebruikt kunnen worden voor de productie van biobrandstoffen. Plantaardige biomassa bestaat voornamelijk uit celwanden, een structureel complex composietmateriaal genoemd lignocellulose. Hier beschrijven we een protocol voor een uitgebreide analyse van de inhoud en de samenstelling van de muur afgeleid koolhydraten.

Uitgebreide analyse van de samenstelling van de celwanden (lignocellulose biomassa) Deel II: Koolhydraten

Dit protocol beschrijft een high throughput scherm voor cellulolytische activiteit van een metagenomic bibliotheek uitgedrukt in Escherichia coli. Het scherm is oplossing gebaseerd en sterk geautomatiseerde, en maakt gebruik van een-pot chemie in 384 goed microtiterplaten met de uiteindelijke uitlezing als een absorptie meting.

Een High Throughput Scherm voor Biomining cellulase activiteit van Metagenomic Bibliotheken

Beschrijven we een low cost, high throughput methode voor het screenen op schimmels endoglucanase activiteit...

High Throughput Screening van Fungal endoglucanase activiteit in Escherichia coli</em

Industriële afvalstoffen kunnen worden verzameld en gemodificeerd om microbiële groei te analyseren. Technieken voor de extractie van lignocellulose leveren componenten om specifieke biologische afbraakcapaciteit te analyseren. Gaschromatografie-massaspectrometrie identificeert fermentatieproducten van micro-organismen die zijn gekweekt op pulpafval. Deze methoden bepalen het metabolische vermogen van micro-organismen om pulpafval af te breken.

Methoden voor het vergemakkelijken van microbieel groei op afvalstromen van pulpmolens en karakterisering van het biodegradatiepotentieel van gekweekte microben

De structuur en chemische eigenschappen van de plantencelmuur worden geëvalueerd om ideale grondstoffen voor biobrandstoffen en biomaterialen te identificeren. Standaardmethoden hebben beperkingen wanneer ze worden toegepast op grote datasets. Deze hoogdoorvoerpre-behandelings-, enzym-saccharificatie- en pyrolyse-moleculaire bundel massaspectrometrie-methoden vergelijken een groot aantal biomassamonsters met verminderde experimentele tijd en kosten.

High-throughput screening van weerspannigheid Variaties in lignocellulose: Total Lignine, Lignine monomeren, en enzymatische Sugar release

We presenteren een geautomatiseerde modulaire methode met hoge doorvoer voor de identificatie en karakterisering van microbiële exopolysachariden op kleine schaal. Deze methode combineert een snelle preselectie om de totale hoeveelheid uitgescheiden polysacchariden te analyseren met een gedetailleerd koolhydraat-vingerafdruk om het snelle screenen van nieuw geïsoleerde bacteriestammen of hele stamcollecties mogelijk te maken.

Geautomatiseerde Modular High Throughput exopolysaccharide Screening Platform Samen met Highly Sensitive Koolhydraten Fingerprint Analysis

Adaptieve evolutie en isolatietechnieken worden beschreven en aangetoond dat derivaten van Scheffersomyces stipitis stam NRRL Y-7124 die in staat zijn om snel te consumeren hexose en pentose gemengde suikers in enzym versuikerd undetoxified hydrolysaten en te accumuleren meer dan 40 g / l ethanol opleveren.

Technieken voor de evolutie van de Robuuste Pentose hoge gisting Gist voor Bioconversie van omzetting van lignocellulose Ethanol

De voorbehandeling van lignocellulose biomassa met protische goedkope ionische vloeistoffen wordt getoond, wat resulteert in een delignificeerde, celluloserijke pulp en een gezuiverde lignine. De pulp geeft aanleiding tot hoge glucoseopbrengsten na enzymatische saccharificatie.

Voorbehandeling van lignocellulose met Low-cost ionische vloeistoffen

Een high-throughput assay voor enzymscreening wordt beschreven. Deze multiplexed, gebruiksklare assaykit bestaat uit vooraf gekozen Chromogene Polymer Hydrogel (CPH) substraten en complexe Insoluble Chromogene Biomass (ICB) substraten. Doelenzym zijn polysacharide-afbrekende endo-enzymen en proteasen.

High-throughput screening van Carbohydrate-afbrekende enzymen via innovatieve Onoplosbare chromogeen substraat Assay Kits

OrganoCat is een methode voor de voorbehandeling en fractionering van lignocellulose onder milde omstandigheden tot lignine, fermenteerbare suikers en cellulosepulp. In een bigene, bifasische oplosmiddelensysteem van water en 2-methyltetrahydrofuraan met 2,5-furancarbonzuur als katalysator, worden de OrganoCat-producten in situ gescheiden voor eenvoudige productterugwinning.

Fractionering van lignocellulosische biomassa met behulp van het OrganoCat-proces

Diepe eutectische oplosmiddel-gebaseerde, microgolf-ondersteunde voorbehandeling is een groen, snel en efficiënt proces voor lignocellulosische fractionering en hoogzuiver lignine herstel.

Ultrasnelle lignineextractie uit ongewone mediterrane lignocellulosische residuen

Leer een high-throughput methode voor het meten van het versuikeringspotentieel van plantaardige biomassa. Deze aanpak combineert voorbehandeling, enzymhydrolyse en automatische kwantificering van vrijgekomen suikers.

High-throughput versuikering test voor Lignocellulose Materialen

Meer video's verkennen