Name: FSL Constructen: Een eenvoudige methode voor het wijzigen van Cell / Virion Oppervlakken met een bereik van biologische merkers zonder dat hun levensvatbaarheid (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: Leer FSL-constructen voor oppervlaktemodificatie van levende cellen en virussen zonder vitaliteit te beïnvloeden. Deze methode biedt snelle, flexibele labeling voor biotechnologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs danken Dan Bess van Sigma-Aldrich voor het presenteren van de video. We danken ook Don Branch, Evgenii Cherny, Scott Chesla, Elizabeth Hadac, Amanda Harrison, Damien Heathcote, Annika Hult, Chuan-Ching Lan, Susannah McIntosh, Sarvani Komarraju, Elena Korchagina, Caroline Oliver, Martin Olsson, Stephen Parker, Igor Rodinov, Alexander Tuzikov, en Eleanor Williams voor hun resultaten en bijdragen aan het ontwerp, de synthese van FSL constructies en het bepalen van biologische activiteit.

Het volgende protocol beschrijft de algemene procedure voor het invoegen van FSL constructen (figuur 1) in biologische membranen. Voor de eenvoud van het protocol zal alleen verwijzen naar cellen (kodecytes), die zich op een 100% concentratie. Echter, de term cellen is uitwisselbaar met virionen (kodevirions) of organismen of cellulaire structuren en hun concentratie in verdunningsmiddel is niet belangrijk, mits het is altijd consistent tussen de tests, controles en experimenten. Met de rode bloedcellen van de hematocriet is normaal gesproken 80%, maar met virionen, embryo's en andere cellen is meestal minder dan 1%. De methode is zeer robuust en zal produceren gewijzigd membranen bij gebruik door een van haar variaties, maar verfijning vereist zal zijn om te optimaliseren en standaardiseren van de mate van verandering die nodig is voor specifieke toepassingen. 1. Voorbereiding van de FSL constructen <ol><li> Ter voorbereiding van de bouw van FSL voorraad oplossing eerst herstellen van de droge FSL product (tabel 1) door de toevoeging van 1,0 ml oplosmiddel (of zoals gespecificeerd in het product insert) om het product flacon. Kort met ultrasone trillingen (30 seconden). Dit zal een 1mg/ml oplossing, die kan worden in hoeveelheden verdeeld in 100 ul steriele containers en bewaard bij 2-8 ° C gedurende een week, of bevroren voor maximaal 3 maanden. </li><li> Ter voorbereiding op het werken FSL bouwen oplossingen voor het inbrengen, maar voorafgaand aan het gebruik kort met ultrasone trillingen (30 seconden) de voorraad oplossing voor elk micellen homogeniseren. Verdun het FSL bouwen in buffer (bij voorkeur niet met lipiden of sterk hydrofoob materiaal) om de concentratie of vereiste over een bereik indien gewenst. </li></ol> Opmerkingen: <ol><li> FSL bouwt zal meestal in te voegen in cellen in lipide bevattende media, maar is algemeen vereist dat zo veel als een 50x hogere concentraties FSL werken dan wanneer in PBS of andere lipiden vrije media. </li><li> Het werkbereik verdunningen zal afhangen van de toepassing, de detectiemethode gevoeligheid, de aard van de FSL bouwen, en de mate van wijziging nodig is. Typisch het bereik van de verwatering zal worden tussen de 10-500 ug van FSL per ml oplosmiddel voor koolhydraten FSL bouwt en 100 tot 100 ug / ml voor andere FSL constructies zoals fluoroforen en biotine. </li><li> Als voorbereiding inbrengen oplosmiddelen met meerdere FSL bouwen, gewoon bij elkaar voegt de constructen in hetzelfde verdunningsmiddel op hun normale arbeidstijd concentratie. Als een construct is bij veel hogere concentratie dan de ander, kunnen sommige aanpassingen (toename) van concentratie die nodig is voor de mindere te bouwen. Als alternatief bouwt mogen na elkaar worden toegevoegd, bij voorkeur met de hoogste concentratie eerste construct, gevolgd door de mindere. </li><li> FSL bouwen concentraties hoger dan 1000 ug / ml kan invoeren grote hoeveelheden lipide in een celmembraan, en kan de vorm van de cel te wijzigen of maken het meer vatbaar voor lysis. </li><li> FSL construeren werkende oplossingen moeten worden bewaard bij 2-8 ° C en binnen een paar dagen. </li><li> FSL constructen kunnen worden verdund in water, maar een geringere stabiliteit en moeten worden gebruikt binnen een paar uur. Als de bijsluiter geeft water als oplosmiddel de reconstitutie van het product in de flacon bevat ook zouten (zoals gespecificeerd in de bijsluiter). </li></ol> 2. Invoeging van FSL Construct (s) in de membranen <ol><li> Was eerst de cellen voor FSL wijziging vrij van ongebonden lipiden door middel van centrifugeren en het gebruik van PBS of lipide gratis mobiele media als wasoplossing. </li><li> Verpak de cellen of op te schorten in 100 pi verdunningsmiddel. </li><li> Tegelijkertijd bereiden controles die idealiter zowel ongemodificeerd cellen (geïncubeerd met PBS in plaats van FSL-oplossing) en / of cellen gemodificeerd met een goedaardige, maar verwante FSL bouwen. </li><li> Voeg 100 ul van een geschikte verdunning van FSL-oplossing (met 1 of meer FSL constructies) om de cellen en gedurende 1-2 uur bij 37 ° C. incubeer Een soortgelijk resultaat kan worden verkregen door het 6 uur incubatie bij 25 ° C of 's nachts (18 uur) bij 4 ° C - mengen is aan te bevelen om de paar uur of zware celsuspensies worden gebruikt. </li><li> Wash (optioneel) tweemaal met PBS of media aan op een willekeurig FSL construeert te verwijderen en een geschikte suspensie te bereiden. </li></ol> Opmerkingen: <ol><li> Het oplosmiddel wordt gebruikt om de cellen te schorten kan worden celcultuurmedia, PBS, cel storage-oplossingen, etc, maar liefst zonder lipiden (bijv. foetaal kalf serum) of reinigingsmiddelen (bijv. TWEEN). </li><li> Verschillende volumes (dan 100 pi) ratio's (dan 1:1 cellen / FSL oplossing) of incubatie omstandigheden van tijd en temperatuur kan worden gebruikt, mits het dezelfde verhouding, concentratie en het volume worden gebruikt om reproduceerbare resultaten te verkrijgen. </li></ol> 3. Hanteren en Visualisatie <ol><li> Zodra het FSL wijziging is afgerond de kodecytes kan worden opgeslagen bij 4-8 ° C in lipide vrije media of gebruikt. </li><li> Kodecytes en kodevirions over het algemeen gedragen zich hetzelfde als niet-gemodificeerde cellen / virionen en kan worden Handled en bekeken onder normale testen van systemen (microscopie, serologie, flowcytometrie, etc). Ze hebben meestal geen speciale eisen, behalve voor het vermijden van oplosmiddelen / reinigingsmiddelen / lipiden die elueren de lipide constructies van membranen. </li></ol> Opmerkingen: <ol><li> Constructen blijft in het membraan van inactieve cellen, zoals rode cellen, indien opgeslagen in lipide vrije media voor het leven van de cel. In cellen met actieve membranen de constructies zullen worden geïnternaliseerd en gemetaboliseerd, met een snelheid afhankelijk van de celmembraan activiteit. </li><li> Dode cellen zal bevatten meestal een hoog niveau van FSL constructies, dit kan gebruikt worden om niet-levensvatbaar cellen van levensvatbare cellen te scheiden. </li><li> Als kodecytes worden opgeslagen (of gebruikt in vivo) in lipiden bevattende media / omgevingen, zoals serum / plasma het construct zal langzaam uit het membraan elueren over een periode van uren of dagen, afhankelijk van temperatuur en lipiden concentraties / composities. </li></ol> 4. Representatieve resultaten: <ol><li> De volgende representatieve resultaten hangen af ​​van het construct gebruikt (tabel 1), zijn ingebracht concentratie en de relatieve sensitiviteit en specificiteit van de detectie-installatie (s). In het algemeen alle FSL constructies zullen invoegen in cellen na 1 uur, maar de optimale omstandigheden zal moeten worden vastgesteld voor elke situatie. </li><li> FSL constructen kunnen worden gebruikt om de buitenkant van een verscheidenheid van levende cellen 3-9,11,14 label. In de voorbeelden in figuur 2 embryo's in de verschillende stadia werden gebruikt (omdat ze een kwetsbaar cel), maar ook andere cellen (figuur 3) of envelop virionen (figuur 4) kan ook worden geëtiketteerd. FSL-fluoresceïne maakt het mogelijk om direct etikettering van oppervlakken (figuren 2-4), terwijl de FSL-biotine en andere FSL bouwt kan het gebruik van een secundaire detectiesysteem (meestal avidine / antilichamen / lectines) nodig hebben om hun aanwezigheid (Figuren 5) tonen . </li><li> Bloedgroep markers van menselijke of dierlijke specificiteit kan worden bevestigd aan cellen, met inbegrip van rode cellen 4-9 (Figuur 6). Naarmate de hoeveelheid FSL construeren op een kodecyte is controleerbaar en reproduceerbaar 4-6, kan kodecytes voor antilichamen kwantificatie worden gemaakt (tabel 2 en figuur 6). De werkelijke bron van de cellen is niet belangrijk, ze kunnen alle soorten, of zelfs van dezelfde oorsprong als de bron van antilichaam, waarbij zorgen over de enige onverenigbaar antigeen wordt ingevoerd bij het ​​FSL 7,8 (Figuur 6). </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3289/3289table2.jpg" alt="Tabel 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Tabel 2"> Tabel 2. Representatieve serologische reacties van drie verschillende FSL-A (tri) rode cellen kodecytes getest op verdunningen van monoklonale anti-A. De 50 pM oplossing van FSL-A (tri) bij geïncubeerd met een gelijk volume van de groep O rode bloedcellen geproduceerd sterke A antigen positieve cellen, die kunnen worden gedetecteerd door een 1:512 verdunning van monoklonale anti-A. De 5 - en 10-voudig lagere FSL-A (tri) oplossingen geproduceerd kodecytes met minder bloedgroep A antigen expressie. <img src="/files/ftp_upload/3289/3289fig1.jpg" alt="FSL-constructieoverzicht" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="FSL-constructieoverzicht"> Figuur 1. FSL bouwen overzicht. Als een bloem FSL constructies bestaat uit drie belangrijke componenten. De functionele hoofd (F) in het geval van de FSL construct kan een verscheidenheid van verschillende biologisch functionele groepen, een spacer (S) ontworpen om afstand van F veroorzaken uit de buurt van het membraan, water dispergeerbaarheid te verbeteren en niet-reactief met serum te worden, terwijl de diacyl lipiden kan de te bouwen om spontaan op te nemen in oppervlakken. (I) FSL-Gb3 met een bloedgroep Gb 3 (of P k) trisaccharide epitoop Galα4Galβ4Glcβ. (II) FSL-A (tri) met een bloedgroep A trisaccharide epitoop GalNAcα3 (Fucα2) Galβ. (III) FSL-fluoresceïne. (IV) FSL-biotine met een biotine F-groep. De functionele groep van de structuren in I-III zijn geconjugeerd met een geactiveerde adipaat derivaat van dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE), terwijl de spacer van de structuur IV is carboxymethylglycine-adipaat gebaseerd. <img src="/files/ftp_upload/3289/3289fig2.jpg" alt="FSL-fluoresceïne-gelabelde muisembryo's" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="FSL-fluoresceïne-gelabelde muisembryo's"> Figuur 2. FSL-fluoresceïne gelabeld muis embryo's. Alle afbeeldingen zijn van levende embryo's die waren gelabeld als hun zona pellucida (ZP) was intact (dwz de FSL bouwen doorgegeven via de ZP om de embryo binnen label). Foto's I-IV zijn van ZP-vrij embryo's vrijgelaten uit hun ZP met zuur tyrodes na labeling met FSL-fluoresceïne. Identieke kleuren gebeurt ongeacht of embryo's werden FSL bewerkt met ZP intacte of ZP gratis. Embryo's worden direct voorzien van FSL-fluoresceïne, door de 2 uur 37 ° C-methode in serum vrij van media voor celkweek, gewassen en vervolgens bekeken onder fluorescentie microscopie. (I) ZP gratis twee-cel muis embryo, ook met klassieke intense polaire lichaam vlekken. (II-III) ZP gratis vier-cel en acht cel muizen embryo's, zowel met schimmige kleuring van de cellen die outside de microscoop vlak van focus. (IV) ZP gratis 16 cellen van muizen embryo. (V) ZP intact murine blastocyst embryo's (D4-D5), waar zowel het embryo en de zona zijn gelabeld. <img src="/files/ftp_upload/3289/3289fig3.jpg" alt="FSL-fluoresceïne en zebravissen" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="FSL-fluoresceïne en zebravissen"> Figuur 3. FSL-fluoresceïne en zebravis 14. (I) Microangiography op een 52 HPF (uren na de bevruchting) zebravis larven direct geïnjecteerd in de circulatie met FSL-fluoresceïne. De zebravis vasculatuur is gekleurd. (II) FSL-fluoresceïne heterogene zebravis nierweefsel cellen (ZK kodecytes) werden gecreëerd ex vivo dan micro-geïnjecteerd in de circulatie van een 52 hpf ontvanger zebravis. In vivo observaties van de ZK kodecytes werden twee uur na de injectie door beeldvorming van de vasculatuur onder fluorescentie met time-lapse microscopie. Afgebeeld is een enkele video-frame met grote langzaam bewegende of onbeweeglijke cellen (aangegeven met oranje pijlen) en de snel bewegende cellen (onscherpe foto's door beweging - aangegeven met groene pijlen). Labeling zorgt voor real-time in vivo observatie van het gedrag en de biologische verdeling van de ZK kodecytes. (III) orale opname van FSL-fluoresceïne bereikt door het onder te dompelen zebravis embryo's in FSL-fluoresceïne bevattende media voor maximaal 5 dagen. Wassen werd bereikt door de overdracht van embryo's in media die geen FSL constructen (minstens 6 uur is vereist, maar kan worden voor meerdere dagen). (IIIa) Bright veld microscopie van de FSL-fluoresceïne behandeld zebravis die overeenkomen met de naastgelegen fluorescentie beeld (IIIb). De fluorescentie is bij voorkeur gelegen in het darmkanaal. Geen kleuring werd waargenomen in onbehandelde controle embryo's (IVa en IVb). <img src="/files/ftp_upload/3289/3289fig4.jpg" alt="FSL-fluoresceïne-labeling van virionen" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="FSL-fluoresceïne-labeling van virionen"> Figuur 4. FSL-fluoresceïne etikettering van virionen 10 VSV en H1N1. (I) vesiculaire stomatitis virus (VSV) werd direct gemerkt met 10 ug / ml FSL-fluoresceïne gedurende 2 uur bij 37 ° C, gevolgd door de vaststelling van met 4% paraformaldehyde en dan flowcytometrie. Geen zuivering van het VSV kodevirion na FSL labeling nodig was. (II) Flowcytometrie van varkens testiculaire cellen die geïnfecteerd met het humaan A / Puerto Rico/8/1934 (H1N1) kodevirions geëtiketteerd met FSL-fluoresceïne. Niet-geïnfecteerde cellen worden gezien als de zwarte lijn, terwijl fusie van de H1N1 kodevirion met de ST-cellen resulteert in een fluorescerende cel (rode lijn). <img src="/files/ftp_upload/3289/3289fig5.jpg" alt="FSL-biotine gelabelde cellen" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="FSL-biotine gelabelde cellen"> Figuur 5. FSL-biotine gelabelde cellen en de daaropvolgende visualisatie via gelabeld avidine 7,8. Alle cellen werden voor het eerst gelabeld met FSL-biotine gedurende 1 uur bij 37 ° C, gewassen vervolgens reageren met fluorofoor gelabeld avidine, gewassen en natte gemonteerd voor fluorescentie microscopie. (I) Compiled confocale beeld van een muizen-embryo blastocyst. (II) Centraal confocale deel van het embryo van de voorgaande afbeelding. (III) Live beweeglijke menselijke spermatozoa - vervagen optreedt als gevolg van hun beweging. (IV) Vast (4% paraformaldehyde post-inserter) menselijke spermatozoa. (V) Human erytrocyten. (VI) Vast (4% paraformaldehyde pre-insertion) RL95 endometrium menselijke carcinoom. (VII) niet vastgelegde RL95 endometrium carcinoom menselijke cellijn. (VIII) Biotine RBC kodecytes waargenomen in een bloedmonster genomen 2 uur intraveneuze infusie van kodecytes post met (VIII), wat neerkomt op een veld bekeken onder lichtmicroscopie while (VIIIb) is het hetzelfde veld bekeken onder de fluorescentie, het identificeren van de twee kodecytes aanwezig zijn in het veld -of-view. De berekening van de verhouding van kodecytes aan ongelabelde cellen kan gebruik worden als een indicator van overleven. (IX) Live menselijk endometrium biotine kodecytes gevisualiseerd door te binden aan avidinylated kralen. <img src="/files/ftp_upload/3289/3289fig6.jpg" alt="FSL-Koolhydraten om bloedgroepmarkers toe te voegen voor serologische profilering" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="FSL-Koolhydraten om bloedgroepmarkers toe te voegen voor serologische profilering"> Figuur 6. FSL-Carbohydrate de bloedgroep markers toe te voegen voor serologische profilering. (I) Menselijke rode bloedcellen Galili kodecytes zijn gemaakt met een set concentratie van FSL-Galili (500 ug / ml) en getest op verdunningen van humaan serum. Menselijke rode bloedcellen van nature niet voorkomen met de xenoantigen Galili antigeen. Dergelijke kodecytes kunnen gebruikt worden om kwantitatieve niveaus van antilichamen in het serum. In dit voorbeeld is de donor was vastbesloten om een ​​anti-Galili titer van 1:32 hebben. (II) Door het creëren van kodecytes met afnemende niveaus van FSL ("antigeen titers"), een optimale antigen niveau om de opsporing van antilichamen kan worden bepaald (in dit voorbeeld Le a). Cellen kunnen worden gemaakt om alleen op te geven een positief resultaat wanneer het antilichaam niveau overschrijdt een specifieke titer. Het niveau van FSL antigeen nodig is om een ​​positief resultaat geven afhankelijk van de kwaliteit en het niveau van antilichaam worden ontdekt. Voor koolhydraten antigenen, zal een FSL oplossing van 100 ug / ml meestal resulteren in een sterk positieve reactie. (III) Human groep O rode cellen werden aangepast om een ​​bepaald niveau van A mier hebbenigen (gestandaardiseerde A kodecytes), en gebruikt om nauwkeurig en reproduceerbaar anti-A kwantificeren in humaan serum. In dit voorbeeld is de anti-A-titer in de groep O-serum getest is 1:32 en de kodecytes werden bereid uit de eigen donor rode bloedcellen. (IV) bloedgroep A-en B-antigenen tegelijk ingebracht in een enkele groep O rode celmonster worden gebruikt om een zwakke B zwak kodecytes te creëren. Deze kodecytes kunnen worden gebruikt voor ABO kwaliteitscontrole. Dit resultaat toont de analyse van een speciaal samengesteld Een zwakke B zwak kodecyte getest tegen anti-A en anti-B-reagentia en geeft de verwachte zwakke reacties.

<ol><li>Waehler, R., Russell, S. J., Curiel, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+targeted+viral+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Engineering targeted viral vectors for gene therapy.</a> Nat. Rev. Genet. 8, 573-587 (2007).</li>
<li>Strable, E., Finn, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+modification+of+viruses+and+virus-like+particles%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Top.+Microbiol.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Chemical modification of viruses and virus-like particles.</a> Curr. Top. Microbiol. Immunol. 327, 1-21 (2009).</li>
<li>Henry, S., Bovin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+synthetic+peptidolipids%2C+glycolipids+and+other+lipid-linked+structures+to+create+designer+red+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The development of synthetic peptidolipids, glycolipids and other lipid-linked structures to create designer red cells.</a> Transfusion. 48, Suppl 2S. 194A-194A (2008).</li>
<li>Frame, T., Carroll, T., Korchagina, E., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+glycolipid+modification+of+red+blood+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Synthetic glycolipid modification of red blood cell membranes.</a> Transfusion. 47, 876-882 (2007).</li>
<li>Hult, A. K., Frame, T., Henry, S., Olsson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+evaluation+of+red+blood+cells+transformed+with+variable+amounts+of+synthetic+A+and+B+glycolipids%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry evaluation of red blood cells transformed with variable amounts of synthetic A and B glycolipids.</a> Vox Sang. 95, Suppl 1. 180-180 (2008).</li>
<li>Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+red+blood+cells+for+laboratory+quality+control+use%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Hematol%22%5BJournal%5D)">Modification of red blood cells for laboratory quality control use.</a> Curr. Opin. Hematol. 16, 467-472 (2009).</li>
<li>Oliver, C., Blake, D., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+neutralization+of+anti-A+and+successful+transfusion+of+A+antigen+incompatible+red+cells+in+an+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">In vivo neutralization of anti-A and successful transfusion of A antigen incompatible red cells in an animal model.</a> Transfusion. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Oliver, C., Blake, D., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+transfusion+reactions+and+predicting+in+vivo+cell+survival+with+kodecytes%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Modeling transfusion reactions and predicting in vivo cell survival with kodecytes.</a> Transfusion. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Heathcote, D., Carroll, T., Wang, J. J., Flower, R., Rodionov, I., Tuzikov, A., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+antibody+screening+cells%2C+MUT%2BMur+kodecytes%2C+created+by+attaching+peptides+onto+erythrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Novel antibody screening cells, MUT+Mur kodecytes, created by attaching peptides onto erythrocytes.</a> Transfusion. 50, 635-641 (2010).</li>
<li>Hadac, E. M., Federspiel, M. J., Chernyy, E., Tuzikovb, A., Korchagina, E., Bovin, N. V., Russell, S. J., Henry, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescein+and+radiolabeled+Function-Spacer-Lipid+constructs+allow+for+simple+in+vitro+and+in+vivo+bioimaging+of+enveloped+virions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Meth%22%5BJournal%5D)">Fluorescein and radiolabeled Function-Spacer-Lipid constructs allow for simple in vitro and in vivo bioimaging of enveloped virions.</a> J Virol Meth. 10, Forthcoming (2011).</li>
<li>Blake, D., Lan, A., Love, D., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorophore-kodecytes+-+fluorescent+function-spacer-lipid+%28FSL%29+modified+cells+for+in+vitro+and+in+vivo+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J.%22%5BJournal%5D)">Fluorophore-kodecytes - fluorescent function-spacer-lipid (FSL) modified cells for in vitro and in vivo analyses.</a> FEBS J.. 277, Suppl 1. 199-199 (2010).</li>
<li>Harrison, A. L., Olsson, M. L., Brad Jones, R., Ramkumar, S., Sakac, D., Binnington, B., Henry, S., Lingwood, C. A., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+synthetic+globotriaosylceramide+analogue+inhibits+HIV-1+infection+in+vitro+by+two+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">A synthetic globotriaosylceramide analogue inhibits HIV-1 infection in vitro by two mechanisms.</a> Glycobiology. 27, 515-524 (2010).</li>
<li>Barr, K., Diegel, O., Parker, S., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function-Spacer-Lipid+%28FSL%29+constructs+enable+inkjet+printing+of+blood+group+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Function-Spacer-Lipid (FSL) constructs enable inkjet printing of blood group antigens.</a> FEBS J. 277, Suppl 1. 235-235 (2010).</li>
<li>Lan, C. -C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Modeling+inflammatory+bowel+disease+%5B%5D%22">Modeling inflammatory bowel disease [dissertation]</a>. , University of Auckland. Auckland. (1988).</li>
</ol>

Deborah A. Blank en Stephen M. Henry zijn werknemers en aandeelhouders van Kode Biotech Limited het octrooi eigenaar van Kode technologie. Dan Bess is een medewerker van Sigma-Aldrich, die heeft gesponsord voor de productie van deze video-artikel.

Het wijzigen van cellen en virionen met FSL constructies is een zeer eenvoudige en robuuste techniek 3-11. Te beschrijven en te onderscheiden FSL bouwen gemodificeerde cellen en virionen van niet gemodificeerde cellen, worden ze genoemd kodecytes en kodevirions respectievelijk 6-10, maar alleen wanneer de geïntroduceerde functionele groep kan worden aangetoond om aanwezig te zijn op hun membraan. Wanneer kodecytes zijn gemaakt met verschillende concentraties van FSL constructies, kunnen ze worden aangeduid met de concentratie van de FSL construct-oplossing gebruikt om ze te maken, bijvoorbeeld 15 ug / ml A kodecytes, of als meer dan een FSL wordt dan gebruik gemaakt van een gecombineerd term, bijvoorbeeld A + biotine kodecytes 7,8. Bij de verschillende cellen moeten worden vergeleken, met inbegrip van het celtype in de beschrijving wordt aanbevolen, bijvoorbeeld rode bloedcellen biotine kodecytes of endometrium biotine kodecytes 7,8. Hoewel het proces van inbrengen is zeer robuust en het inbrengen (zij het met verschillende tarieven) zal plaatsvinden over een groot temperatuurbereik 4 tot 37 ° C en binnen minuten tot uren, tot reproduceerbare inbrengen strikte controle van contact tijd, temperatuur, FSL de concentraties ( inclusief verdunningsmiddel formulering), en in mindere mate cel concentratie vereist. Tot op heden zijn alle FSL constructen kunnen worden gebruikt om cellen te wijzigen door dezelfde techniek 4-11, maar het wordt verwacht dat bepaalde voorwaarden gunstiger zijn voor work-flow en / of op de optimale afhandeling eisen van de cellen / virions te worden gewijzigd . De exacte FSL concentratie om het gewenste effect te bereiken moet worden bepaald door de gebruiker 4. De resulterende FSL construct gemodificeerde cellen / virionen kan meestal worden gebruikt in dezelfde wijze als een niet-gemodificeerde cellen / virion in biologische of analytische systemen 4-11. Als het FSL bouwt langzaam elueren van gemodificeerd oppervlakken wanneer ze in contact met de lipide-oplossingen 7,8, of worden geconsumeerd door actieve cellen 11, moeten deze problemen worden met betrekking tot het niveau van signaal of activiteit verkregen over periodes van tijd. Kodecytes kan worden vastgesteld (bijv. glutaaraldehyde / formaline) na het inbrengen op voorwaarde dat de fixeermiddel niet lipide-eluting oplosmiddelen bevatten en de functionele groep is compatibel met het fixeermiddel. Als alternatief vaste cellen kunnen worden gewijzigd met FSL constructen. In aanvulling op de wijziging van de cel en virion oppervlakken FSL constructen kunnen ook direct worden toegediend in de circulatie van proefdieren veroorzaken in vivo modificatie van circulerende cellen 7 en 12 om virussen, giftige stoffen, 12 en 7 antilichamen remmen. FLS bouwt zijn ook gebruikt om liposomen versieren en kunnen worden afgedrukt op papier oppervlakken 13, waar ze immobiliseren, en kan vervolgens worden gebruikt in diagnostische assays. De mogelijkheid om eenvoudig te wijzigen levende cellen met een toenemend aanbod van FSL constructies moet een nuttig onderzoek en ontwikkeling hulpmiddel voor de studie van celoppervlak biologie worden.

<img src="/files/ftp_upload/3289/3289table1.jpg" alt="Tabel 1"> Tabel 1. Commercieel verkrijgbare FSL constructies zoals beschreven in dit document.

fsl constructen: een eenvoudige methode voor het wijzigen van cell / virion oppervlakken met een bereik van biologische merkers zonder dat hun levensvatbaarheid

FSL Constructs: A Simple Method for Modifying Cell/Virion Surfaces with a Range of Biological Markers Without Affecting their Viability

De mogelijkheid om te wijzigen / visualiseren biologische oppervlakken, en vervolgens de studie van de gewijzigde cel / virion in een reeks van in vitro en in vivo omgeving is essentieel voor het verkrijgen van meer inzicht in de functie van specifieke moleculen of het gehele entiteit. Studies van biologische oppervlakte modificatie zijn over het algemeen beperkt tot de genetische manipulatie van het organisme of de covalente koppeling van chemische groepen aan het celoppervlak 1,2. Maar deze traditionele technieken bloot de cel chemische reactanten, of ze zijn aanzienlijke manipulatie om het gewenste resultaat te bereiken, waardoor ze lastig, en ze kunnen ook ongewild invloed hebben op de levensvatbaarheid / functionaliteit van de gewijzigde cel. Een eenvoudige methode om onschuldig te wijzigen het oppervlak van cellen is vereist. Onlangs is een nieuwe technologie, heeft Kode Technology introduceert een reeks van nieuwe constructies bestaande uit drie componenten: een functionele kopgroep (F), een spacer (S) en een lipide staart (L) en staan ​​bekend als functie-Spacer-Lipid of FSL constructs3. De spacer (S) is geselecteerd om een ​​constructie die is dispergeerbaar in water te voorzien, maar toch zal spontaan en stabiel op te nemen in een membraan. FSL construct functionele groepen (F) tot nu toe onder andere een reeks van sacchariden waaronder bloedgroep determinanten met betrekking tot, siaalzuren, hyaluronan polysacchariden, fluoroforen, biotine, radiolabels, en een reeks van peptiden 3-12. FSL constructies zijn gebruikt bij het ​​wijzigen embryo&#39;s, zaadcellen, zebravis, epitheliale / endometriumcellen, rode bloedcellen, en de virionen aan kwaliteitscontroles systemen en diagnostische panelen, te creëren om celadhesie / interactie / scheiding / immobilisatie te wijzigen, en voor in vitro en in vivo beeldvorming van cellen / virionen 3-12. Het proces van de aanpassing van cellen / virionen is generiek en uiterst eenvoudig. De meest gebruikelijke procedure is incubatie van de cellen (in lipiden gratis media) met een oplossing voor het FSL bouwt gedurende 1-2 uur bij 37 ° C 4-10. Tijdens de incubatie de FSL constructies spontaan op te nemen in het membraan, en het proces is voltooid. Wassen is optioneel. Cellen die zijn gemodificeerd door FSL constructies staan ​​bekend als kodecytes 6-9, terwijl de virionen zijn kodevirions 10. FSL bouwt als directe infusies en kodecytes / kodevirions zijn gebruikt in experimentele diermodellen 7,8,10. Alle kodecytes / kodevirions lijken hun normale vitaliteit en functionaliteit te behouden, terwijl het verkrijgen van de nieuwe functie van de F-groep 7,8,10,11. De combinatie van dispersie in biocompatibele media, spontane opname in celmembranen, en schijnbare lage toxiciteit, maakt FSL bouwt waardevolle research tools voor de studie van cellen en virionen.

Functie-Spacer-Lipid (FSL) constructies kan de oppervlakte-eigenschappen van levende cellen en virions worden gewijzigd zonder verlies van vitaliteit. De methode vereist slechts een eenvoudige aanraking van een FSL bouwen oplossing met een cel / virion en spontaan en stabiele ondergrond incorporatie optreedt.

FSL Constructen: Een eenvoudige methode voor het wijzigen van Cell / Virion Oppervlakken met een bereik van biologische merkers zonder dat hun levensvatbaarheid

Het vermogen om biologische oppervlakken te modificeren/te visualiseren en vervolgens de gemodificeerde cel/het virion te bestuderen in een reeks in vitro- en in vivo-omgevingen is essentieel ...

Het algemene doel van deze procedure is om de oppervlakken van levende cellen of S ongevaarlijk en snel te labelen met bioactieve constructen. Dit wordt bereikt door eerst een oplossing van een functionele spacer, lipide of FSL-construct voor te bereiden. Vervolgens wordt een gelijk deel van de constructoplossing gemengd met een gelijk deel van de oplossing van cellen of VIRs.Als derde stap wordt het mengsel 60 minuten lang geïncubeerd bij 37 °C. De laatste stap is het wassen van de gemodificeerde cellen of cytes of gemodificeerde VIRs of VIRs en deze vervolgens experimenteel te gebruiken zoals gebruikelijk. Uiteindelijk kunnen oppervlaktemodificeerde levende cellen of S worden gevisualiseerd met alle routinematige experimentele analysetechnieken, waaronder flowcytometrie, microscopie en agglutinatie.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals covalente labeling, is dat deze snel, robuust en flexibel is en de vitaliteit van de gemodificeerde cel of Varian niet beïnvloedt. Om eerst de voorraadoplossing van het FSL-construct te bereiden, voegt u één milliliter verdunner toe aan het productflesje om het droge FSL-product te reconstitueren, waardoor een voorraadoplossing van één milligram per milliliter ontstaat. Sonicate het flesje gedurende 30 seconden, verdeel de voorraad in steriele containers van 100 microliter en bewaar de containers bij twee tot acht graden Celsius voor maximaal één week.Om werkoplossingen van het FSL-construct voor insertie voor te bereiden, dient de oplossing vlak voor gebruik opnieuw gedurende 30 seconden met ultrasoon geluid te worden behandeld om eventuele celaggregaten te homogeniseren, waarna het FSL-construct en de buffer worden verdund tot de vereiste concentratie. Bewaar de werkoplossing gedurende maximaal een week bij twee tot acht graden Celsius. Na resuspensie in lipidenvrije media of PBS worden de cellen gecentrifugeerd voor FSL-modificatie om ongebonden lipiden te verwijderen. Pelleteer vervolgens de cellen in 100 µL verdunner; was de cellen voor de controles onder dezelfde omstandigheden tot 100 µL ongemodificeerde cellen.Voeg indien gewenst 100 µL van een passende verdunning van de FSL-oplossing toe. Maak parallel ook negatieve controles met niet-gerelateerde FSL-oplossingen en/of PBS. Incubeer vervolgens alle celpopulaties gedurende één uur bij 37 °C na de incubatie.Was alle cellen tweemaal met vetvrije media of PBS om eventuele vrije FSL-constructen te verwijderen en bereid een passende suspensie in vetvrije media. Zodra het FSL-modificatieproces is voltooid, kunnen de coys worden bewaard bij vier tot acht graden Celsius zoals een bloem. FSL-constructen bestaan uit drie hoofcomponenten, de functionele kop of F, die kan bestaan uit diverse biologisch functionele groepen.De spacer RS is ontworpen om een afstand te creëren tussen de functionele kop en het membraan om de waterdisperseerbaarheid te verbeteren en om niet-reactief te zijn met menselijk serum en het DAL-lipide of L, waardoor het construct spontaan kan worden ingebouwd in oppervlakken vier. Representatieve FSL-groepen worden getoond in de volgende vijf afbeeldingen. Levende muizenembryo's werden direct gelabeld met FSL-fluoresceïne via de methode van twee uur bij 37 °C in serumvrij celkweekmedium, gewassen en vervolgens bekeken onder een fluorescentiemicroscoop.Op deze eerste afbeelding is een zop palita-vrij embryo met twee cellen in spiegelbeeld te zien. De intense kleuring in het midden van het embryo is representatief voor een klassieke pollichaamkleuring. Op de volgende twee afbeeldingen worden zop palita-vrije embryo's met vier en acht cellen in spiegelbeeld getoond, waarbij een schaduwachtige kleuring zichtbaar is van de cellen die buiten het focuspunt van de microscoop vallen.Een afbeelding van een zop palita vrije embryo in het 16-cel mirroring stadium wordt getoond in deze laatste afbeelding van FSL fluoresceïne-gelabelde levende mirroring embryo's. Intacte mirroring blastulae embryo's van vier tot vijf dagen oud, waarbij zowel het embryo als zop LUCITA gelabeld zijn, worden getoond in deze volgende reeks afbeeldingen. De FSL fluoresceïne-labeling van zebravisjes wordt getoond. Deze eerste afbeelding is een micro-angiografie van een zebravislarve 52 uur na bevruchting waarbij FSL fluoresceïne direct in de circulatie is geïnjecteerd.De kleuring van de vaten van de zebravis is hier te zien. FSL-fluoresceïne, heterogene cellen uit nierweefsel van de zebravis of ZK-cyten, werden ex vivo gecreëerd en vervolgens gemicro-injecteerd in de circulatie van een ontvanger-zebravis 52 uur na bevruchting. In vivo observaties van de ZK-cyten werden twee uur na injectie gedaan door fluorescentie-imaging van de vaten met time-lapse microscopie. Getoond is een enkel videoframe waarbij grote, traag bewegende of immobiele cellen zijn aangegeven met oranje pijlen en snel bewegende cellen, die door hun beweging wazig verschenen, zijn aangegeven met groene pijlen. In deze afbeelding wordt de FSL-fluoresceïne-labeling getoond, verkregen door orale opname van het construct door zebravisembryo's maximaal vijf dagen onder te dompelen in medium met FSL-fluoresceïne.De brightfield-microscopie van de met FSL-fluoresceïne behandelde zebravissen links komt overeen met de aangrenzende fluorescentieafbeelding rechts. De fluorescentie was bij voorkeur gelokaliseerd in het darmkanaal. Er werd geen kleuring waargenomen in de hier getoonde onbehandelde controle-embryo's.Hier wordt het vesiculaire stomatitisvirus of VSV direct gelabeld met 10 µg/mL FSL-fluoresceïne gedurende twee uur bij 37 °C, gevolgd door fixatie met 4% paraformaldehyde, en vervolgens analyse via FACS-scan; er is geen zuivering van het VSV-virion na FSL-labeling vereist. Dit histogram toont varkensniercellen die zijn geïnfecteerd met human A Puerto Rico 8 19 34 of H1N1-virussen gelabeld met FSL-fluoresceïne.Niet-fluorescerende, niet-geïnfecteerde cellen worden weergegeven door de zwarte lijn, terwijl de fusie van het H1N1-coronavirus met de varkenscellen, die resulteerde in fluorescentie, wordt aangegeven door de rode lijn. In deze volgende reeks beelden werden de cellen eerst gedurende één uur bij 37 °C gelabeld met FSL-biotine, vervolgens gewassen en gereageerd met Fluor 4-gelabelde avadine, en daarna gewassen en nat gemonteerd voor fluorescentiemicroscopie. De eerste afbeelding toont een samengesteld confocaal beeld van een muizenembryo-blastocyste, en deze figuur toont een centrale confocale doorsnede van het embryo uit de voorgaande afbeelding.Hier zijn levende, beweeglijke menselijke spermatozoa. De onscherpte is het gevolg van hun beweging. Een duidelijkere representatieve afbeelding van menselijke spermatozoa, gefixeerd in 4% paraformaldehyde na insertie, is te zien in deze figuur hier.FSL-biotinegelabelde menselijke erytrocyten worden getoond; fixatie met 4% paraformaldehyde voor insertie heeft geen invloed op de FSL-labeling, zoals geïllustreerd in de volgende twee figuren. Hier kunnen 4% paraformaldehyde-gefixeerde RL 95 menselijke endometriumcarcinoomcellen worden waargenomen. Daarentegen zijn de RL 95 menselijke endometriumcarcinoomcellen in deze afbeelding niet gefixeerd. Er zijn vrijwel geen verschillen in de labeling waarneembaar tussen de twee afbeeldingen met of zonder fixatie.FSL biotin-gelabelde RBC-cytes, geobserveerd in een bloedmonster dat twee uur na intraveneuze infusie van de cytes is afgenomen, worden hier links getoond; de cellen werden rechts bekeken onder lichtmicroscopie, hetzelfde veld cellen werd onder fluorescentie bekeken, en de twee aanwezige cytes kunnen in het groen worden geïdentificeerd. Het berekenen van de ratio van de cytes ten opzichte van niet-gelabelde cellen kan worden gebruikt als indicator voor overleving. Deze laatste afbeelding van een FSL biotin-gelabelde cel toont levende menselijke endometriale biotin-cytes die zijn gevisualiseerd door binding aan abated beads.Deze laatste reeks afbeeldingen toont de interacties van het FSL-construct met bloedgroepmarkers. De eerste afbeelding is van menselijke rode bloedcel GLI-cyten gecoat met een concentratie van 500 microgram per milliliter FSLG, getest tegen verdunningen van menselijk serum. Menselijke rode bloedcellen reageren van nature niet met het Xena-antigeen GALI-antigeen.Op deze manier kunnen cytes worden gebruikt om antilichaamniveaus in serum te kwantificeren. In dit voorbeeld werd vastgesteld dat de patiënt een antigentiter van 1:32 had door cytes te creëren met afnemende hoeveelheden FSL. Net als bij het bepalen van een antigentiter kan een optimaal antigenniveau voor de detectie van antilichamen worden vastgesteld; er kunnen cellen worden gemaakt die alleen een positief resultaat geven wanneer het antilichaamniveau een specifieke titer overschrijdt.De hoeveelheid FSL-antigeen die nodig is voor een positief resultaat is afhankelijk van de kwaliteit en het niveau van het antilichaam dat wordt gedetecteerd. Voor koolhydraatantigenen zal doorgaans een FSL-oplossing van 100 micrograms per milliliter leiden tot een sterke positieve reactie. Menselijke groep O rode bloedcellen zijn gemodificeerd om een specifiek niveau van een antigeen te hebben of zijn zogenaamd gestandaardiseerd.A-cytes worden gebruikt om antia in menselijk serum nauwkeurig en reproduceerbaar te kwantificeren. In dit voorbeeld werden de cytes bereid uit de eigen rode cellen van de donor en bleek het antia-niveau in het geteste serum van groep O één tot 32 te zijn. Hier wordt in de zesde buis getoond dat bloedgroep A- en B-antigenen, die gelijktijdig in één enkel monster van rode cellen van groep O werden ingebracht, werden gebruikt om A-zwakke, B-zwakke cytes te creëren.Deze cellen kunnen worden gebruikt voor kwaliteitscontrole van VO. De analyse van de specifiek geformuleerde week A- en week B-cellen, getest tegen anti-A en anti-B reagentia, geeft de verwachte zwakke reacties zoals blijkt uit deze figuur, waarbij de reacties plaatsvinden in het midden van de bodem van de buizen. Deze eenvoudige techniek kan in twee uur worden voltooid indien deze correct wordt uitgevoerd.

fsl-constructs-simple-method-for-modifying-cellvirion-surfaces-with

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Methode voor het meten van virale Fusion Kinetics bij de Single Particle Level

Adenovirus deeltjes zijn ontworpen om zowel de onnatuurlijke aminozuur analoog azidohomoalanine of de azido suiker...

Chemoselectieve Wijziging van Viral oppervlakken via bioorthogonal Klik Chemie

Een snel en modulair protocol voor het genereren van recombinante vacciniavirussen die fluorescerend gelabelde eiwitten tegelijkertijd uitdrukken met behulp van de methode van voorbijgaande dominante selectie wordt hier beschreven.

Methodologie voor de efficiënte generatie van fluorescerend gelabeld Vaccinia Virus Eiwitten

De bevestiging van virionen aan een oppervlak is een vereiste voor enkelvoudige virion imaging door Super-resolution fluorescentie imaging of atomic force microscopie (AFM). Hier demonstreren we een monstervoorbereidingsmethode voor gecontroleerde hechting van virionen op glasoppervlakken die geschikt zijn voor gebruik in AFM- en superresolutiefluorescentiebeeldvorming.

Monstervoorbereiding voor single virion atomic force microscopie en superresolutie fluorescentie beeldvorming

Werk met besmettelijke virussen Ebola is beperkt tot de bioveiligheid niveau 4 laboratoria. Tetracistronic-minigenoom met replicatie en transcriptie-bevoegde virusachtige deeltjes (trVLPs) vertegenwoordigen een levenscyclus modeling systeem dat ons in staat stelt om veilig te modelleren meerdere besmettelijke cycli onder bioveiligheid niveau 2 voorwaarden, die uitsluitend op Ebola-virus componenten.

Het modelleren van de levenscyclus van Ebola Virus onder Biosafety Level 2 Voorwaarden met het virus-achtige deeltjes die Tetracistronic minigenomen

Hier wordt een methode beschreven voor de bepaling van inter-Kingdom associatie en concurrentie (bacteriën en schimmels) voor het hechten aan virus-geïnfecteerde HeLa-celmonolagen. Dit protocol kan worden uitgebreid naar meerdere combinaties van prokaryoten, eukaryoten en virussen.

Bepaling van Biofilm Initiatie on-virus geïnfecteerde cellen door bacteriën en schimmels

Vacciniavirus (VV) is op grote schaal gebruikt in biomedisch onderzoek en de verbetering van de volksgezondheid. Dit artikel beschrijft een eenvoudige, zeer efficiënte methode om de VV genoom bewerken met een CRISPR-Cas9 systeem.

Een eenvoudige en efficiënte aanpak Mutant Vaccinia Virus vectoren Construct

Dit protocol beschrijft de aanpasbare oppervlaktefunctionalisering van het desthiobiotine, streptavidine en APTES systeem om specifieke celtypen van belang te isoleren. Daarnaast behandelt dit manuscript de toepassingen, optimalisatie en verificatie van dit proces.

Een werkwijze van gerichte Cell Isolation via Glasoppervlak functionalisering

Beschreven is een methode om te kwantificeren van de expressie van genen die 96 en 18 oppervlakte eiwitten door afzonderlijke cellen ex vivo, waardoor voor de identificatie van differentially uitgedrukte genen en proteïnen in virus-geïnfecteerde cellen ten opzichte van niet-geïnfecteerde cellen. Passen we de aanpak van de studie SIV-geïnfecteerde CD4+ T cellen geïsoleerd van rhesus makaken.

Eencellige kwantificatie van mRNA en oppervlak eiwituitdrukking in Simian Immunodeficiëntie Virus-geïnfecteerde CD4+ T cellen geïsoleerd van Rhesus Makaken

Hier presenteren we de protocollen om te identificeren 1) virus-gecodeerde immunomodulators ter bevordering van arbovirus replicatie en 2) eukaryotische gastheer factoren die arbovirus replicatie beperken. Deze fluorescentie - en luminescentie gebaseerde methoden toestaan onderzoekers snel verkrijgen van kwantitatieve uitlezingen van arbovirus replicatie in simplistische testen met lage signaal-ruis verhouding.

Arbovirus infecties als Screening van hulpmiddelen voor de identificatie van de virale Immunomodulators en Host antivirale factoren

Hier beschrijven we een nieuw ontwikkelde multiplex fluorescerende immunoassay die gebruikmaakt van een dual-reporter flowcytometrisch systeem om tegelijkertijd twee unieke spike-eiwitepitopen te detecteren op intacte virale deeltjes van het severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) die waren opgevangen door angiotensine-converterend enzym-2-gekoppelde magnetische microsferen.

Profilering van oppervlakte-eiwitepitopen op virale deeltjes door multiplex dual-reporter-strategie

Leer FSL-constructen voor oppervlaktemodificatie van levende cellen en virussen zonder vitaliteit te beïnvloeden. Deze methode biedt snelle, flexibele labeling voor biotechnologisch onderzoek.

FSL Constructen: Een eenvoudige methode voor het wijzigen van Cell / Virion Oppervlakken met een bereik van biologische merkers zonder dat hun levensvatbaarheid (Video) | JoVE Journal

FSL Constructen: Een eenvoudige methode voor het wijzigen van Cell / Virion Oppervlakken met een bereik van biologische merkers zonder dat hun levensvatbaarheid

Meer video's verkennen